全部評(píng)論(1條)
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- lqqqianqi 2016-12-26 00:00:00
- 提取pet28質(zhì)粒時(shí)，怎樣才能得到高的濃度 Axugen的試劑盒已經(jīng)很不錯(cuò)了，要是提不出濃度很高的質(zhì)粒，可以試試下面的一些方法： 1、增加收菌次數(shù)，相對(duì)提高了質(zhì)粒的量，這樣的話裂解液的量可以適當(dāng)增加； 2、裂解要充分，變性和復(fù)性按說(shuō)明應(yīng)該是不超過(guò)5分鐘，合理控制時(shí)間，一般在3分到4分半的時(shí)間都是可以的； 3、過(guò)柱子時(shí)，吸附的時(shí)間盡量長(zhǎng)一些，可以在這期間做做其他實(shí)驗(yàn)或者吃個(gè)飯什么的； 4、如果沒(méi)有必要，不使用去蛋白液，因?yàn)槊窟^(guò)一遍柱子，其損耗越大，不過(guò)這得根據(jù)說(shuō)明的菌種而定； 4、Z后洗脫回收的時(shí)候，要單方面提高濃度，就要適當(dāng)減少洗脫液的量，我一般都是回收到40~50 μL的，同時(shí)要增加洗脫次數(shù)，一般兩三次足矣. 如果以上方法都用遍了還無(wú)效，就應(yīng)該考慮菌種本身的問(wèn)題，是不是凍融或者傳代次數(shù)過(guò)高，導(dǎo)致質(zhì)粒本身丟失?質(zhì)粒本身在大腸桿菌的拷貝數(shù)是多少?不行的話建議重新將質(zhì)粒導(dǎo)入到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中.
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