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問答社區(qū)

核酸的瓊脂糖凝膠電泳為什么要用電泳緩沖液配制凝膠

yu湚亂 2012-12-16 21:16:46 510  瀏覽
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參與評論

全部評論(3條)

  • 剩空失憶霜7Z 2012-12-17 00:00:00
    1.含氮堿基有一定影響 2.電流過大時(shí)凝膠溶液溫度升高,溶液蒸發(fā),會(huì)造成電泳異常

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  • 活寶飛翔的蘿卜 2012-12-17 00:00:00
    保持合適的pH和離子強(qiáng)度,使電泳順利進(jìn)行。如果配膠的緩沖液與電泳緩沖液不同,電泳時(shí)凝膠可能會(huì)變形。

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  • Us北京噻車景 2016-12-02 02:14:15
    主要的原因是保持瓊脂凝膠和周圍的緩沖體系保持相同的pH值,當(dāng)然這種pH值是前人優(yōu)化過的,Z有利于核酸分離和穩(wěn)定的pH條件;如果凝膠和緩沖體系的pH存在較大的差異,勢必會(huì)影響核酸的分離效果。

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熱門問答

核酸的瓊脂糖凝膠電泳為什么要用電泳緩沖液配制凝膠
 
2012-12-16 21:16:46 510 3
核酸瓊脂糖凝膠電泳時(shí)電壓一般為多少
 
2016-07-19 19:43:26 717 1
瓊脂糖凝膠電泳檢測核酸的原理及產(chǎn)品優(yōu)勢

瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作為介質(zhì)的一種電泳方法,其兼具“分子篩”和“電泳的雙重作用。

瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物,是從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來的,當(dāng)瓊脂糖溶液加熱到沸點(diǎn)后冷卻凝固便會(huì)形成良好的電泳介質(zhì),其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。

經(jīng)過化學(xué)修飾的低熔點(diǎn)的瓊脂糖,在結(jié)構(gòu)上比較脆弱,因此在較低的溫度下便會(huì)熔化,可用于核酸片段的電泳檢測。

瓊脂糖凝膠電泳檢測的主要是核酸的完整性和大小,只要核酸不是太小或者太大(超出電泳分離范圍),該方法的可信度非常高。

核酸會(huì)根據(jù)pH不同帶有不同電荷,在電場中受力大小不同,因此跑的速度不同,瓊脂糖凝膠電泳即根據(jù)這個(gè)原理對核酸進(jìn)行區(qū)分。

核酸分子在pH高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動(dòng)。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上具有重復(fù)性,長度相同的核酸鏈幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動(dòng)。

此外,含有瓊脂糖的凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),物質(zhì)分子通過時(shí)會(huì)受到阻力,大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大,因此在瓊脂糖凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量,而且還取決于分子大小,這就大大提高了分辨能力。

在同樣電場的強(qiáng)度下,核酸分子的遷移速度取決于核酸分子本身的大小和構(gòu)型以及瓊脂糖凝膠的濃度,簡而言之,分子量較大的核酸遷移速度較慢,分子量較小的核酸遷移速度較快,這就是應(yīng)用凝膠電泳技術(shù)分離核酸片段的基本原理。

德晟公司產(chǎn)品特點(diǎn)及優(yōu)勢:

您不用再四處采購瓊脂糖、核酸染料、電泳液和loading buffer等試劑,一個(gè)試劑盒全部解決。

本試劑盒可以給您節(jié)省一個(gè)小時(shí)左右的實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

a. 省去了您制膠的繁瑣,并且預(yù)制膠是核酸染料預(yù)染的,無需電泳液染色或后染色。簡捷方便,即開即用。

b. 本試劑盒專門配備了高壓快速電泳液,如果您的核酸樣品片段在2000bp以下,電泳的快慢您可以隨時(shí)掌控,調(diào)整電壓即可,一般的mini膠最快可以5-10分鐘完成;如果您在實(shí)驗(yàn)中使用的Marker或者核酸樣品條帶多、片段長(核酸樣品片段大于2000bp),您就需要根據(jù)實(shí)際情況,調(diào)節(jié)到合適的低壓,或仍使用您原來的低壓電泳條件。

3. 用本產(chǎn)品電泳得到的DNA片段進(jìn)行膠回收,不影響后續(xù)的DNA連接等反應(yīng)。

運(yùn)輸及保存:4°C保存和運(yùn)輸,有效期3個(gè)月,切勿放置于0°C以下或者常溫以上,這樣試劑盒內(nèi)的預(yù)制膠就會(huì)凍裂或變形,影響您的使用。


2021-08-31 10:47:09 1133 0
瓊脂糖凝膠上核酸的定量方法有哪些??
我知道可以通過已知濃度的marker量來估計(jì),有沒有這個(gè)用于這個(gè)估計(jì)的軟件的?? 或者說說其他的瓊脂糖凝膠上核酸的定量方法。 謝謝
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2011-10-23 10:56:15 599 1
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談?wù)劸郾0纺z電泳與瓊脂糖凝膠電泳有哪些異同點(diǎn)~~詳細(xì)點(diǎn),謝謝
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我研究的方向是分子生物學(xué),這幾天一直在做細(xì)菌核酸提取及16SrDNA通用片段常規(guī)PCR檢測,提取核酸方法是用水煮法,可每次PCR完跑電泳后,發(fā)現(xiàn)結(jié)果都是核酸向負(fù)極方向反著跑了,和Marker方向相反,跑到槽的上方,查了好多資料就是沒說到這方面的原因,然后換了用... 我研究的方向是分子生物學(xué),這幾天一直在做細(xì)菌核酸提取及16SrDNA通用片段常規(guī)PCR檢測,提取核酸方法是用水煮法,可每次PCR完跑電泳后,發(fā)現(xiàn)結(jié)果都是核酸向負(fù)極方向反著跑了,和Marker方向相反,跑到槽的上方,查了好多資料就是沒說到這方面的原因,然后換了用QIAGEN的試劑盒提取,還是出現(xiàn)了一樣的結(jié)果,我做的是革蘭氏陰性菌的,理論上應(yīng)該很簡單,可就是見鬼了,望大家能幫忙解決,畢業(yè)實(shí)驗(yàn)時(shí)間迫在眉睫了... 展開
2011-02-26 14:11:43 1213 4

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