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問答社區(qū)

與蛋白質(zhì)結(jié)合了的DNA片段用瓊脂糖凝膠電泳能看出條帶阻滯嗎?

1422262308 2012-03-08 13:47:37 710  瀏覽
  • 前提:蛋白是已知純化好的蛋白,DNA是已知的純化好的DNA片段;且在適當(dāng)結(jié)合體系里使其發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。 問題:到底該蛋白和該DNA片段反應(yīng)了沒有,可以用瓊脂糖凝膠電泳鑒定嗎?結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA片段會跑得慢一些,從而得出結(jié)論。還是說,結(jié)合產(chǎn)物在瓊脂糖中會分... 前提:蛋白是已知純化好的蛋白,DNA是已知的純化好的DNA片段;且在適當(dāng)結(jié)合體系里使其發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。 問題:到底該蛋白和該DNA片段反應(yīng)了沒有,可以用瓊脂糖凝膠電泳鑒定嗎?結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA片段會跑得慢一些,從而得出結(jié)論。還是說,結(jié)合產(chǎn)物在瓊脂糖中會分離而不能使用這種方法鑒定嗎? 實驗室沒有條件做放射性標(biāo)記等操作,正常的DNA凝膠阻滯實驗不太可取。想問有沒有簡單可行的方法,可以鑒定蛋白質(zhì)和DNA發(fā)生了結(jié)合,用于大量篩選。 求指點!大謝! 展開

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全部評論(3條)

  • 伍祖加 2012-03-12 00:00:00

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  • 巨蟹king87 2012-03-09 00:00:00
    我建議你到北京康為世紀(jì)生物科技有限公司的官方網(wǎng)站上去找找資料!

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  • 小小玲玲玲玲9 2012-03-09 00:00:00
    先用純化好的dna跑個條帶,再用蛋白質(zhì)跑個條帶,Z后用結(jié)合物跑條帶,看有幾條條帶,以及跑的距離

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與蛋白質(zhì)結(jié)合了的DNA片段用瓊脂糖凝膠電泳能看出條帶阻滯嗎?
前提:蛋白是已知純化好的蛋白,DNA是已知的純化好的DNA片段;且在適當(dāng)結(jié)合體系里使其發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。 問題:到底該蛋白和該DNA片段反應(yīng)了沒有,可以用瓊脂糖凝膠電泳鑒定嗎?結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA片段會跑得慢一些,從而得出結(jié)論。還是說,結(jié)合產(chǎn)物在瓊脂糖中會分... 前提:蛋白是已知純化好的蛋白,DNA是已知的純化好的DNA片段;且在適當(dāng)結(jié)合體系里使其發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。 問題:到底該蛋白和該DNA片段反應(yīng)了沒有,可以用瓊脂糖凝膠電泳鑒定嗎?結(jié)合蛋白質(zhì)的DNA片段會跑得慢一些,從而得出結(jié)論。還是說,結(jié)合產(chǎn)物在瓊脂糖中會分離而不能使用這種方法鑒定嗎? 實驗室沒有條件做放射性標(biāo)記等操作,正常的DNA凝膠阻滯實驗不太可取。想問有沒有簡單可行的方法,可以鑒定蛋白質(zhì)和DNA發(fā)生了結(jié)合,用于大量篩選。 求指點!大謝! 展開
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瓊脂糖凝膠電泳檢測核酸的原理及產(chǎn)品優(yōu)勢

瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作為介質(zhì)的一種電泳方法,其兼具“分子篩”和“電泳的雙重作用。

瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物,是從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來的,當(dāng)瓊脂糖溶液加熱到沸點后冷卻凝固便會形成良好的電泳介質(zhì),其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。

經(jīng)過化學(xué)修飾的低熔點的瓊脂糖,在結(jié)構(gòu)上比較脆弱,因此在較低的溫度下便會熔化,可用于核酸片段的電泳檢測。

瓊脂糖凝膠電泳檢測的主要是核酸的完整性和大小,只要核酸不是太小或者太大(超出電泳分離范圍),該方法的可信度非常高。

核酸會根據(jù)pH不同帶有不同電荷,在電場中受力大小不同,因此跑的速度不同,瓊脂糖凝膠電泳即根據(jù)這個原理對核酸進行區(qū)分。

核酸分子在pH高于其等電點的溶液中帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上具有重復(fù)性,長度相同的核酸鏈幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。

此外,含有瓊脂糖的凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),物質(zhì)分子通過時會受到阻力,大分子物質(zhì)在涌動時受到的阻力大,因此在瓊脂糖凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量,而且還取決于分子大小,這就大大提高了分辨能力。

在同樣電場的強度下,核酸分子的遷移速度取決于核酸分子本身的大小和構(gòu)型以及瓊脂糖凝膠的濃度,簡而言之,分子量較大的核酸遷移速度較慢,分子量較小的核酸遷移速度較快,這就是應(yīng)用凝膠電泳技術(shù)分離核酸片段的基本原理。

德晟公司產(chǎn)品特點及優(yōu)勢:

您不用再四處采購瓊脂糖、核酸染料、電泳液和loading buffer等試劑,一個試劑盒全部解決。

本試劑盒可以給您節(jié)省一個小時左右的實驗時間。

a. 省去了您制膠的繁瑣,并且預(yù)制膠是核酸染料預(yù)染的,無需電泳液染色或后染色。簡捷方便,即開即用。

b. 本試劑盒專門配備了高壓快速電泳液,如果您的核酸樣品片段在2000bp以下,電泳的快慢您可以隨時掌控,調(diào)整電壓即可,一般的mini膠最快可以5-10分鐘完成;如果您在實驗中使用的Marker或者核酸樣品條帶多、片段長(核酸樣品片段大于2000bp),您就需要根據(jù)實際情況,調(diào)節(jié)到合適的低壓,或仍使用您原來的低壓電泳條件。

3. 用本產(chǎn)品電泳得到的DNA片段進行膠回收,不影響后續(xù)的DNA連接等反應(yīng)。

運輸及保存:4°C保存和運輸,有效期3個月,切勿放置于0°C以下或者常溫以上,這樣試劑盒內(nèi)的預(yù)制膠就會凍裂或變形,影響您的使用。


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