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UHPLC和高分辨率臺式質(zhì)譜儀聯(lián)用分析霉酚酸酯的降解產(chǎn)物
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本文由 賽默飛色譜質(zhì)譜及痕量元素分析 整理匯編
2024-09-12 18:32 460閱讀次數(shù)
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UHPLC和高分辨率臺式質(zhì)譜儀聯(lián)用分析霉酚酸酯的降解產(chǎn)物
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UHPLC和高分辨率臺式質(zhì)譜儀聯(lián)用分析霉酚酸酯的降解產(chǎn)物
- UHPLC和高分辨率臺式質(zhì)譜儀聯(lián)用分析霉酚酸酯的降解產(chǎn)物[詳細(xì)]
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2024-09-12 18:32
實驗操作
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賽默飛UHPLC和高分辨率質(zhì)譜儀聯(lián)用分析霉酚酸酯的降解產(chǎn)物
- 前言強制降解實驗?zāi)芙沂靖鞣N環(huán)境因素對原料藥和制劑的影響。它能提供藥品安全信息、確定推薦儲存條件、保質(zhì)期和分析方法的特異性。而降解產(chǎn)物的信息能幫助改進化合物或配方的發(fā)展。霉酚酸酯(MMF)的商標(biāo)名稱為驍悉(CellCept),是一種免疫YZ劑和霉酚酸(MPA)的前體藥物。MMF廣泛的應(yīng)用在ZL排異反應(yīng)和自體免疫疾病的移植藥物中。本研究選擇MMF作為模型化合物。本文開發(fā)了一種快速可靠的分析霉酚酸酯降解產(chǎn)物的完整工作流程,使用的儀器是賽默飛世爾科技的AccelaTMUHPLC系統(tǒng)和臺式OrbitrapQExactiveTM質(zhì)譜儀,數(shù)據(jù)處理采用MassFrontierTM軟件。霉酚酸酯在熱和過氧化物催化下的降解研究的pH值設(shè)定為2.0、3.5、6.0和8.2。采用HRAM全掃描和數(shù)據(jù)依賴MS/MS在高分辨率和極性切換模式下實現(xiàn)降解產(chǎn)物的快速鑒定。HRAMMS和MS/MS譜圖以及正/負(fù)離子模式切換,能可靠完成降解產(chǎn)物的定性和結(jié)構(gòu)鑒定。[詳細(xì)]
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2018-08-10 10:58
產(chǎn)品樣冊
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賽默飛超高液相色譜儀聯(lián)用Q Exactive 分析霉酚酸酯的降解產(chǎn)物
- 引言強制降解實驗?zāi)芙沂靖鞣N環(huán)境因素對原料藥和制劑的影響。它能提供藥品安全信息、確定推薦儲存條件、保質(zhì)期和分析方法的特異性。而降解產(chǎn)物的信息能幫助改進化合物或配方的發(fā)展。霉酚酸酯(MMF)的商標(biāo)名稱為驍悉(CellCept),是一種免疫YZ劑和霉酚酸(MPA)的前體藥物。MMF廣泛的應(yīng)用在ZL移植排異反應(yīng)和自體免疫疾病的移植藥物中,為本研究選擇的模型化合物。本文采用高分辨臺式質(zhì)譜儀QExactiveFocus開發(fā)了一種快速可靠的分析霉酚酸酯降解產(chǎn)物的完整工作流程,采用HRAM全掃描和數(shù)據(jù)依賴MS/MS在高分辨率和極性切換模式下實現(xiàn)降解產(chǎn)物的快速鑒定。HRAMMS和MS/MS譜圖以及正/負(fù)離子模式切換,能可靠完成降解產(chǎn)物的定性和結(jié)構(gòu)鑒定。所用儀器:高分辨臺式質(zhì)譜儀QExactiveFocus[詳細(xì)]
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2018-08-10 10:58
產(chǎn)品樣冊
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氣質(zhì)聯(lián)用儀測定六氟化硫降解產(chǎn)物
- 氣質(zhì)聯(lián)用儀測定六氟化硫降解產(chǎn)物[詳細(xì)]
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2024-09-27 23:54
課件
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UHPLC 方法對柑橘類的初級和次級代謝產(chǎn)物進行全面分析
- 本文向您介紹使用島津NexeraMethodScoutingSystem(全方位的方法探索系統(tǒng))和LC/MS/MS對食品中的初級代謝產(chǎn)物和次級代謝產(chǎn)物(有機酸、氨基酸、糖、類胡蘿卜素、類黃酮的主要化合物)進行全面分析的方法以及對柑橘類樣品的分析示例。[詳細(xì)]
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2018-08-26 10:00
產(chǎn)品樣冊
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纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)酶聯(lián)免疫分析Elisa試劑盒
- 人纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)的含量。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)水平。用純化的人纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP),再與HRP標(biāo)記的纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)含量。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:27μg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為18μg/ml,12μg/ml,6μg/ml,3μg/ml,1.5μg/ml)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。[詳細(xì)]
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