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  巨蟹king87 2017-12-16 20:13:55

  你的膠是考染的嗎? 首先你得先知道一點蛋白質(zhì)的基本理論知識(不會不知道吧?難道你是學(xué)醫(yī)的?)，或者說蛋白質(zhì)(包括其他分子，如DNA、RNA等)電泳的原理(或者說是分離原理)。只說蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)在正常情況下，一般帶有負(fù)電荷，因由不同的蛋白分子因為性質(zhì)(空間結(jié)構(gòu)以及基團性質(zhì))不同而帶電量不同，這樣結(jié)合蛋白質(zhì)分子本身的不同質(zhì)量，會在電場下(即電泳中)產(chǎn)生不同的移動速度，進而將不同的蛋白分離開。又為了消除蛋白質(zhì)分子間性質(zhì)的差別，創(chuàng)造一個單一因素的電泳分離條件，所以在進行蛋白質(zhì)電泳之前，都會對蛋白質(zhì)進行變性處理(非變性膠等不在此列)，使蛋白質(zhì)肽鏈打開:SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結(jié)構(gòu)。而強還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結(jié)合成蛋白- SDS膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異。 如此，蛋白質(zhì)(準(zhǔn)確的說應(yīng)該是變形后的蛋白質(zhì)或者是蛋白- SDS膠束)便會在電場中根據(jù)不同的帶電量- 亦即分子量而分成不同的條帶。每一條帶代表著不同分子量大小的蛋白質(zhì)組合(一組蛋白質(zhì))。 上面只說的是SDS-PAGE膠蛋白質(zhì)電泳。當(dāng)然，在電泳后，需要進行染色，你才能看到蛋白條帶(Marker除外，因為它是帶有耦合染料的蛋白質(zhì)分子或片段)。

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