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如何減少HPLC色譜圖中雜峰

刻骨的丶甜蜜 2018-11-18 03:21:00 520  瀏覽
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如何減少HPLC色譜圖中雜峰
請問若何削減色譜圖中雜峰的呈現(xiàn)?... 請問若何削減色譜圖中雜峰的呈現(xiàn)? 展開
2018-11-18 03:21:00 520 0
色譜圖中所有峰拖尾或峰變形是什么造成的?

1.3.色譜圖中所有峰拖尾或峰變形通常是由物理作用導(dǎo)致的,而非化學(xué)作用。

如果色譜圖中的峰形均表現(xiàn)相同類型的變形(圖3),則問題Z早應(yīng)出現(xiàn)在分析物通過色譜柱遷移之前(主要問題發(fā)生在分析物在色譜柱中遷移之前)。

這種峰形變形Z常見的致因是:玻璃料或柱頭的空隙部分堵塞(此類峰變形Z常見的原因是篩板部分堵塞或色譜柱頭塌陷)。

除非在推薦的pH范圍之外使用色譜柱,否則現(xiàn)在的柱子基本不會受到空隙的影響(輕易不會發(fā)生塌陷)。

但是,玻璃料(篩板)堵塞仍然是一個普遍存在的問題。對于5m顆粒柱(的色譜柱),入口端的玻璃料(篩板)通常具有2.0m的孔隙度;對于(顆粒)3m的色譜柱,具有0.5m的孔隙度。
如果顆粒物來自于樣品,或顆粒物是因泵密封磨損或流動相到達色譜柱而產(chǎn)生的(磨損的泵密封圈或者流動相顆粒物進入色譜),它們通常會集中在玻璃料上(都聚集在篩板上)。

這些顆粒會影響樣品在色譜柱入口端的分流,使得部分樣品通過不同的流動路徑到達色譜柱,因此會晚于另一部分樣品。
由于此時(此位置)未發(fā)生分離,因此所有分析物會以相同的方式變形(被擾亂),進而色譜圖顯示所有峰均具有相似(類似)的峰拖尾或變形。

為了防止(避免)這一問題,如果流動相可能含有顆粒(如緩沖沉淀物或灰塵),應(yīng)對其進行過濾;并在泵密封嚴重磨損(導(dǎo)致顆粒物的產(chǎn)生)之前更換新的泵密封(密封圈)。

如果樣品含有顆粒碎片(屑),應(yīng)對樣品進行過濾(例如0.5m孔隙度過濾器(微孔濾膜))或?qū)ζ溥M行短暫離心(例如5分鐘,>1500×g),以去除顆粒。

我們強烈建議在自動進樣器下游(之后)安裝0.5m孔隙度的串聯(lián)(在線)過濾器,以過濾任何意外進入HPLC系統(tǒng)的顆粒物。如果串聯(lián)(在線)過濾器玻璃料(濾片)發(fā)生堵塞,系統(tǒng)背壓會升高;而更換玻璃料(濾片)十分簡單、快速和經(jīng)濟。采用串聯(lián)(在線)過濾器可顯著延長色譜柱的使用壽命,而且經(jīng)濟實惠。

圖3. 由于玻璃料或色譜柱空隙被部分堵塞(色譜柱篩板部分堵塞或色譜柱塌陷),色譜圖中所有峰形均出現(xiàn)了變形。


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