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  heitiansh1 2017-01-15 00:00:00

  PCR產(chǎn)物測序要求Z低的濃度是多少 主要看的是PCR產(chǎn)物的量，已純化一般要求總量500ng以上，未純化1ug以上，這個量是一般情況，還要看你的產(chǎn)物長度，短的話可以少一些，長的話可能還要多送一些，供你參考。具體Z好咨詢你要送測序的測序公司，這樣即符合他們的要求就可以，同時也不會因為樣品量的問題耽誤你自己的實驗進程。 　　純化的pcr產(chǎn)物測序需要的要求： 　　(1)擴增產(chǎn)物必須特異性擴增，條帶單一。如果擴增產(chǎn)物中存在非特異性擴增產(chǎn)物，一般難以得到好的測序結(jié)果； 　　(2）必須進行膠回收純化； 　　(3）DNA純度在1.6-2.0之間，濃度50ng/ul以上。 　　方法 　　(1) 在PCR反應(yīng)液中加入3倍體積的Buffer PCR-A，若需加入的Buffer PCR-A不足100μl，則加入100μl。 　　(2) 將DNA-prep Tube置于2-ml Microfuge Tube中，將步驟⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中，5500rpm離心1min。 　　(3) 棄濾液，將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，加入500μl Buffer W1，5500rpm離心1min。 　　(4) 棄濾液，將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中，加入700μl 已加無水乙醇的Buffer W2，5500rpm離心1min，以同樣的方法再用700μl已加無水乙醇的BufferW2洗滌一次。 　　(5) 棄濾液，將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，14000rpm離心1min。 　　(6) 連濾液一并棄掉收集管，將DNA-prep Tube 置于一新的1.5ml 離心管中，在silica 膜ZY加入25-30μl Eluent或去離子水（65℃預(yù)熱）。 (7) 室溫靜置2min，14000rpm離心1min洗脫DNA。 (8) 取5μl樣品，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測純化結(jié)果。

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