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- QQ477287371 2013-09-23 00:00:00
- 因?yàn)榈鞍纂娪局杏袧饪s膠和分離膠的區(qū)分，為了使膠的分界線在一個起點(diǎn)上，不得不豎著跑電泳。核酸電泳是一個均勻相，就沒有必要了。
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- wyp6203 2017-11-26 03:11:54
- DNA電泳一般使用的都是瓊脂糖凝膠電泳，電泳的驅(qū)動力靠DNA骨架本身的負(fù)電荷。 蛋白質(zhì)電泳（一般指SDS-PAGE）一般使用的都是聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳的驅(qū)動力靠與蛋白質(zhì)結(jié)合的SDS上所攜帶的負(fù)電荷。 所以相同點(diǎn)就是樣品都是帶負(fù)電荷的，從負(fù)極向正極移動，移動的距離都和樣品的分子量有關(guān)。而且這兩個電泳體系可以互相交換使用。進(jìn)行大分子蛋白質(zhì)電泳時，可以考慮換用瓊脂糖凝膠，因?yàn)樵擉w系孔徑大。相反，如果需要精確到各位數(shù)堿基的DNA電泳也可以使用聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)，因?yàn)槭褂迷撓到y(tǒng)可以將相差一個堿基的兩條DNA鏈分開。 不同點(diǎn)首先是樣品不同。這個就不用多說了。其次是結(jié)果的觀察方法不同。DNA電泳普遍使用EB做染料，在紫外燈下觀察；而蛋白電泳使用的考馬斯亮藍(lán)染色，還需要經(jīng)過脫色步驟，不過觀察起來比較簡單。還有就是膠體系的差別，DNA電泳通常是一膠跑到底，而蛋白質(zhì)電泳則會有分離膠和濃縮膠之區(qū)別。 電泳中樣品移動的本質(zhì)確實(shí)是樣品所攜帶的電荷。但是，區(qū)分這些條帶直接可以用分子量而無需使用電荷數(shù)，是因?yàn)檫@些樣品的電荷/分子量比都是恒定的了。以DNA分子為例，它在電泳中的移動是靠其骨架中磷酸所攜帶的負(fù)電荷來實(shí)現(xiàn)的，而這個磷酸分子又是每一個核苷酸中都有的，所以DNA分子所攜帶的負(fù)電荷數(shù)是由其核苷酸總數(shù)決定的。而且，DNA分子中核苷酸的組成動輒成百上千，在如此大的分子量面前，討論單個核苷酸之間分子量的差別就顯得毫無意義。這樣，DNA分子中負(fù)電荷的量就可以用DNA的分子量來代替，反過來，DNA的分子量也就可以用DNA分子所攜帶的電荷來代替（一句話，DNA分子的電荷/分子量比是恒定的）。 這在蛋白電泳中（特別是SDS-PAGE中）是一樣的。在SDS-PAGE中，SDS將蛋白質(zhì)變性成直線分子并緊密包裹于其上，使得其所攜帶的電荷與蛋白分子量成了一定的比例，剩下的就和核酸電泳一樣了。
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瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作為介質(zhì)的一種電泳方法，其兼具“分子篩”和“電泳的雙重作用。
瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物，是從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來的，當(dāng)瓊脂糖溶液加熱到沸點(diǎn)后冷卻凝固便會形成良好的電泳介質(zhì)，其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。
經(jīng)過化學(xué)修飾的低熔點(diǎn)的瓊脂糖，在結(jié)構(gòu)上比較脆弱，因此在較低的溫度下便會熔化，可用于核酸片段的電泳檢測。
瓊脂糖凝膠電泳檢測的主要是核酸的完整性和大小，只要核酸不是太小或者太大(超出電泳分離范圍)，該方法的可信度非常高。
核酸會根據(jù)pH不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，瓊脂糖凝膠電泳即根據(jù)這個原理對核酸進(jìn)行區(qū)分。
核酸分子在pH高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上具有重復(fù)性，長度相同的核酸鏈幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。
此外，含有瓊脂糖的凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時會受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動時受到的阻力大，因此在瓊脂糖凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。
在同樣電場的強(qiáng)度下，核酸分子的遷移速度取決于核酸分子本身的大小和構(gòu)型以及瓊脂糖凝膠的濃度，簡而言之，分子量較大的核酸遷移速度較慢，分子量較小的核酸遷移速度較快，這就是應(yīng)用凝膠電泳技術(shù)分離核酸片段的基本原理。
德晟公司產(chǎn)品特點(diǎn)及優(yōu)勢：
您不用再四處采購瓊脂糖、核酸染料、電泳液和loading buffer等試劑，一個試劑盒全部解決。
本試劑盒可以給您節(jié)省一個小時左右的實(shí)驗(yàn)時間。
a. 省去了您制膠的繁瑣，并且預(yù)制膠是核酸染料預(yù)染的，無需電泳液染色或后染色。簡捷方便，即開即用。
b. 本試劑盒專門配備了高壓快速電泳液，如果您的核酸樣品片段在2000bp以下，電泳的快慢您可以隨時掌控，調(diào)整電壓即可，一般的mini膠最快可以5-10分鐘完成；如果您在實(shí)驗(yàn)中使用的Marker或者核酸樣品條帶多、片段長（核酸樣品片段大于2000bp），您就需要根據(jù)實(shí)際情況，調(diào)節(jié)到合適的低壓，或仍使用您原來的低壓電泳條件。
3. 用本產(chǎn)品電泳得到的DNA片段進(jìn)行膠回收，不影響后續(xù)的DNA連接等反應(yīng)。
運(yùn)輸及保存：4°C保存和運(yùn)輸，有效期3個月，切勿放置于0°C以下或者常溫以上，這樣試劑盒內(nèi)的預(yù)制膠就會凍裂或變形，影響您的使用。
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