導讀

大家或許聽到過這樣一首歌：零點睡六點起，ICU里喝小米；一點睡六點起；閻王夸我好身體；兩點睡覺六點起，骨灰盒子長方體；三點睡覺六點起，墓碑和我綁一起。熬夜如今已成為現(xiàn)代年輕人不可或缺的一種常態(tài)，明知熬夜傷身體，但管不住自己啊！

生物鐘是一種進化保守的轉(zhuǎn)錄-翻譯調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，與身體代謝調(diào)節(jié)密切相關(guān)。從多數(shù)積累的實驗模型和流行病學研究中的證據(jù)表明，生物鐘調(diào)節(jié)機制的中斷會導致肥胖和胰島素含量偏高。

匹茲堡大學某研究團隊在期刊Molecular And Cellular Endocrinology發(fā)表了一篇名為《Chronic circadian shift leads to adipose tissue inflammation and fibrosis》的文章，該團隊之前的研究發(fā)現(xiàn)，重要的時鐘轉(zhuǎn)錄激活因子Bmal1是脂肪形成的關(guān)鍵調(diào)控因子，在此基礎(chǔ)上，該研究團隊使用環(huán)境光照誘導時鐘節(jié)律的中斷，再用Echo顯微鏡去觀察小鼠長達6個月的慢性時鐘失調(diào)導致的相關(guān)細胞形態(tài)變化以及局部組織炎癥和纖維化情況，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學分析，該研究初步確定了慢性時鐘節(jié)律失調(diào)會引起顯著的脂肪組織功能障礙，這可能也是晝夜節(jié)律失調(diào)導致了胰島素抗性高的基礎(chǔ)。

文章相關(guān)結(jié)果：

在本研究中，我們測試了環(huán)境光照移位誘導的時鐘干擾是否會影響脂肪組織生長。我們設(shè)計了一個輪班計劃，如圖1A所示。這種輪班方案旨在引起類似于環(huán)境晝夜失調(diào)的zhongshu和外周晝夜時鐘不同步，我們之前證明了類似的5周方案導致β細胞時鐘失調(diào)。兩組分別在正常周期的第二天上午8點（ZT3）和下午5點（ZT12）采集樣本，如圖所示（圖1A)。這些時間點近似對應于ZT3和ZT12時附睪白色脂肪組織（eWAT）和腹股溝皮下白色脂肪組織（iWAT）中Bmal1的蛋白水平峰值。經(jīng)過6個月治療后，對照組和輪班組小鼠的體重都增加了50%以上，而且兩組之間的體重沒有差異（圖1B）。令人驚訝的是，對內(nèi)臟脂肪庫的組織學分析顯示，輪班組小鼠的脂肪細胞明顯增大（圖1C）。對eWAT脂肪細胞大小分布的定量分析顯示，其大小明顯向較大的脂肪細胞轉(zhuǎn)移（圖1D）。在iWAT中（圖1E），同樣可以觀察到脂肪細胞肥大，其大小分布明顯向較大的脂肪細胞傾斜（圖1F）。此外，我們發(fā)現(xiàn)典型的冠狀結(jié)構(gòu)由凋亡脂肪細胞周圍的巨噬細胞組成，在時間移位組的小鼠中都很豐富，而在對照組中很少出現(xiàn)。

▲圖1

組織學分析顯示，在輪班隊列的小鼠脂肪庫中存在大量的冠狀結(jié)構(gòu)，表明存在巨噬細胞浸潤的現(xiàn)象，這是脂肪組織炎癥的特征。與這一觀察結(jié)果相一致的是，RNA-seq分析也發(fā)現(xiàn)參與炎癥反應的基因表達顯著增強。在內(nèi)臟脂肪中，相關(guān)代謝通路在ZT3時表現(xiàn)出正常的低表達，在ZT12時表達升高，表現(xiàn)出日表達譜（圖5A）。慢性轉(zhuǎn)移導致該通路在ZT3上的表達顯著升高，這與ZT12非常相似，但失去了日表達模式。該通路在輪班組中也被誘導表達（圖5B）。對光照時間移位處理的小鼠進行詳細的組織學檢查，顯示其巨噬細胞積累具有豐富的冠狀結(jié)構(gòu)特征，而在對照組中檢測到最小的冠狀結(jié)構(gòu)（圖5C）。利用巨噬細胞特異性表面標記物F4/80抗體進行免疫熒光染色，并用Echo顯微鏡鑒定了凋亡脂肪細胞周圍的形成冠狀結(jié)構(gòu)的巨噬細胞。

▲圖5

現(xiàn)代生活方式中睡眠及活動周期與內(nèi)源性時鐘周期的頻繁失調(diào)會導致晝夜節(jié)律不同步，這就可能導致代謝性疾病的發(fā)生，總而言之，晝夜作息節(jié)律失調(diào)容易導致肥胖和糖尿病。

在文獻中我們可以清晰看到脂肪組織炎癥情況，同時可以很清楚地觀察到巨噬細胞的蛋白表達，那么不得不夸一夸咱們用的顯微鏡，很顯然Echo顯微鏡在此發(fā)揮的作用功不可沒。Echo Revolve Gen2正倒置一體電動熒光顯微鏡獨特的正倒置一體設(shè)計，既可觀看切片，又可觀察培養(yǎng)瓶中的活細胞，同時配置了高能LED光立方熒光系統(tǒng)，極大程度降低熒光淬滅的速度，雙相機設(shè)置既兼顧靈敏度又兼顧色彩還原，DHR功能抑制噪聲減少模糊，Z-Stacking可輕松逐層拍攝提高景深，配置iPad系統(tǒng)，實現(xiàn)極簡操控，易學易用，心動的話趕緊行動起來！

Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡

新一代Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡，擁有流行的觸屏操控方式，配備智能熒光成像系統(tǒng)，將Z-Stacking全景深成像和DHR數(shù)字處理功能有機聯(lián)合，提升分辨率告別照片模糊，為您打造全新的成像體驗。

血腦屏障 (BBB) 是哺乳動物的一種特殊結(jié)構(gòu)，通過調(diào)節(jié)血液和血液之間離子、氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的流入和流出，將大腦與血液分開，并維持zhongshu神經(jīng)系統(tǒng) (CNS) 的穩(wěn)態(tài)。該屏障主要由腦微血管內(nèi)皮細胞 (BMEC)、星形膠質(zhì)細胞和周細胞組成。

轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGFβ1) 是轉(zhuǎn)化生長因子β (TGFβ) 家族成員之一，是一種多效性細胞因子，在多種病理和生理過程中發(fā)揮重要作用。

Hedgehog信號通路是重要的信號傳導通路，在多個物種中是保守的，并且在生理和病理過程的許多方面發(fā)揮著重要作用。典型Hedgehog信號由三種分泌配體Shh、Ihh和Dhh激活，細胞間信號由轉(zhuǎn)錄因子Gli1、Gli2和Gli3轉(zhuǎn)導。在zhongshu神經(jīng)系統(tǒng)中，Hedgehog信號通路決定了神經(jīng)管的形成和發(fā)育。

目前，已有研究表明Hedgehog信號與TGFβ1級聯(lián)反應在癌癥發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的相互作用。那么Hedgehog信號和TGFβ1級聯(lián)反應之間的串擾是否會影響血腦屏障的功能呢，目前還尚不清晰。

華中農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院農(nóng)業(yè)微生物學國家重點實驗室和湖北省預防獸醫(yī)學重點實驗室聯(lián)合在Brain Sciences雜志上發(fā)表了一篇名為《Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood–Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells》，該文闡明了TGFβ1 介導的星形膠質(zhì)細胞和大腦內(nèi)皮細胞之間的細胞間交流，這一發(fā)現(xiàn)將拓寬關(guān)于血腦屏障內(nèi)穩(wěn)態(tài)的現(xiàn)有知識，也可能有助于進一步改善血腦屏障功能障礙的治療策略。

作者通過構(gòu)建人腦微血管內(nèi)皮細胞 (hBMECs) 與U251的單培養(yǎng)和共培養(yǎng)模型，證實了星形膠質(zhì)細胞衍生的TGFβ1增強了BMECs的屏障功能。實時熒光定量PCR、免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附試驗等多種實驗表明TGFβ1在BMECs中觸發(fā)Smad2/3的激活增加了Gli2的表達，Gli2是Hedgehog信號轉(zhuǎn)導的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。Gli2與ZO-1啟動子結(jié)合，增強ZO-1的表達，從而維持血腦屏障。星形膠質(zhì)細胞來源的TGFβ1觸發(fā)BMECs中的TGFβ1-TGFBRII-Smad2/3-Gli1/2-ZO-1軸并維持正常的BBB功能。

文中作者通過免疫熒光技術(shù)，利用Echo Revolve正倒置一體顯微鏡進行免疫熒光觀察。使用50ng/mL的重組TGFβ1 (rTGFβ1) 來刺激單層hBMECs，BMECs用綠色CD31標記，結(jié)果表明與對照組相比，ZO-1表達顯著增加。

用4mg/kg的TGFβ/Smads信號抑制劑SD208處理小鼠，圖中虛線環(huán)表示BMECs中的Gli1或Gli2的表達量，結(jié)果表明與對照組相比，ZO-1、 Gli1和Gli2表達量均減少。

內(nèi)皮屏障功能方面發(fā)揮重要作用，提高了對血腦屏障功能的研究。這一發(fā)現(xiàn)也可能表明未來有可能使用TGFβ1和Hedgehog信號級聯(lián)來輔助治療血腦屏障功能障礙。

參考文獻：

Fu J, Li L, Huo D, et al. Astrocyte-Derived TGFβ1 Facilitates Blood-Brain Barrier Function via Non-Canonical Hedgehog Signaling in Brain Microvascular Endothelial Cells. Brain Sci. 2021;11(1):77. Published 2021 Jan 8. doi:10.3390/brainsci11010077

氣體流量傳感器特性

氣體流量傳感器是現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)中常見且重要的測量工具，廣泛應用于環(huán)保、能源、化工、制造等領(lǐng)域。其主要功能是測量氣體在管道或設(shè)備中的流速、流量和壓力等參數(shù)。隨著科技的不斷發(fā)展，氣體流量傳感器逐漸具備了更高的準確性、更強的穩(wěn)定性和更為多樣化的應用場景。在本文中，我們將深入探討氣體流量傳感器的主要特性，幫助大家更好地理解其應用及選擇標準。

氣體流量傳感器具有較強的測量精度?，F(xiàn)代的氣體流量傳感器采用先進的技術(shù)，如熱式、超聲波式、差壓式等測量原理，能夠在不同的工作環(huán)境下提供的流量數(shù)據(jù)。例如，熱式氣體流量傳感器通過測量氣體流動時對加熱元件的影響來推算氣體流量，精度通常能夠達到±1%或更高。而超聲波式傳感器通過測量聲波在氣體中傳播的時間差，能夠?qū)崿F(xiàn)無接觸測量，從而避免了機械摩擦對測量結(jié)果的影響，提升了傳感器的使用壽命和精度。

氣體流量傳感器具有良好的適應性。在工業(yè)生產(chǎn)中，氣體的種類、壓力、溫度等都可能發(fā)生較大波動，因此，傳感器必須具備較強的適應性才能保證測量的準確性。現(xiàn)代氣體流量傳感器一般具備較寬的工作溫度和壓力范圍，可以應對大多數(shù)常見的工作環(huán)境。例如，一些高端傳感器能夠在溫度范圍-40℃至150℃之間穩(wěn)定工作，適應性強，可廣泛應用于極端環(huán)境中。

氣體流量傳感器的響應速度也是其一大特性。在許多實時監(jiān)測應用中，快速的響應時間對于確保生產(chǎn)安全和效率至關(guān)重要。例如，在化工、石油等行業(yè)，氣體流量的變化可能意味著設(shè)備故障或事故風險，傳感器需要在短的時間內(nèi)響應，提供及時的數(shù)據(jù)反饋。為了提高響應速度，許多氣體流量傳感器采用了高精度的微處理器技術(shù)以及快速的信號處理算法，能夠確保測量數(shù)據(jù)的實時性和準確性。

穩(wěn)定性是氣體流量傳感器另一個不可忽視的重要特性。無論是在恒定的工作環(huán)境下，還是在氣體流量波動較大的情況下，氣體流量傳感器的穩(wěn)定性直接影響測量結(jié)果的可靠性。高穩(wěn)定性的傳感器通常能夠維持較長時間的準確性，減少因設(shè)備老化或外部因素影響所造成的測量誤差。為了提高穩(wěn)定性，氣體流量傳感器一般會采用高質(zhì)量的材料和先進的抗干擾技術(shù)，確保設(shè)備在惡劣環(huán)境下的正常運行。

隨著智能化技術(shù)的快速發(fā)展，氣體流量傳感器正朝著更高效、更智能的方向發(fā)展。許多傳感器已經(jīng)具備了數(shù)據(jù)記錄、遠程監(jiān)控、故障報警等功能，能夠與工業(yè)控制系統(tǒng)進行聯(lián)網(wǎng)，形成智能監(jiān)控平臺，進一步提高了工業(yè)生產(chǎn)的安全性和自動化水平。這些新型智能氣體流量傳感器為各行各業(yè)提供了更加靈活、高效的解決方案。

氣體流量傳感器憑借其高精度、強適應性、快速響應以及優(yōu)良的穩(wěn)定性，成為現(xiàn)代工業(yè)領(lǐng)域中不可或缺的測量工具。隨著技術(shù)的不斷創(chuàng)新，氣體流量傳感器將在更多領(lǐng)域展現(xiàn)出其巨大的應用潛力，推動各行業(yè)的智能化、自動化發(fā)展。

導讀

經(jīng)過前面的幾期學習，相信大家對顯微鏡的基礎(chǔ)知識已經(jīng)有了足夠的了解，自信心提的滿滿的吆！接下來就可以根據(jù)實際需求來選擇對應的顯微鏡了。

讓我們一起走進ECHO顯微鏡的世界，挑選一臺屬于你的顯微鏡吧。

熒光電動顯微鏡—Revolve

ECHO顯微鏡顛覆了大家對顯微鏡的認知，是對傳統(tǒng)顯微鏡設(shè)計的重新思考，是真正意義上的設(shè)計一體化和操控顯示一體化，易學易用，使枯燥的實驗變得簡單有趣。

高分辨率3D成像，獲得最佳成像效果

Revolve顯微鏡采用實時反卷積(DHR)，增加寬場熒光顯微鏡圖像銳度，抑制噪聲減少模糊，提高熒光檢測分辨率。自動Z軸配合實時反卷積(DHR)功能，在保持高分辨率的同時，對較厚樣本進行全景深掃描合成，實現(xiàn)3D高分辨成像。

正倒置一體，一機兩用

Revolve顯微鏡既可以正置觀察，也可以倒置觀察，在正置和倒置之間自由轉(zhuǎn)換。使用戶不再因為樣品的不同而分別購置正置和倒置兩類顯微鏡，一機實現(xiàn)切片、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶和多孔板等多種樣本類型的觀察需求。在降低設(shè)備成本的同時，也節(jié)約了空間。試問：我還需要糾結(jié)選擇買正置還是倒置嗎，當然是都要嘍。

智能化操作，高效便捷

Revolve顯微鏡采用自動熒光的方式，可以快速捕捉熒光信號，避免熒光淬滅。自動雙相機系統(tǒng)保證了明場和熒光條件下都可以獲得好的觀察效果。智能化的軟件使操作變得更加簡單。

明場顯微鏡—Rebel

隨著Revolve的問世，ECHO顯微鏡的設(shè)計理念深受用戶的喜歡，但是對于沒有熒光需求的用戶，一款正倒置兼?zhèn)涞腞ebel足矣。

自動細胞計數(shù)軟件，無需特殊耗材

Rebel為滿足更多的用戶需求，特別開發(fā)了自動細胞計數(shù)軟件。區(qū)別于市場上的細胞自動計數(shù)儀，Rebel兼具顯微鏡與計數(shù)功能于一身。不再需要特殊的觀察耗材，可使用玻片、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等耗材進行細胞自動計數(shù)。

高效便捷的網(wǎng)絡(luò)共享方式

Rebel還具有非常高效便捷的網(wǎng)絡(luò)共享方式，通過WIFI、Internet等多種通訊方式，可以實現(xiàn)實時實驗教學、病例分享和多人會診。

全電動顯微鏡—Revolution

針對更高級別用戶需求，ECHO又推出了Revolve進階版Revolution，正倒置一體化設(shè)計，帶來更多應用場景；雙相機系統(tǒng)保證了確保效果最優(yōu)；實時反卷積功能配合高速Z-Stacking功能，提高熒光檢測的分辨率。獨特的觸屏控制XY自動載物臺功能，便于觀察樣品的定位；對于大樣品掃描成像，電動載物臺和Hyperscan功能結(jié)合,使掃描速度提升了一倍。對于活細胞的觀察，活細胞工作站和多功能智能化聯(lián)動，保證了活細胞長時間的觀察。

最后，我們一起來看一下ECHO顯微鏡下的微觀世界吧。

看到這樣一臺成像質(zhì)量好，操作簡單，適用范圍廣的顯微鏡，有沒有心動呀，想不想體驗一下操作極簡，體驗極佳的顯微鏡呀，想不想讓我們珍貴的實驗樣本也有一個如此美輪美奐的瞬間，那就趕緊聯(lián)系我們，申請試用吧，三款產(chǎn)品，總有一個適合你的吆！

顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構(gòu)成的一種光學儀器，是人類進入原子時代的標志。顯微鏡是人類最偉大的發(fā)明物之一，那么該如何使用顯微鏡呢？長期使用顯微鏡的小伙伴們，長期觀察目鏡筒是否會感到眼睛酸澀？想要分享視野中的發(fā)現(xiàn)時是否會困擾如何去跟別人描述新發(fā)現(xiàn)的位置？想要記錄視野圖像時是否需要反復的找合適角度拍照？

想要知道上面問題的解決辦法嗎？那就趕緊快來參加8月25日的深藍云直播課堂吧！您想知道的答案都在本次課程里，come on！

直播課

前言

結(jié)核?。═B）仍然是單一傳染源的首要死亡原因。2017年，估計出現(xiàn)了超過55萬例耐多藥/利福平結(jié)核病（MDR/RR-TB）新病例，強調(diào)需要新的治療策略。利奈唑胺（LZD）是一種治療耐藥革蘭氏陽性感染的有效抗生素，也是結(jié)核病的有效治療方法。然而，長期使用LZD可導致LZD相關(guān)的宿主毒性，常見的是gusui抑制。LZD毒性可能由IL-1介導，IL-1是結(jié)核分枝桿菌感染期間早期免疫的重要炎癥途徑。然而，IL-1可導致結(jié)核病進展后期的病理學和疾病嚴重性。

由于IL-1可能有助于LZD毒性，并確實影響結(jié)核病病理學，因此本實驗將這一途徑作為潛在的宿主導向治療（HDT）的靶點。本實驗假設(shè)LZD的療效可以通過調(diào)節(jié)IL-1途徑來增強，以減少gusui毒性和結(jié)核相關(guān)炎癥。

本文使用兩種結(jié)核病動物模型進行研究，一種是結(jié)核病易感小鼠模型和臨床相關(guān)獼猴。在本研究中應用Echo Revolve正倒置一體熒光顯微鏡首先對小鼠肺組織的病變情況進行觀察，以及肺組織病變面積的測量及可視化呈現(xiàn)；其次觀察獼猴胸骨gusui組織切片，比較細胞數(shù)量和差異性變化。熒光顯微鏡觀察鼠抗CD3e、鼠抗Ly-6G抗體在肺組織中的特異性表達情況。

通過蘇木精-伊紅（HE）染色對WT或Nos2-/-小鼠的單個肺葉進行組織病理學分析。αIL-1R1治療降低了肺臟的平均細菌負荷（圖1）。αIL-1R1治療沒有加重任何一種小鼠株的疾病。

▲ 圖1 蘇木精-伊紅（HE）染色對WT或Nos2-/-小鼠單個肺葉的組織病理學分析結(jié)果

作者使用鼠抗CD3e、鼠抗Ly-6G抗體孵育，在Echo Revolve 4熒光顯微鏡DAPI FITC和RFP3個通道下分別觀察繼發(fā)性熒光和自發(fā)性熒光，將3個通道的圖像疊加，可觀察到圖像中的紫色為抗體在肺組織中特異性表達，見圖2。

由于對Mtb感染和LZD治療產(chǎn)生的IL-1β在很大程度上取決于NLRP3炎癥體，本文還研究了一種方案，其中在感染后56天和77天之間施用LZD和小分子NLRP3yizhi劑（MCC950）。如αIL-1R1所觀察到的，與LZD單獨相比，添加MCC950減少了肺中的PMN數(shù)量，并且沒有顯著改變細菌殺滅（圖2）。

▲ 圖2 不同治療組的肺部組織免疫熒光圖像

用DAPI染色的細胞核（藍色）、用鼠抗CD3ε染色的T細胞（綠色）和用鼠抗Ly-6G染色的中性粒細胞（紅色）

為了證實我們的觀察結(jié)果，病理學家評估了獼猴gusui組織切片。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同治療組，如TB組、LZD組和LZD+IL-1Rn組在細胞數(shù)量（髓系：紅系比率）或異常方面沒有明顯差異（圖3）。

▲圖3 獼猴尸檢時獲得的胸骨gusui的代表性HE圖像

圖片中的左側(cè)圖像為20X拍攝結(jié)果，右側(cè)圖像為40X拍攝結(jié)果

研究亮點：

?  本文使用Echo Revolve正倒置一體熒光顯微鏡眀場清晰觀察到小鼠肺組織的病灶情況，還清晰觀察到獼猴胸骨gusui細胞分布狀況以及進行不同治療組間細胞數(shù)量比較；眀場可一鍵快速切換到熒光成像，熒光觀察對不同治療組的肺部組織中的抗體特異性表達進行清晰觀察。

?  闡明了小鼠和獼猴之間gusui抑制的差異突出了在人類實驗之前評估多個模型中HDT的重要性；在兩種模型中，IL-1Rn給藥對宿主的影響，以及對Mtb和LZD功效的反應，可以通過顯微鏡觀察兩種模型細胞中的病灶變化，細胞數(shù)量以及差異性變化來鑒定IL-1與LZD聯(lián)合抑制是否對結(jié)核病治療有效。本文研究數(shù)據(jù)為IL-1Rn作為結(jié)核病的潛在治療提供了臨床前數(shù)據(jù)。

Revolve Gen 2正倒置一體電動熒光顯微鏡

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導讀

上皮性卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中死亡率高。轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者預后不良的主要原因。表觀遺傳和蛋白質(zhì)翻譯后修飾在腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用。作為 IIa 類組蛋白去乙?；傅某蓡T，組蛋白去乙?；?9 (HDAC9) 通過使組蛋白和非組蛋白去乙?；瘏⑴c許多生物過程。

吉林大學基礎(chǔ)醫(yī)學院病理生理學系病理生物學重點實驗室的研究人員在Biomedicines上發(fā)表了題為《HDAC9 Contributes to Serous Ovarian Cancer Progression through Regulating Epithelial–Mesenchymal Transition》的文章。文中應用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進行免疫熒光的成像。

研究亮點：

?   對A2780 和 SKOV3 細胞中FOXO1的免疫熒光染色圖像的觀察發(fā)現(xiàn)， HDAC9的變化對FOXO1易位和核積累的影響，還展示了FOXO1在A2780和SKOV3中的亞細胞定位。

?  對A2780 和 SKOV3 細胞中 β-連環(huán)蛋白的免疫熒光染色的觀察發(fā)現(xiàn)，HDAC9的變化對β-連環(huán)蛋白易位和核積累的影響，還展示了β-連環(huán)蛋白在A2780和SKOV3中的亞細胞定位。

? 免疫熒光成像清晰準確，底噪干擾小，自動進行多通道結(jié)果合成，快速得到共定位的merge圖像。

文中所有的免疫熒光結(jié)果均是使用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進行的快速清晰的成像，揭示了HDAC9的調(diào)整對FOXO1蛋白和β-連環(huán)蛋白的亞細胞定位的影響，進而發(fā)現(xiàn)HDAC9可能通過上調(diào) TGF-β 信號（HDAC9 可能通過增加 FOXO1 的核積累來促進 TGF-β 的表達）傳導促進 SKOV3 細胞中的 EMT以及HDAC9 可通過抑制 β-連環(huán)蛋白信號傳導抑制 A2780 細胞中的 EMT。

研究成果：

▲ 圖1.HDAC9 調(diào)節(jié)FOXO1蛋白在 SKOV3 細胞中的亞細胞定位。（A）Western blotting測定A2780和SKOV3細胞中FOXO1的表達。( B , C ) 轉(zhuǎn)染24 h后，通過Western blot檢測A2780和SKOV3細胞中FOXO1的表達。( D , E ) A2780 和 SKOV3 細胞轉(zhuǎn)染 24 h 后 FOXO1 免疫熒光染色。（bar = 30μm）。( F , G )轉(zhuǎn)染24 h后，分離A2780和SKOV3細胞核，檢測FOXO1的表達情況。( H )Western blotting檢測HDAC3在A2780和SKOV3細胞中的表達。

在漿液性卵巢癌中，過表達的 HDAC9 可以增加 FOXO1 的核定位并促進 TGF-β 的表達。HDAC9 激活 EMT 并促進細胞遷移，這可能是由于 FOXO1/TGF-β 軸的激活。相反，在非漿液性卵巢癌中，過表達的 HDAC9 可能通過減少 β-catenin 的核積累和 β-catenin 在 Lys-49 處的乙?；瘉硪种?EMT。

▲ 圖2.HDAC9 可通過抑制 β-catenin 信號傳導來抑制 A2780 細胞中的 EMT。用 HDAC9 過表達構(gòu)建體、HDAC9-shRNA 質(zhì)粒 (siHDAC9-1/2) 或空載體轉(zhuǎn)染 A2780 和 SKOV3 細胞 24 小時。( A , B ) A2780 和 SKOV3 細胞中 β-連環(huán)蛋白的免疫熒光染色 (bar = 30 um)。( C )分離A2780和SKOV3細胞核，研究β-catenin的表達。( D )Western blot檢測A2780和SKOV3細胞中β-catenin和ac-β-catenin(Lys-49)的表達。

期刊介紹：

Biomedicines是一份國際、科學、同行評審、開放獲取的生物醫(yī)學期刊，每月由 MDPI 在線出版。主要致力于人類健康和疾病研究的各個方面、新治療靶點的發(fā)現(xiàn)和表征、治療策略以及自然驅(qū)動的生物醫(yī)學、藥物和生物制藥產(chǎn)品的研究。影響因子4.757，5年影響因子5.225。