顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器，是人類進(jìn)入原子時代的標(biāo)志。顯微鏡是人類最偉大的發(fā)明物之一，那么該如何使用顯微鏡呢？長期使用顯微鏡的小伙伴們，長期觀察目鏡筒是否會感到眼睛酸澀？想要分享視野中的發(fā)現(xiàn)時是否會困擾如何去跟別人描述新發(fā)現(xiàn)的位置？想要記錄視野圖像時是否需要反復(fù)的找合適角度拍照？

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直播課

您是否有過長時間觀察顯微鏡而眼睛酸澀？您是否有過為觀察玻片和培養(yǎng)皿而在兩臺顯微鏡之間奔波？您是否有過為觀察傳統(tǒng)顯微鏡繁冗操作而愁苦？

不必說明場全視野觀察，高清晰顯示，極簡化操作；也不必說熒光模塊自動轉(zhuǎn)換，多通道熒光疊加，圖像輔助編輯；單是正倒置一體式觀察，就備受科研工作者的青睞。

尊重傳統(tǒng)，勇于創(chuàng)新，來自ECHO公司的顯微鏡REVOLVE采用IPAD替代傳統(tǒng)目鏡，釋放您的雙眼；明場/熒光雙相機雙光源，提高觀察效果；APP軟件控制，簡化顯微操作；給您帶來不一樣的觀察體驗！

大家知道顯微觀察中，正置顯微鏡更適合于玻片觀察、油鏡觀察；倒置顯微鏡則更適合于培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶觀察、孔板觀察，不僅如此，往往還需要明場與熒光觀察。因此，一臺顯微鏡滿足以上所有需要，就顯得彌足珍貴。

直播課

實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）已成為分子生物學(xué)研究不可或缺的一種技術(shù)手段，常見應(yīng)用于基因表達(dá)分析、腫瘤疾病診斷、病原微生物檢測、食品安全分析和動植物育種等。qPCR檢測技術(shù)由于具有高靈敏度的特性，應(yīng)盡量避免操作中的實驗誤差，確保獲得可靠真實的數(shù)據(jù)。那么如何確保實驗數(shù)據(jù)的可靠性和真實性，則需要通過對qPCR關(guān)鍵數(shù)據(jù)的評估來進(jìn)行判斷。除此之外，如何分析qPCR異常數(shù)據(jù)，也是每一位qPCR實驗者需要經(jīng)歷的必要環(huán)節(jié)。

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直 播 課 

你想從Western Blot小白進(jìn)階到實驗高手嗎？想了解Z先進(jìn)的數(shù)字PCR定量技術(shù)嗎？想了解新冠病毒數(shù)字PCR檢測方案嗎？想知道不一樣的正倒置一體熒光顯微鏡嗎？想了解實時熒光定量PCR原理與分析方法嗎？你想知道的問題都在深藍(lán)云直播課堂。

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對于做分子生物學(xué)實驗的科研人員來說，引物探針是一個無比熟悉的詞語。不管是普通的PCR、實時熒光定量PCR（qPCR）還是靈敏度及jing準(zhǔn)度更高的數(shù)字PCR（dPCR），高質(zhì)量的引物和探針都是實驗成功的關(guān)鍵。

然而想要獲得的引物探針，得到一個好的實驗結(jié)果也并非那么容易。好的實驗結(jié)果千篇一律，不好的實驗結(jié)果各不相同，可能一不小心就有了非特異性產(chǎn)物或者擴增不出產(chǎn)物等等。從實驗小白到大神，不斷地學(xué)習(xí)和摸索是少不了的。針對不同的PCR在引物和探針設(shè)計上又有哪些不同呢？如何評估設(shè)計的引物和探針的質(zhì)量呢？為了讓您少走彎路，深藍(lán)云直播間與您在線交流如何獲得更優(yōu)的qPCR、dPCR引物及探針，為您的實驗助一份力！

目前，越來越多的領(lǐng)域都會用到數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)，但關(guān)于實驗細(xì)節(jié)和結(jié)果評估缺少一個共識。在很多發(fā)表的文章中都缺乏足夠的dPCR實驗細(xì)節(jié)，這樣不利于評審文章，甚至難以根據(jù)文章重復(fù)實驗。

為了讓大家更好地遵循MIQE進(jìn)行實驗，科學(xué)家依托于法國Stilla Technologies的Naica數(shù)字PCR平臺發(fā)布了一篇文章Reproducible and Sensitive Assays using 3-and 6-colour Crystal Digital PCR? for Detecting Point Mutations in Human Breast Cancer，通過6色熒光數(shù)字PCR技術(shù)檢測了乳腺癌相關(guān)靶點，并借此闡述了整個數(shù)字PCR操作流程以及如何運用MIQE。

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PCR技術(shù)以特異性的寡核苷酸引物放大擴增特定的DNA片段，一對引物在單次反應(yīng)擴增單個基因。通常每個靶標(biāo)分別進(jìn)行檢測，即單重PCR反應(yīng)，但當(dāng)我們需要檢測多個靶標(biāo)基因時，單重PCR費時費力同時無法排除不同樣品孔間的加樣差異，如內(nèi)參基因的歸一化檢測，需要在同一反應(yīng)管中檢測內(nèi)參基因和目標(biāo)基因，多重PCR實驗無疑是最簡單直接的解決方案。

多重PCR也稱復(fù)合PCR,是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上改進(jìn)并發(fā)展起來的一種PCR擴增技術(shù),即可在一個反應(yīng)體系中加入兩對以上引物,同時擴增出多個核酸片段。在熒光定量PCR（qPCR）和數(shù)字PCR（digital PCR）技術(shù)中，多重PCR設(shè)計配合多熒光通道可以進(jìn)行更多靶標(biāo)的相對于標(biāo)準(zhǔn)品的檢測和直接的JD定量檢測，既具有單重PCR的敏感性和特異性，同時又比單重PCR更加GX、快捷和經(jīng)濟。

多重PCR實驗具體如何進(jìn)行？又有哪些注意事項？實時熒光定量PCR和數(shù)字PCR如何和多重PCR結(jié)合？北京深藍(lán)云生物科技有限公司云課堂將為您答疑解惑。

想要了解更多關(guān)于單重PCR和多重PCR實驗設(shè)計的相關(guān)信息，快來參加5月13號的直播課堂吧！

掃描二維碼進(jìn)入直播間

做蛋白研究的小伙伴都知道，一個完整的Western Blot包括了很多個步驟，從蛋白提取到配膠、上樣電泳，再到轉(zhuǎn)膜、封閉，Z后孵育一抗二抗后才能進(jìn)行檢測。時間跨度非常長，而且這中間的每一步都包含了很多的小細(xì)節(jié)，稍有不慎就會導(dǎo)致結(jié)果出錯，然后又得從頭來過。所以，關(guān)于WB，幾乎每一經(jīng)驗豐富的實驗老手都有著一本厚厚的血淚史。

基因編輯技術(shù)指能夠讓人類對目標(biāo)基因進(jìn)行“編輯”，實現(xiàn)對特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技術(shù)自問世以來，就有著其它基因編輯技術(shù)無可比擬的優(yōu)勢，技術(shù)不斷改進(jìn)后，更被認(rèn)為能夠在活細(xì)胞中最有效、最便捷地“編輯”任何基因。

但是在CRISPR基因編輯之后，工作并沒有結(jié)束，你需要驗證感興趣的基因是否成功突變。想知道如何利用高靈敏度、高jingzhun度的數(shù)字PCR技術(shù)來檢測基因編輯嗎？快來參加本次深藍(lán)云直播課堂吧！

血腦屏障 (BBB) 是哺乳動物的一種特殊結(jié)構(gòu)，通過調(diào)節(jié)血液和血液之間離子、氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的流入和流出，將大腦與血液分開，并維持zhongshu神經(jīng)系統(tǒng) (CNS) 的穩(wěn)態(tài)。該屏障主要由腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (BMEC)、星形膠質(zhì)細(xì)胞和周細(xì)胞組成。

轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGFβ1) 是轉(zhuǎn)化生長因子β (TGFβ) 家族成員之一，是一種多效性細(xì)胞因子，在多種病理和生理過程中發(fā)揮重要作用。

Hedgehog信號通路是重要的信號傳導(dǎo)通路，在多個物種中是保守的，并且在生理和病理過程的許多方面發(fā)揮著重要作用。典型Hedgehog信號由三種分泌配體Shh、Ihh和Dhh激活，細(xì)胞間信號由轉(zhuǎn)錄因子Gli1、Gli2和Gli3轉(zhuǎn)導(dǎo)。在zhongshu神經(jīng)系統(tǒng)中，Hedgehog信號通路決定了神經(jīng)管的形成和發(fā)育。

目前，已有研究表明Hedgehog信號與TGFβ1級聯(lián)反應(yīng)在癌癥發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的相互作用。那么Hedgehog信號和TGFβ1級聯(lián)反應(yīng)之間的串?dāng)_是否會影響血腦屏障的功能呢，目前還尚不清晰。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室和湖北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點實驗室聯(lián)合在Brain Sciences雜志上發(fā)表了一篇名為《Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood–Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells》，該文闡明了TGFβ1 介導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和大腦內(nèi)皮細(xì)胞之間的細(xì)胞間交流，這一發(fā)現(xiàn)將拓寬關(guān)于血腦屏障內(nèi)穩(wěn)態(tài)的現(xiàn)有知識，也可能有助于進(jìn)一步改善血腦屏障功能障礙的治療策略。

作者通過構(gòu)建人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (hBMECs) 與U251的單培養(yǎng)和共培養(yǎng)模型，證實了星形膠質(zhì)細(xì)胞衍生的TGFβ1增強了BMECs的屏障功能。實時熒光定量PCR、免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附試驗等多種實驗表明TGFβ1在BMECs中觸發(fā)Smad2/3的激活增加了Gli2的表達(dá)，Gli2是Hedgehog信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。Gli2與ZO-1啟動子結(jié)合，增強ZO-1的表達(dá)，從而維持血腦屏障。星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的TGFβ1觸發(fā)BMECs中的TGFβ1-TGFBRII-Smad2/3-Gli1/2-ZO-1軸并維持正常的BBB功能。

文中作者通過免疫熒光技術(shù)，利用Echo Revolve正倒置一體顯微鏡進(jìn)行免疫熒光觀察。使用50ng/mL的重組TGFβ1 (rTGFβ1) 來刺激單層hBMECs，BMECs用綠色CD31標(biāo)記，結(jié)果表明與對照組相比，ZO-1表達(dá)顯著增加。

用4mg/kg的TGFβ/Smads信號抑制劑SD208處理小鼠，圖中虛線環(huán)表示BMECs中的Gli1或Gli2的表達(dá)量，結(jié)果表明與對照組相比，ZO-1、 Gli1和Gli2表達(dá)量均減少。

內(nèi)皮屏障功能方面發(fā)揮重要作用，提高了對血腦屏障功能的研究。這一發(fā)現(xiàn)也可能表明未來有可能使用TGFβ1和Hedgehog信號級聯(lián)來輔助治療血腦屏障功能障礙。

參考文獻(xiàn)：

Fu J, Li L, Huo D, et al. Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood-Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells. Brain Sci. 2021;11(1):77. Published 2021 Jan 8. doi:10.3390/brainsci11010077

課程大綱與簡介

1.原子吸收分光光度計基本原理和結(jié)構(gòu)

2.火焰法中常見的問題與解決方案

3.石墨爐法中常見的問題與解決方案

課程亮點

1.出現(xiàn)進(jìn)樣問題時，如何進(jìn)行問題排除和解決？

2.出現(xiàn)低靈敏度、線性差，重現(xiàn)性和回收率不良等問題時應(yīng)采取哪些措施？

直播時間：3月17日  15:00-16:00

培訓(xùn)費用：免費

聽課方式：日立微學(xué)院（提交表單后掃碼進(jìn)群）

為了給您帶來更優(yōu)質(zhì)的服務(wù)，感謝您抽出1分鐘填寫表單完善需求。

表單地址：https://jinshuju.net/f/h2e7Gt

在之前發(fā)表的文章《實時熒光定量PCR檢測方法，你選對了嗎?》中提到，實時熒光定量PCR常用的方法包括了SYBR Green染料法、TaqMan探針法、分子信標(biāo)、熒光共振能量傳遞(FRET)和LUX Primers等。那么應(yīng)用最為廣泛的則是SYBR Green染料法和TaqMan探針法，兩者各有所長。今天，先給大家介紹TaqMan探針法，它優(yōu)秀在哪里？

TaqMan 探針法

最關(guān)鍵的Taqman探針，是一條與靶序列特異性結(jié)合的寡核苷酸序列，其能夠結(jié)合到正反向引物結(jié)合區(qū)域的中間部位，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，DNA聚合酶在延伸到探針位置時會將其水解，從而釋放熒光基團，擴增產(chǎn)物產(chǎn)生信號。

TaqMan探針法的優(yōu)勢

?  高特異性，只有在探針和靶標(biāo)基因之間發(fā)生特異性的水解，才會生成熒光信號。

?  多重分析，可選擇不同的報告基因染料標(biāo)記探針，在一個反應(yīng)管內(nèi)擴增并檢測多個不同的序列。

?  無需PCR后處理，減少分析工作量并節(jié)省材料成本。

探針序列的設(shè)計原則

1. TaqMan探針的長度zuihao不超過30bp。理想情況下，有15bp可獲得ZJ特異性；

2. Tm值在67℃-72℃之間，確保探針的Tm值比引物的高5-10℃，在退火過程中優(yōu)先結(jié)合到模板上；

3. 探針序列的GC含量在20％至80％之間，避免多個重復(fù)的堿基出現(xiàn)，尤其要避免4個或超過4個的G堿基；

4. 探針盡量避免出現(xiàn)二聚體或者發(fā)夾結(jié)構(gòu)，以保證足夠高的模板結(jié)合效率；

5. 探針5’端不能為G，因為即使單個G堿基與FAM熒光報告基團相連時，G也可以淬滅FAM基團所發(fā)出的熒光信號，從而導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)。

引物探針設(shè)計不再犯愁

深藍(lán)云生物為您提供Gene-π網(wǎng)站在線設(shè)計引物探針，可為您快速設(shè)計引物探針并進(jìn)行評估，復(fù)制鏈接可進(jìn)行查詢：https://www.gene-pi.com/item/primers-and-probes-2/

如何選擇熒光基團和淬滅基團

修飾基團的選擇是探針法的重要環(huán)節(jié)，那么我們需要注意以下幾項：

1. 根據(jù)熒光定量PCR儀熒光通道，選擇適配的熒光基團，優(yōu)先選擇常用的熒光基團，如FAM、VIC或CY5等；

2. 根據(jù)熒光基團類型選擇淬滅基團。早期的淬滅基團TAMRA，自身會發(fā)出熒光信號，干擾檢測結(jié)果，后續(xù)慢慢地被其他淬滅基團替代。目前淬滅基團最常用的就是BHQ、NFQ-MGB或QSY等；

3. 進(jìn)行多重qPCR檢測時，每個通道要選擇不同的熒光基團，且避免各標(biāo)記基團的激發(fā)和發(fā)射波長重疊，出現(xiàn)熒光干擾的情況。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR

來自美國Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)，為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根據(jù)實驗需求靈活配置。

除此之外，Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)融合了高品質(zhì)Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸?shù)墓鈱W(xué)檢測系統(tǒng)，可為您的科學(xué)研究就提供高jingzhun、高靈敏可靠結(jié)果。

?   數(shù)據(jù)可靠性

連續(xù)1000次實驗后，結(jié)果高度一致，溫控jingzhun，性能穩(wěn)定可靠。

?  應(yīng)用靈活性

提供多種qPCR應(yīng)用分析，定制化報告。

?   流程智能化

中英文用戶界面，觸控操作，可多機聯(lián)用。

?   交互靈活性

主機可獨立運行qPCR程序，電腦、Wi-Fi、網(wǎng)絡(luò)交互。

做Western Blot的小伙伴，是不是還在為選擇何種歸一化方法而糾結(jié)，看家蛋白還是總蛋白？期刊都推薦總蛋白了，那看家蛋白數(shù)據(jù)還能用嗎？看家蛋白有哪些優(yōu)點和挑戰(zhàn)，需要注意什么？如何選擇看家蛋白呢？如選擇總蛋白歸一化，用什么總蛋白試劑進(jìn)行歸一化，如何進(jìn)行歸一化，優(yōu)點和挑戰(zhàn)是什么？

本周邀請Azure Biosystems產(chǎn)品應(yīng)用專家劉楚珠給正在迷茫中的小伙伴解惑。

直 播 課

同學(xué)們又是做qPCR實驗的一天，有沒有懷著忐忑又期待的心情去點開“analysis”的呢？點開之后，發(fā)現(xiàn)擴增曲線不正常，或者Cq值過大，又或者SD值太高，那這樣的實驗結(jié)果還靠譜嗎？現(xiàn)在讓小編來告訴你，qPCR實驗的成功與否，關(guān)鍵在于各組數(shù)據(jù)是否達(dá)到判定標(biāo)準(zhǔn)以及是否符合實驗預(yù)期，小小的qPCR實驗它可以變得很簡單，也可以變得很復(fù)雜，如何抓住qPCR數(shù)據(jù)分析的關(guān)鍵，是分析qPCR結(jié)果可信度的diyi步。

qPCR數(shù)據(jù)分析的關(guān)鍵

qPCR數(shù)據(jù)分析主要是利用Cq值進(jìn)行計算，所以我們需要了解qPCR反應(yīng)中幾個重要的參數(shù)，根據(jù)參數(shù)的表現(xiàn)來進(jìn)行實驗評估：

擴增曲線：圖1反映的是熒光信號變化量的對數(shù)與qPCR反應(yīng)循環(huán)數(shù)的關(guān)系。圖2反映的是隨著qPCR反應(yīng)的進(jìn)行相應(yīng)的熒光信號的變化，比較直觀，但是指數(shù)期很短。標(biāo)準(zhǔn)的擴增曲線是呈現(xiàn)出“S”型，具有特征性的形狀：首先背景信號，然后是三個增長階段（指數(shù)增長期、線性增長期和平臺期）。

圖1：擴增曲線對數(shù)圖譜。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

圖2：擴增曲線線性圖譜。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

基線：通常3-15個循環(huán)時，熒光信號變化不大，變化趨勢接近于一條直線，即擴增曲線的水平部分，這樣的直線就是基線。同一次反應(yīng)中針對不同的基因需單獨設(shè)置基線。

閾值：是一個熒光強度值，穿過閾值與X軸平行的直線稱為閾值線，自動設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。手動設(shè)置是置于指數(shù)擴增期，剛好可以清楚地看到熒光信號明顯增強。同一次反應(yīng)中針對不同的基因可單獨設(shè)置閾值，但對于同一個基因擴增一定要用同一個閾值。

Cq值：qPCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)過的擴增循環(huán)次數(shù)，與起始濃度的對數(shù)成線性關(guān)系。分析定量時一般取Cq:15-35，太大或者太小都會導(dǎo)致定量的不準(zhǔn)確。

圖3：擴增曲線。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

評估qPCR反應(yīng)的效果

1、擴增效率及相關(guān)系數(shù)

為了正確地評估PCR擴增效率，至少需要做3次平行重復(fù)，并至少做5個數(shù)量級倍數(shù)(5logs)連續(xù)梯度稀釋模板濃度。擴增效率E在90-110%之間時，認(rèn)為擴增接近理想情況。

R2值：評估PCR效率的另一個關(guān)鍵參數(shù)，它是說明兩個數(shù)值之間相關(guān)程度的統(tǒng)計學(xué)術(shù)語。如果R2等于1，則可以用Y值（Cq）來準(zhǔn)確預(yù)測X值（初始模板量）。反之，如果R2等于0，就不能通過Y值來預(yù)測X值。一般認(rèn)為，標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2值大于0.98時，兩個數(shù)值之間相關(guān)的可信度很好。

圖4：標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

2、重復(fù)性

重復(fù)性即是指精確度，反映多次測量值之間的接近程度。標(biāo)準(zhǔn)偏差（standarddeviation，偏差的平方根）是最常用的精確度計量方法。如果許多數(shù)據(jù)點都靠近平均值，那么標(biāo)準(zhǔn)偏差就??；如果許多數(shù)據(jù)點都遠(yuǎn)離平均值，則標(biāo)準(zhǔn)偏差就大。例如，假設(shè)PCR反應(yīng)效率是100%，那么2倍稀釋點之間的平均Cq間隔應(yīng)該恰為1個Cq值。要以99.7%的幾率分辨2倍稀釋濃度，標(biāo)準(zhǔn)偏差就必須小于等于0.167。為了能夠在95%以上的情況下分辨出2倍稀釋，標(biāo)準(zhǔn)偏差必須小于等于0.250?？偟膩碚f，重復(fù)孔之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于0.2，說明實驗的重復(fù)性較好。

圖5：8個重復(fù)孔的擴增曲線。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

3、重現(xiàn)性

指不同批次之間或不同實驗室之間qPCR結(jié)果的變化，通常表示為拷貝數(shù)或Cq值的SD或CV。

圖6：4臺獨立的Azure Cielo 儀器上檢測GAPDH，Cq =20.11，SD= 0.002。

4、靈敏度

分析靈敏度是指一個樣本中可通過實驗精確測量的最小拷貝數(shù)，而臨床靈敏度是指在特定疾病患者們中，被檢測確定為陽性的百分比。靈敏度為limit of detection（LOD），即在給定的分析程序中，可以確定且合理（通常使用95%的概率）檢測得到的濃度，可通過梯度稀釋樣品來確定ZD檢測限。LOD理論上最小是3 copy/aliquot，這是由遵從泊松分布的取樣誤差導(dǎo)致的。假設(shè)符合泊松分布，那PCR有95%的可能性至少包含和檢測到1個拷貝。

圖7：5個數(shù)量級的動態(tài)范圍檢測。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

5、準(zhǔn)確度

反映測量值和真實值的接近程度，以倍數(shù)變化或拷貝數(shù)進(jìn)行估算。

6、特異性

指qPCR實驗中只可以檢測到目的基因，引物特異性擴增靶序列，而不會擴增其他基因序列?？赏ㄟ^凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物是否為單一條帶，或通過qPCR反應(yīng)，根據(jù)溶解曲線是否具有單峰來判斷。

圖8：溶解曲線。圖源：Azure Cielo qPCR系統(tǒng)。

Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)

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Azure  Cielo?性能展示

?   高重現(xiàn)性和穩(wěn)定性

連續(xù)1000次實驗后，結(jié)果高度一致
GAPDH定量，Cq值=22.4±0.01

?  高重復(fù)性

重復(fù)孔的擴增曲線高度重合

96孔重復(fù)結(jié)果（GAPDH），Cq平均值=19.1，

變異系數(shù)（Cv）=0.002。

?   高分辨率

準(zhǔn)確區(qū)分2倍濃度差異樣品

人內(nèi)參cDNA（GAPDH）進(jìn)行10個梯度，

2倍稀釋，3個重復(fù)，線性擬合度

R2=0.998，擴增效率E=99.89%