血腦屏障 (BBB) 是哺乳動物的一種特殊結(jié)構(gòu)，通過調(diào)節(jié)血液和血液之間離子、氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的流入和流出，將大腦與血液分開，并維持zhongshu神經(jīng)系統(tǒng) (CNS) 的穩(wěn)態(tài)。該屏障主要由腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (BMEC)、星形膠質(zhì)細(xì)胞和周細(xì)胞組成。

轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGFβ1) 是轉(zhuǎn)化生長因子β (TGFβ) 家族成員之一，是一種多效性細(xì)胞因子，在多種病理和生理過程中發(fā)揮重要作用。

Hedgehog信號通路是重要的信號傳導(dǎo)通路，在多個物種中是保守的，并且在生理和病理過程的許多方面發(fā)揮著重要作用。典型Hedgehog信號由三種分泌配體Shh、Ihh和Dhh激活，細(xì)胞間信號由轉(zhuǎn)錄因子Gli1、Gli2和Gli3轉(zhuǎn)導(dǎo)。在zhongshu神經(jīng)系統(tǒng)中，Hedgehog信號通路決定了神經(jīng)管的形成和發(fā)育。

目前，已有研究表明Hedgehog信號與TGFβ1級聯(lián)反應(yīng)在癌癥發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的相互作用。那么Hedgehog信號和TGFβ1級聯(lián)反應(yīng)之間的串?dāng)_是否會影響血腦屏障的功能呢，目前還尚不清晰。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和湖北省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合在Brain Sciences雜志上發(fā)表了一篇名為《Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood–Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells》，該文闡明了TGFβ1 介導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和大腦內(nèi)皮細(xì)胞之間的細(xì)胞間交流，這一發(fā)現(xiàn)將拓寬關(guān)于血腦屏障內(nèi)穩(wěn)態(tài)的現(xiàn)有知識，也可能有助于進(jìn)一步改善血腦屏障功能障礙的治療策略。

作者通過構(gòu)建人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (hBMECs) 與U251的單培養(yǎng)和共培養(yǎng)模型，證實(shí)了星形膠質(zhì)細(xì)胞衍生的TGFβ1增強(qiáng)了BMECs的屏障功能。實(shí)時熒光定量PCR、免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等多種實(shí)驗(yàn)表明TGFβ1在BMECs中觸發(fā)Smad2/3的激活增加了Gli2的表達(dá)，Gli2是Hedgehog信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。Gli2與ZO-1啟動子結(jié)合，增強(qiáng)ZO-1的表達(dá)，從而維持血腦屏障。星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的TGFβ1觸發(fā)BMECs中的TGFβ1-TGFBRII-Smad2/3-Gli1/2-ZO-1軸并維持正常的BBB功能。

文中作者通過免疫熒光技術(shù)，利用Echo Revolve正倒置一體顯微鏡進(jìn)行免疫熒光觀察。使用50ng/mL的重組TGFβ1 (rTGFβ1) 來刺激單層hBMECs，BMECs用綠色CD31標(biāo)記，結(jié)果表明與對照組相比，ZO-1表達(dá)顯著增加。

用4mg/kg的TGFβ/Smads信號抑制劑SD208處理小鼠，圖中虛線環(huán)表示BMECs中的Gli1或Gli2的表達(dá)量，結(jié)果表明與對照組相比，ZO-1、 Gli1和Gli2表達(dá)量均減少。

內(nèi)皮屏障功能方面發(fā)揮重要作用，提高了對血腦屏障功能的研究。這一發(fā)現(xiàn)也可能表明未來有可能使用TGFβ1和Hedgehog信號級聯(lián)來輔助治療血腦屏障功能障礙。

參考文獻(xiàn)：

Fu J, Li L, Huo D, et al. Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood-Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells. Brain Sci. 2021;11(1):77. Published 2021 Jan 8. doi:10.3390/brainsci11010077

導(dǎo)讀

上皮性卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中死亡率高。轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者預(yù)后不良的主要原因。表觀遺傳和蛋白質(zhì)翻譯后修飾在腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用。作為 IIa 類組蛋白去乙?；傅某蓡T，組蛋白去乙?；?9 (HDAC9) 通過使組蛋白和非組蛋白去乙酰化參與許多生物過程。

吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系病理生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究人員在Biomedicines上發(fā)表了題為《HDAC9 Contributes to Serous Ovarian Cancer Progression through Regulating Epithelial–Mesenchymal Transition》的文章。文中應(yīng)用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進(jìn)行免疫熒光的成像。

研究亮點(diǎn)：

?   對A2780 和 SKOV3 細(xì)胞中FOXO1的免疫熒光染色圖像的觀察發(fā)現(xiàn)， HDAC9的變化對FOXO1易位和核積累的影響，還展示了FOXO1在A2780和SKOV3中的亞細(xì)胞定位。

?  對A2780 和 SKOV3 細(xì)胞中 β-連環(huán)蛋白的免疫熒光染色的觀察發(fā)現(xiàn)，HDAC9的變化對β-連環(huán)蛋白易位和核積累的影響，還展示了β-連環(huán)蛋白在A2780和SKOV3中的亞細(xì)胞定位。

? 免疫熒光成像清晰準(zhǔn)確，底噪干擾小，自動進(jìn)行多通道結(jié)果合成，快速得到共定位的merge圖像。

文中所有的免疫熒光結(jié)果均是使用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進(jìn)行的快速清晰的成像，揭示了HDAC9的調(diào)整對FOXO1蛋白和β-連環(huán)蛋白的亞細(xì)胞定位的影響，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)HDAC9可能通過上調(diào) TGF-β 信號（HDAC9 可能通過增加 FOXO1 的核積累來促進(jìn) TGF-β 的表達(dá)）傳導(dǎo)促進(jìn) SKOV3 細(xì)胞中的 EMT以及HDAC9 可通過抑制 β-連環(huán)蛋白信號傳導(dǎo)抑制 A2780 細(xì)胞中的 EMT。

研究成果：

▲ 圖1.HDAC9 調(diào)節(jié)FOXO1蛋白在 SKOV3 細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位。（A）Western blotting測定A2780和SKOV3細(xì)胞中FOXO1的表達(dá)。( B , C ) 轉(zhuǎn)染24 h后，通過Western blot檢測A2780和SKOV3細(xì)胞中FOXO1的表達(dá)。( D , E ) A2780 和 SKOV3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 24 h 后 FOXO1 免疫熒光染色。（bar = 30μm）。( F , G )轉(zhuǎn)染24 h后，分離A2780和SKOV3細(xì)胞核，檢測FOXO1的表達(dá)情況。( H )Western blotting檢測HDAC3在A2780和SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)。

在漿液性卵巢癌中，過表達(dá)的 HDAC9 可以增加 FOXO1 的核定位并促進(jìn) TGF-β 的表達(dá)。HDAC9 激活 EMT 并促進(jìn)細(xì)胞遷移，這可能是由于 FOXO1/TGF-β 軸的激活。相反，在非漿液性卵巢癌中，過表達(dá)的 HDAC9 可能通過減少 β-catenin 的核積累和 β-catenin 在 Lys-49 處的乙?；瘉硪种?EMT。

▲ 圖2.HDAC9 可通過抑制 β-catenin 信號傳導(dǎo)來抑制 A2780 細(xì)胞中的 EMT。用 HDAC9 過表達(dá)構(gòu)建體、HDAC9-shRNA 質(zhì)粒 (siHDAC9-1/2) 或空載體轉(zhuǎn)染 A2780 和 SKOV3 細(xì)胞 24 小時。( A , B ) A2780 和 SKOV3 細(xì)胞中 β-連環(huán)蛋白的免疫熒光染色 (bar = 30 um)。( C )分離A2780和SKOV3細(xì)胞核，研究β-catenin的表達(dá)。( D )Western blot檢測A2780和SKOV3細(xì)胞中β-catenin和ac-β-catenin(Lys-49)的表達(dá)。

期刊介紹：

Biomedicines是一份國際、科學(xué)、同行評審、開放獲取的生物醫(yī)學(xué)期刊，每月由 MDPI 在線出版。主要致力于人類健康和疾病研究的各個方面、新治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和表征、治療策略以及自然驅(qū)動的生物醫(yī)學(xué)、藥物和生物制藥產(chǎn)品的研究。影響因子4.757，5年影響因子5.225。

前言

結(jié)核?。═B）仍然是單一傳染源的首要死亡原因。2017年，估計(jì)出現(xiàn)了超過55萬例耐多藥/利福平結(jié)核病（MDR/RR-TB）新病例，強(qiáng)調(diào)需要新的治療策略。利奈唑胺（LZD）是一種治療耐藥革蘭氏陽性感染的有效抗生素，也是結(jié)核病的有效治療方法。然而，長期使用LZD可導(dǎo)致LZD相關(guān)的宿主毒性，常見的是gusui抑制。LZD毒性可能由IL-1介導(dǎo)，IL-1是結(jié)核分枝桿菌感染期間早期免疫的重要炎癥途徑。然而，IL-1可導(dǎo)致結(jié)核病進(jìn)展后期的病理學(xué)和疾病嚴(yán)重性。

由于IL-1可能有助于LZD毒性，并確實(shí)影響結(jié)核病病理學(xué)，因此本實(shí)驗(yàn)將這一途徑作為潛在的宿主導(dǎo)向治療（HDT）的靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)假設(shè)LZD的療效可以通過調(diào)節(jié)IL-1途徑來增強(qiáng)，以減少gusui毒性和結(jié)核相關(guān)炎癥。

本文使用兩種結(jié)核病動物模型進(jìn)行研究，一種是結(jié)核病易感小鼠模型和臨床相關(guān)獼猴。在本研究中應(yīng)用Echo Revolve正倒置一體熒光顯微鏡首先對小鼠肺組織的病變情況進(jìn)行觀察，以及肺組織病變面積的測量及可視化呈現(xiàn)；其次觀察獼猴胸骨gusui組織切片，比較細(xì)胞數(shù)量和差異性變化。熒光顯微鏡觀察鼠抗CD3e、鼠抗Ly-6G抗體在肺組織中的特異性表達(dá)情況。

通過蘇木精-伊紅（HE）染色對WT或Nos2-/-小鼠的單個肺葉進(jìn)行組織病理學(xué)分析。αIL-1R1治療降低了肺臟的平均細(xì)菌負(fù)荷（圖1）。αIL-1R1治療沒有加重任何一種小鼠株的疾病。

▲ 圖1 蘇木精-伊紅（HE）染色對WT或Nos2-/-小鼠單個肺葉的組織病理學(xué)分析結(jié)果

作者使用鼠抗CD3e、鼠抗Ly-6G抗體孵育，在Echo Revolve 4熒光顯微鏡DAPI FITC和RFP3個通道下分別觀察繼發(fā)性熒光和自發(fā)性熒光，將3個通道的圖像疊加，可觀察到圖像中的紫色為抗體在肺組織中特異性表達(dá)，見圖2。

由于對Mtb感染和LZD治療產(chǎn)生的IL-1β在很大程度上取決于NLRP3炎癥體，本文還研究了一種方案，其中在感染后56天和77天之間施用LZD和小分子NLRP3yizhi劑（MCC950）。如αIL-1R1所觀察到的，與LZD單獨(dú)相比，添加MCC950減少了肺中的PMN數(shù)量，并且沒有顯著改變細(xì)菌殺滅（圖2）。

▲ 圖2 不同治療組的肺部組織免疫熒光圖像

用DAPI染色的細(xì)胞核（藍(lán)色）、用鼠抗CD3ε染色的T細(xì)胞（綠色）和用鼠抗Ly-6G染色的中性粒細(xì)胞（紅色）

為了證實(shí)我們的觀察結(jié)果，病理學(xué)家評估了獼猴gusui組織切片。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同治療組，如TB組、LZD組和LZD+IL-1Rn組在細(xì)胞數(shù)量（髓系：紅系比率）或異常方面沒有明顯差異（圖3）。

▲圖3 獼猴尸檢時獲得的胸骨gusui的代表性HE圖像

圖片中的左側(cè)圖像為20X拍攝結(jié)果，右側(cè)圖像為40X拍攝結(jié)果

研究亮點(diǎn)：

?  本文使用Echo Revolve正倒置一體熒光顯微鏡眀場清晰觀察到小鼠肺組織的病灶情況，還清晰觀察到獼猴胸骨gusui細(xì)胞分布狀況以及進(jìn)行不同治療組間細(xì)胞數(shù)量比較；眀場可一鍵快速切換到熒光成像，熒光觀察對不同治療組的肺部組織中的抗體特異性表達(dá)進(jìn)行清晰觀察。

?  闡明了小鼠和獼猴之間gusui抑制的差異突出了在人類實(shí)驗(yàn)之前評估多個模型中HDT的重要性；在兩種模型中，IL-1Rn給藥對宿主的影響，以及對Mtb和LZD功效的反應(yīng)，可以通過顯微鏡觀察兩種模型細(xì)胞中的病灶變化，細(xì)胞數(shù)量以及差異性變化來鑒定IL-1與LZD聯(lián)合抑制是否對結(jié)核病治療有效。本文研究數(shù)據(jù)為IL-1Rn作為結(jié)核病的潛在治療提供了臨床前數(shù)據(jù)。

Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡

新一代Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡，擁有流行的觸屏操控方式，配備智能熒光成像系統(tǒng)，將Z-Stacking全景深成像和DHR數(shù)字處理功能有機(jī)聯(lián)合，提升分辨率告別照片模糊，為您打造全新的成像體驗(yàn)。

       在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)靶向治療過程中，有可能會出現(xiàn)獲得性耐藥的問題。雖然目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多獲得性耐藥的驅(qū)動因素，但在治療過程中導(dǎo)致腫瘤進(jìn)化的潛在分子機(jī)制還不完全了解，治療在多大程度上通過促進(jìn)突變過程積極推動腫瘤的發(fā)展尚不明確。因此來自美國馬薩諸塞州總醫(yī)院的Hideko Isozaki和Ammal Abbasi等科學(xué)家發(fā)表了一篇名為《APOBEC3A drives acquired resistance to targeted therapies in non-small cell lung cancer》的文章，文中作者研究了在NSCLC靶向治療期間，是否有特定的突變機(jī)制驅(qū)動肺癌的基因組進(jìn)化。結(jié)果表明靶向治療誘導(dǎo)胞苷脫氨酶APOBEC3A (A3A)突變可能促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌獲得性耐藥的發(fā)展。

       作者在研究中發(fā)現(xiàn)，臨床常用的肺癌靶向治療誘導(dǎo)A3A的表達(dá)，導(dǎo)致耐藥癌細(xì)胞持續(xù)發(fā)生突變。誘導(dǎo)A3A可以促進(jìn)了藥物治療細(xì)胞中雙鏈DNA斷裂(DSBs) 的形成，從而導(dǎo)致耐藥細(xì)胞進(jìn)化過程中的染色體不穩(wěn)定性，如拷貝數(shù)改變和結(jié)構(gòu)變異。通過基因缺失或RNAi介導(dǎo)來預(yù)治療誘導(dǎo)的A3A突變可以延緩耐藥的出現(xiàn)。因此，靶向治療誘導(dǎo)A3A突變可能促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌獲得性耐藥的發(fā)展。A3A的表達(dá)或酶活性可能是一種潛在的治療策略，以預(yù)防或延遲獲得性耐藥的肺癌靶向治療。因此靶向治療誘導(dǎo)A3A突變可能促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌獲得性耐藥的發(fā)展。 A3A的表達(dá)或酶活性可能是一種潛在的治療策略，以預(yù)防或延遲獲得性耐藥的肺癌靶向治療。

       在DNA雙鏈損傷形成時,H2AX的Ser139 位點(diǎn)會被迅速磷酸化,從而形成γH2AX，γH2AX可以作為雙鏈修復(fù)的標(biāo)志物。文章中作者通過免疫熒光技術(shù)，利用ECHO Revolve正倒置一體熒光顯微鏡進(jìn)行免疫熒光觀察。在奧希替尼治療2周后，我們觀察到PC9細(xì)胞中組蛋白變體H2AX的Ser139磷酸化水平升高（圖1），說明TKI誘導(dǎo)的A3A突變導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，促進(jìn)耐藥克隆的進(jìn)化。將γH2AX映射到TKI處理的PC9細(xì)胞的細(xì)胞周期分布上顯示，γH2AX最顯著地定位于一個恢復(fù)細(xì)胞分裂并處于G2期的細(xì)胞亞群（圖2），因此，TKI治療誘導(dǎo)增殖耐藥細(xì)胞中A3A催化的基因組損傷。

▲圖1：用1 μM奧希替尼處理PC9細(xì)胞0或14天，用γH2AX染色以量化DNA損傷。NT，沒有處理；比例尺= 70μm。

▲圖2：左圖是用1 μM奧希替尼處理PC9細(xì)胞14天，用EdU/DAPI染色以分辨細(xì)胞周期，代表G1、S、G2細(xì)胞;比例尺= 10 μm。右圖是EdU細(xì)胞周期試驗(yàn)的散點(diǎn)圖，用γH2AX定量DNA損傷。NT：未處理。

       
      作者的研究結(jié)果表明，TKI治療后APOBEC突變信號的獲取可能指示了耐藥克隆的進(jìn)化路徑，并提供了一種新的機(jī)制，通過該機(jī)制，靶向治療可能在治療期間無意中增加了癌細(xì)胞的適應(yīng)性突變。因此，阻止A3A的表達(dá)或酶活性可能是一種潛在的治療策略，以預(yù)防或延遲獲得性耐藥的肺癌靶向治療。

參考文獻(xiàn)：H Isozaki, Abbasi A , Nikpour N , et al. APOBEC3A drives acquired resistance to targeted therapies in non-small cell lung cancer. 2021.

DOI:10.1101/2021.01.20.426852

Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡

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近日在《Stem Cells and Development》期刊雜志上發(fā)表題為《Bone Marrow Stromal Cell-Derived Exosomes promote muscle healing following contusion through macrophage polarization》的文章。在這項(xiàng)研究中，使用梯度離心從BMSC的上清液中分離和純化外泌體。納米粒子跟蹤分析，透射電子顯微鏡和蛋白質(zhì)印跡被用來鑒定外泌體。使用ECHO正倒置一體熒光顯微鏡對HE染色，Masson染色和免疫熒光的肌肉樣本進(jìn)行成像。ZH得到的結(jié)論：BMSC-Exos通過改變巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)YZ炎癥反應(yīng)，減輕了小鼠的肌肉挫傷損傷并促進(jìn)了肌肉的愈合。

背景介紹：

骨骼肌挫傷是運(yùn)動醫(yī)學(xué)和臨床最常見的損傷之一。由于挫傷后局部纖維化形成，受傷的肌肉很容易再次受傷，骨骼肌纖維化被證明與損傷初期的過度炎癥反應(yīng)有關(guān)，而與炎癥浸潤密切相關(guān)的巨噬細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)在骨骼肌的愈合過程中起著至關(guān)重要的作用。如何調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化仍然是肌肉愈合的重要問題。

最近的研究表明，骨sui基質(zhì)細(xì)胞源性外泌體（BMSC-Exos）可以影響炎癥和組織恢復(fù)。因此，作者假設(shè)BMSC-Exos可以通過影響巨噬細(xì)胞極化來下調(diào)炎癥反應(yīng)，從而促進(jìn)挫傷后骨骼肌的愈合。在這項(xiàng)研究中，作者從BMSC中分離了BMSC-Exos，在體內(nèi)和體外測試了它們的功能，并研究了BMSC-Exos對巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)和肌肉愈合影響的潛在機(jī)制。

實(shí)驗(yàn)方法：

通過粒度分析、透射電鏡和Western Blot方法鑒定外泌體，為了檢查靶蛋白的表達(dá)和位置，在TA（脛前?。┣衅线M(jìn)行了免疫熒光染色。使用的一抗是抗CD206，抗α-SMA，抗MyoD和抗Pax7，DAPI用于定位細(xì)胞核，通過熒光顯微鏡（ECHO Revolve，美國）觀察圖像。

結(jié)果：

總體外觀，相對重量，形態(tài)特征：挫傷損傷后3d，挫傷組的TA肌肉比BMSC-Exos組的肌肉血腫更大（圖3A）。兩組之間在第三天，TA肌肉的相對肌肉重量也顯著不同，挫傷組的TA肌肉較重（圖3B）。

對于HE染色，在陰性對照組中，肌肉纖維規(guī)則且密集地排列。但是，在挫傷組中，隨著時間的流逝，肌肉纖維變得越來越分散，許多增殖的膠原纖維占據(jù)了肌肉纖維的空間，這些現(xiàn)象在BMSC-Exos組中得到了改善。Masson染色中，在挫傷組中觀察到大量膠原纖維，而BMSC-ExosZL在所有時間點(diǎn)均顯著減少了纖維化區(qū)域（圖3C-D）。

此外，為了進(jìn)一步檢查纖維化狀況，作者對平滑肌肌動蛋白α（α-SMA）進(jìn)行了免疫熒光染色。形態(tài)學(xué)結(jié)果表明，BMSC-ExosZL顯著降低了挫傷在不同時間點(diǎn)引起的高蛋白表達(dá)和α-SMA的廣泛分布（圖4）。巨噬細(xì)胞耗竭后，BMSC-Exos的抗纖維化作用受到Y(jié)Z，挫傷和BMSC-ExosZL組在第14天均觀察到大的纖維化區(qū)域和廣泛分布的α-SMA蛋白。

為了確定衛(wèi)星細(xì)胞的不同成肌狀態(tài)，進(jìn)行了Pax7和MyoD的共定位。形態(tài)上，從受傷后3天開始，總的Pax7 + / MyoD +衛(wèi)星細(xì)胞顯著增加。顯然，BMSC-ExosZL組的數(shù)量多于挫傷組和陰性對照組。在三個不同的組中，相對的Myod蛋白表達(dá)也呈現(xiàn)出類似的趨勢（圖5D）。綜上所述，BMSC-Exos注射液可在早期促進(jìn)肌肉再生。

結(jié)論：

研究表明局部使用BMSC-Exos可以減少挫傷后的纖維化組織，增強(qiáng)肌肉再生并改善骨骼肌的生物力學(xué)特性。BMSC-Exos通過促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞極化，YZ了受傷肌肉的炎性微環(huán)境。作者的研究為BMSC-Exos在臨床實(shí)踐中可用于肌肉愈合提供了有力的支持。

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Revolve展現(xiàn)了其非凡的靈活性，可以輕松地實(shí)現(xiàn)正置和倒置顯微鏡轉(zhuǎn)換，創(chuàng)新性地把正倒置顯微鏡合二為一，開啟了顯微鏡Hybrid時代。

?   視網(wǎng)膜屏顯示技術(shù)：比擬目鏡人眼觀察效果。

?  全視野觀察：更清晰，更方便。

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大家知道顯微觀察中，正置顯微鏡更適合于玻片觀察、油鏡觀察；倒置顯微鏡則更適合于培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶觀察、孔板觀察，不僅如此，往往還需要明場與熒光觀察。因此，一臺顯微鏡滿足以上所有需要，就顯得彌足珍貴。

直播課

導(dǎo)讀

經(jīng)過前面的幾期學(xué)習(xí)，相信大家對顯微鏡的基礎(chǔ)知識已經(jīng)有了足夠的了解，自信心提的滿滿的吆！接下來就可以根據(jù)實(shí)際需求來選擇對應(yīng)的顯微鏡了。

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ECHO顯微鏡顛覆了大家對顯微鏡的認(rèn)知，是對傳統(tǒng)顯微鏡設(shè)計(jì)的重新思考，是真正意義上的設(shè)計(jì)一體化和操控顯示一體化，易學(xué)易用，使枯燥的實(shí)驗(yàn)變得簡單有趣。

高分辨率3D成像，獲得最佳成像效果

Revolve顯微鏡采用實(shí)時反卷積(DHR)，增加寬場熒光顯微鏡圖像銳度，抑制噪聲減少模糊，提高熒光檢測分辨率。自動Z軸配合實(shí)時反卷積(DHR)功能，在保持高分辨率的同時，對較厚樣本進(jìn)行全景深掃描合成，實(shí)現(xiàn)3D高分辨成像。

正倒置一體，一機(jī)兩用

Revolve顯微鏡既可以正置觀察，也可以倒置觀察，在正置和倒置之間自由轉(zhuǎn)換。使用戶不再因?yàn)闃悠返牟煌謩e購置正置和倒置兩類顯微鏡，一機(jī)實(shí)現(xiàn)切片、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶和多孔板等多種樣本類型的觀察需求。在降低設(shè)備成本的同時，也節(jié)約了空間。試問：我還需要糾結(jié)選擇買正置還是倒置嗎，當(dāng)然是都要嘍。

智能化操作，高效便捷

Revolve顯微鏡采用自動熒光的方式，可以快速捕捉熒光信號，避免熒光淬滅。自動雙相機(jī)系統(tǒng)保證了明場和熒光條件下都可以獲得好的觀察效果。智能化的軟件使操作變得更加簡單。

明場顯微鏡—Rebel

隨著Revolve的問世，ECHO顯微鏡的設(shè)計(jì)理念深受用戶的喜歡，但是對于沒有熒光需求的用戶，一款正倒置兼?zhèn)涞腞ebel足矣。

自動細(xì)胞計(jì)數(shù)軟件，無需特殊耗材

Rebel為滿足更多的用戶需求，特別開發(fā)了自動細(xì)胞計(jì)數(shù)軟件。區(qū)別于市場上的細(xì)胞自動計(jì)數(shù)儀，Rebel兼具顯微鏡與計(jì)數(shù)功能于一身。不再需要特殊的觀察耗材，可使用玻片、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等耗材進(jìn)行細(xì)胞自動計(jì)數(shù)。

高效便捷的網(wǎng)絡(luò)共享方式

Rebel還具有非常高效便捷的網(wǎng)絡(luò)共享方式，通過WIFI、Internet等多種通訊方式，可以實(shí)現(xiàn)實(shí)時實(shí)驗(yàn)教學(xué)、病例分享和多人會診。

全電動顯微鏡—Revolution

針對更高級別用戶需求，ECHO又推出了Revolve進(jìn)階版Revolution，正倒置一體化設(shè)計(jì)，帶來更多應(yīng)用場景；雙相機(jī)系統(tǒng)保證了確保效果最優(yōu)；實(shí)時反卷積功能配合高速Z-Stacking功能，提高熒光檢測的分辨率。獨(dú)特的觸屏控制XY自動載物臺功能，便于觀察樣品的定位；對于大樣品掃描成像，電動載物臺和Hyperscan功能結(jié)合,使掃描速度提升了一倍。對于活細(xì)胞的觀察，活細(xì)胞工作站和多功能智能化聯(lián)動，保證了活細(xì)胞長時間的觀察。

最后，我們一起來看一下ECHO顯微鏡下的微觀世界吧。

看到這樣一臺成像質(zhì)量好，操作簡單，適用范圍廣的顯微鏡，有沒有心動呀，想不想體驗(yàn)一下操作極簡，體驗(yàn)極佳的顯微鏡呀，想不想讓我們珍貴的實(shí)驗(yàn)樣本也有一個如此美輪美奐的瞬間，那就趕緊聯(lián)系我們，申請?jiān)囉冒?，三款產(chǎn)品，總有一個適合你的吆！

    病毒作為一種病原體一直受到學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。然而由于病毒通常尺寸較小，傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡往往難以滿足其形態(tài)觀測的需求，這使得高分辨率的透射電子顯微鏡成為了當(dāng)前病毒學(xué)研究的一個重要手段（圖1），可以用來研究病毒的結(jié)構(gòu)和成分。

    目前使用的透射電子顯微鏡進(jìn)行病毒顆粒的檢測和識別仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)。這是因?yàn)椴《镜闹饕M成部分多為含碳的輕元素有機(jī)物，這類樣品很容易被高能電子束穿過，造成其光學(xué)襯度較低，且由于共價鍵化合物的低穩(wěn)定性使得其在傳統(tǒng)電子顯微鏡的高加速電壓 (一般為80-200 kV) 下非常不穩(wěn)定，不適合直接進(jìn)行觀察。因此病毒的形態(tài)學(xué)觀察一般采用負(fù)染色成像技術(shù)，需要在觀測前對樣品進(jìn)行復(fù)雜的負(fù)染操作，占有大量的時間，且可能會掩蓋掉一些病毒的形貌特征，造成使用透射電子顯微鏡觀測病毒的門檻較高。

圖1. （A）80 kV 和 （B）5 kV加速電壓下透射電子顯微鏡下觀測到的SV40感染的小鼠胰 腺切片（Microscopy Research and Technology, DOI:10.1002/jemt.20603）

    為了解決這一難題，低壓透射電子顯微鏡（Low Voltage Electron Microscope, LVEM）應(yīng)運(yùn)而生。LVEM突破了傳統(tǒng)透射電子顯微鏡的80 kV加速電壓的Z低限，研究人員可在低壓下觀察輕質(zhì)生物樣品，無需染色，簡化了樣品制備流程；同時該設(shè)備可在保證高圖像對比度的前提下，使用溫和的加速電壓進(jìn)行病毒形態(tài)學(xué)的檢測和識別，能夠識別以往可能被污漬和負(fù)染的瑕疵所掩蓋的病毒特征。Delong Instruments公司的LVEM 5&25是一類專門針對低電壓設(shè)計(jì)研發(fā)出的透射電子顯微鏡。LVEM使用特殊設(shè)計(jì)的倒置式肖特基（Schottky）場發(fā)射電子槍，提供高亮度高相干性的電子束，這種低能電子束與樣品的相互作用比傳統(tǒng)透射電子顯微鏡中的高能電子要強(qiáng)得多，使得電子被輕質(zhì)有機(jī)材料強(qiáng)烈散射，導(dǎo)致了特征的異常分化(Microscopy Research and Technology, DOI: 10.1002/jemt.22428)。在病毒學(xué)研究方面，該設(shè)備Z大放大倍數(shù)高于通常觀測病毒所需要的大約50，000倍的放大率，且依然保持不錯的分辨率（<2 nm），可滿足病毒形態(tài)和結(jié)構(gòu)研究的需求。相比于高電壓，5kV 的加速電壓提供的電子束與樣品的作用更強(qiáng)，對密度和原子序數(shù)有更高的靈敏度，對低至0.005 g/cm3的密度差別仍能得到很好的樣品圖像對比度，有效提高了輕元素樣品的成像質(zhì)量，適合針對病毒學(xué)的研究。需要指出的是，LVEM 25與LVEM 5建立在相同的平臺之上，前者在一個稍高的加速電壓下工作，在滿足輕元素樣品觀測的要求下可進(jìn)一步提高Z終的圖像分辨率。

圖2. LVEM 5的結(jié)構(gòu)示意圖（A）和小鼠心臟超微結(jié)構(gòu)成像 (B) 。（Microscopy Research and Technology， DOI:10.1002/jemt.22659）

    LVEM 5&25顯微鏡可用于檢測腺病毒(圖3A)、HIV(圖3B)、輪狀病毒(圖3C)、球狀病毒(圖3F)、棒狀病毒(圖3 G-H)、星形病毒、杯狀病毒、諾瓦克樣病毒、皰疹病毒和乳頭瘤病毒等。另外對于類病毒載體的研究，LVEM 5&25也是一項(xiàng)利器。它能夠在不負(fù)染的情況下直接觀測類病毒載體的形態(tài)，幫助研究者快速篩選載體，解決傳統(tǒng)電鏡制樣難，機(jī)時緊張等問題(Journal of Nanobiotechnology, DOI: 10.1186/s12951-016-0241-6)。

圖3. (A-C) LVEM 5觀察多種非負(fù)染的病毒樣品; (D-E) LVEM 5&25 實(shí)物圖; (F-H) LVEM 25觀察多種負(fù)染后的病毒樣品。 圖片來源于網(wǎng)絡(luò) (www.lv-em.com)

    LVEM的高對比度成像技術(shù)匹配快速的時間-圖像周期、高通量研究，可作為一種快速診斷方法，用于識別病毒感染源和輔助病理研究，是快速檢測具有公共衛(wèi)生重要性病原體的有力工具。

    LVEM 5&25 更是一臺多種功能集成的電子顯微鏡，具有四種不同的成像模式——透射電鏡(TEM)、掃描電鏡(SEM)、掃描透射電鏡(STEM)和電子衍射(ED)，能夠?yàn)椴《緦W(xué)研究工作者同時提供多種表征所需的成像模式，全面的對病毒樣品的結(jié)構(gòu)和成分進(jìn)行分析（圖4）。

圖4. 使用LVEM 5 對HIV膜蛋白結(jié)構(gòu)同時進(jìn)行（A）TEM和（B）ED分析。（Journal of Virology，DOI:10.1128/JVI.01526-19.）

    除了擁有高質(zhì)量成像和多功能集成的特點(diǎn)外，LVEM 5&25的體積小 (無需專業(yè)實(shí)驗(yàn)室)，維護(hù)費(fèi)用低廉（無需冷卻水和專用電源），在使用期間基本不會產(chǎn)生任何額外的費(fèi)用，大大降低了研究所需的成本。另外它采用了真空自閉鎖技術(shù)，換樣僅需3分鐘，降低了儀器操作難度，對廣大的非專業(yè)用戶變得更加友善。我們相信隨著低壓透射電鏡的不斷發(fā)展，LVEM 5&25將成為一個強(qiáng)有力的工具，使得病毒形態(tài)的觀測變得越來越簡單，更多以往被傳統(tǒng)電鏡所忽略的細(xì)節(jié)結(jié)構(gòu)信息將被挖掘出來，極大的提高研究人員對病毒結(jié)構(gòu)和成分的認(rèn)知，為人們的科研和生活服務(wù)。

顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器，是人類進(jìn)入原子時代的標(biāo)志。顯微鏡是人類最偉大的發(fā)明物之一，那么該如何使用顯微鏡呢？長期使用顯微鏡的小伙伴們，長期觀察目鏡筒是否會感到眼睛酸澀？想要分享視野中的發(fā)現(xiàn)時是否會困擾如何去跟別人描述新發(fā)現(xiàn)的位置？想要記錄視野圖像時是否需要反復(fù)的找合適角度拍照？

想要知道上面問題的解決辦法嗎？那就趕緊快來參加8月25日的深藍(lán)云直播課堂吧！您想知道的答案都在本次課程里，come on！

直播課

熒光顯微鏡常與免疫組織化學(xué)和切片技術(shù)相互結(jié)合應(yīng)用于科研、檢驗(yàn)等多個領(lǐng)域，比如某一些樣品在常規(guī)光學(xué)顯微鏡下（明場下）無法被有效的觀察，再比如某種病原標(biāo)記物已做了標(biāo)識，但在顯微鏡下仍然難以辨識。而熒光標(biāo)識只在特定波長的光源激發(fā)下才會發(fā)光，而且發(fā)出的光也具有特定的波長。（廣東顯微鏡廠家-廣州市明慧科技顯微鏡）

而激光具有單一的波長，高準(zhǔn)確性等特點(diǎn)，對激發(fā)樣品有更好的選擇性，也更容易濾除激發(fā)光對熒光的干擾，因此一般熒光顯微鏡都選用激光作為激發(fā)光源，可以得到較好的成像質(zhì)量。這就有了顯微鏡熒光模塊的出現(xiàn)，顯微鏡集成熒光模塊的應(yīng)用是多方面的，作為正置顯微鏡、倒置顯微鏡、體視顯微鏡的通用型熒光模塊，標(biāo)配紫外、藍(lán)色、綠色等激發(fā)光組，通過滑塊/拉桿/旋鈕/旋鈕輕松切換激發(fā)光進(jìn)行熒光或明場觀察，廣泛應(yīng)用于呼吸道疾病、生殖道疾病、結(jié)核桿菌、自身免疫性疾病等領(lǐng)域的熒光檢測。（廣東顯微鏡廠家-廣州市明慧科技顯微鏡）

熒光模塊設(shè)計(jì)升級顯微鏡熒光功能特點(diǎn)：
LED即開即用，開機(jī)無須預(yù)熱；使用壽命長；
大功率LED熒光光源，使用壽命長，無需更換燈泡，人工維護(hù)成本低；
通過電源適配器實(shí)時顯示通道和亮度情況；
多個高效熒光波段可供選擇，可用于不同領(lǐng)域的熒光檢測；
雙光路熒光集成模塊化設(shè)計(jì)產(chǎn)品。轉(zhuǎn)盤切換4孔位熒光通道，聯(lián)動LED照明激發(fā);
卡口及濾光片均采用大口徑，保證激發(fā)光更均勻，視野更光寬，成像更清晰；
滿足大部分科研要求，支持特殊波段需求定制；
滿足國內(nèi)外大部分品牌顯微鏡定制，輕松為普通顯微鏡實(shí)現(xiàn)熒光觀察一大功能。
熒光模塊設(shè)計(jì)升級顯微鏡熒光功能，基于外形精簡、操作安裝簡便的設(shè)計(jì)理念，將驅(qū)動電源、聚光光路及熒光濾光組整合為一體，有單色熒光、雙色熒光及多色熒光等多種配置方案可選，支持特殊波段需求定制，實(shí)現(xiàn)熒光、明場切換觀察，優(yōu)于汞燈的激發(fā)光強(qiáng)度，為弱熒光樣品觀測實(shí)現(xiàn)更為清晰、明亮的熒光成像。顯微鏡熒光模塊能夠滿足大部分的熒光科研實(shí)驗(yàn)需求，輕松結(jié)合不同品牌的顯微鏡，無需改變顯微鏡原有的光學(xué)系統(tǒng)，支持特殊波段需求定制，給普通的顯微鏡“一鍵”升級熒光。（廣東顯微鏡廠家-廣州市明慧科技顯微鏡）

導(dǎo)讀

大家或許聽到過這樣一首歌：零點(diǎn)睡六點(diǎn)起，ICU里喝小米；一點(diǎn)睡六點(diǎn)起；閻王夸我好身體；兩點(diǎn)睡覺六點(diǎn)起，骨灰盒子長方體；三點(diǎn)睡覺六點(diǎn)起，墓碑和我綁一起。熬夜如今已成為現(xiàn)代年輕人不可或缺的一種常態(tài)，明知熬夜傷身體，但管不住自己?。?/p>

生物鐘是一種進(jìn)化保守的轉(zhuǎn)錄-翻譯調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，與身體代謝調(diào)節(jié)密切相關(guān)。從多數(shù)積累的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃土餍胁W(xué)研究中的證據(jù)表明，生物鐘調(diào)節(jié)機(jī)制的中斷會導(dǎo)致肥胖和胰島素含量偏高。

匹茲堡大學(xué)某研究團(tuán)隊(duì)在期刊Molecular And Cellular Endocrinology發(fā)表了一篇名為《Chronic circadian shift leads to adipose tissue inflammation and fibrosis》的文章，該團(tuán)隊(duì)之前的研究發(fā)現(xiàn)，重要的時鐘轉(zhuǎn)錄激活因子Bmal1是脂肪形成的關(guān)鍵調(diào)控因子，在此基礎(chǔ)上，該研究團(tuán)隊(duì)使用環(huán)境光照誘導(dǎo)時鐘節(jié)律的中斷，再用Echo顯微鏡去觀察小鼠長達(dá)6個月的慢性時鐘失調(diào)導(dǎo)致的相關(guān)細(xì)胞形態(tài)變化以及局部組織炎癥和纖維化情況，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，該研究初步確定了慢性時鐘節(jié)律失調(diào)會引起顯著的脂肪組織功能障礙，這可能也是晝夜節(jié)律失調(diào)導(dǎo)致了胰島素抗性高的基礎(chǔ)。

文章相關(guān)結(jié)果：

在本研究中，我們測試了環(huán)境光照移位誘導(dǎo)的時鐘干擾是否會影響脂肪組織生長。我們設(shè)計(jì)了一個輪班計(jì)劃，如圖1A所示。這種輪班方案旨在引起類似于環(huán)境晝夜失調(diào)的zhongshu和外周晝夜時鐘不同步，我們之前證明了類似的5周方案導(dǎo)致β細(xì)胞時鐘失調(diào)。兩組分別在正常周期的第二天上午8點(diǎn)（ZT3）和下午5點(diǎn)（ZT12）采集樣本，如圖所示（圖1A)。這些時間點(diǎn)近似對應(yīng)于ZT3和ZT12時附睪白色脂肪組織（eWAT）和腹股溝皮下白色脂肪組織（iWAT）中Bmal1的蛋白水平峰值。經(jīng)過6個月治療后，對照組和輪班組小鼠的體重都增加了50%以上，而且兩組之間的體重沒有差異（圖1B）。令人驚訝的是，對內(nèi)臟脂肪庫的組織學(xué)分析顯示，輪班組小鼠的脂肪細(xì)胞明顯增大（圖1C）。對eWAT脂肪細(xì)胞大小分布的定量分析顯示，其大小明顯向較大的脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)移（圖1D）。在iWAT中（圖1E），同樣可以觀察到脂肪細(xì)胞肥大，其大小分布明顯向較大的脂肪細(xì)胞傾斜（圖1F）。此外，我們發(fā)現(xiàn)典型的冠狀結(jié)構(gòu)由凋亡脂肪細(xì)胞周圍的巨噬細(xì)胞組成，在時間移位組的小鼠中都很豐富，而在對照組中很少出現(xiàn)。

▲圖1

組織學(xué)分析顯示，在輪班隊(duì)列的小鼠脂肪庫中存在大量的冠狀結(jié)構(gòu)，表明存在巨噬細(xì)胞浸潤的現(xiàn)象，這是脂肪組織炎癥的特征。與這一觀察結(jié)果相一致的是，RNA-seq分析也發(fā)現(xiàn)參與炎癥反應(yīng)的基因表達(dá)顯著增強(qiáng)。在內(nèi)臟脂肪中，相關(guān)代謝通路在ZT3時表現(xiàn)出正常的低表達(dá)，在ZT12時表達(dá)升高，表現(xiàn)出日表達(dá)譜（圖5A）。慢性轉(zhuǎn)移導(dǎo)致該通路在ZT3上的表達(dá)顯著升高，這與ZT12非常相似，但失去了日表達(dá)模式。該通路在輪班組中也被誘導(dǎo)表達(dá)（圖5B）。對光照時間移位處理的小鼠進(jìn)行詳細(xì)的組織學(xué)檢查，顯示其巨噬細(xì)胞積累具有豐富的冠狀結(jié)構(gòu)特征，而在對照組中檢測到最小的冠狀結(jié)構(gòu)（圖5C）。利用巨噬細(xì)胞特異性表面標(biāo)記物F4/80抗體進(jìn)行免疫熒光染色，并用Echo顯微鏡鑒定了凋亡脂肪細(xì)胞周圍的形成冠狀結(jié)構(gòu)的巨噬細(xì)胞。

▲圖5

現(xiàn)代生活方式中睡眠及活動周期與內(nèi)源性時鐘周期的頻繁失調(diào)會導(dǎo)致晝夜節(jié)律不同步，這就可能導(dǎo)致代謝性疾病的發(fā)生，總而言之，晝夜作息節(jié)律失調(diào)容易導(dǎo)致肥胖和糖尿病。

在文獻(xiàn)中我們可以清晰看到脂肪組織炎癥情況，同時可以很清楚地觀察到巨噬細(xì)胞的蛋白表達(dá)，那么不得不夸一夸咱們用的顯微鏡，很顯然Echo顯微鏡在此發(fā)揮的作用功不可沒。Echo Revolve Gen2正倒置一體電動熒光顯微鏡獨(dú)特的正倒置一體設(shè)計(jì)，既可觀看切片，又可觀察培養(yǎng)瓶中的活細(xì)胞，同時配置了高能LED光立方熒光系統(tǒng)，極大程度降低熒光淬滅的速度，雙相機(jī)設(shè)置既兼顧靈敏度又兼顧色彩還原，DHR功能抑制噪聲減少模糊，Z-Stacking可輕松逐層拍攝提高景深，配置iPad系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)極簡操控，易學(xué)易用，心動的話趕緊行動起來！

Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡

新一代Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡，擁有流行的觸屏操控方式，配備智能熒光成像系統(tǒng)，將Z-Stacking全景深成像和DHR數(shù)字處理功能有機(jī)聯(lián)合，提升分辨率告別照片模糊，為您打造全新的成像體驗(yàn)。