SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳問題
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剛開始跑，在濃縮膠就不在一條線上，有的已經(jīng)移動一小節(jié)了有的還沒開始動，但是跑著跑著大約到分離膠時就又到一條線了上了，不知道怎么回事。電泳時感覺加的樣有散的趨勢，上樣20ul，跑著跑著就連成一條線了，對結(jié)果有影響沒？原因？解決辦法！電泳時條帶歪了... 剛開始跑，在濃縮膠就不在一條線上，有的已經(jīng)移動一小節(jié)了有的還沒開始動，但是跑著跑著大約到分離膠時就又到一條線了上了，不知道怎么回事。電泳時感覺加的樣有散的趨勢，上樣20ul，跑著跑著就連成一條線了，對結(jié)果有影響沒？原因？解決辦法！電泳時條帶歪了在Z下面總是亂七八糟的，染色后偏下的地方總是一塊不規(guī)則紫色的，不是帶狀。灌膠時膠漏了，對電泳結(jié)果有影響沒，是不是得重配？分離膠或者濃縮膠配好后使用什么方法使其混勻，用玻璃棒攪拌還是振蕩器鎮(zhèn)或其他方法以上是我電泳以來的所有問題，感謝所有回答人員。 展開
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- 愛—清零 2016-12-02 03:38:43
- 1，濃縮膠的要求就是將所有蛋白在濃縮膠和分離膠梯度的時候?qū)⑺械鞍讐嚎s成一條線，保證他們在同一起跑線上。如果蛋白樣品是不同時間的同一種，可能就是濃縮膠沒搖勻。 至于加樣散，原因就可能是膠質(zhì)不均了。對于結(jié)果應(yīng)該影響不大。電泳時條帶歪了，說明分離膠不勻，Z前面的溴酚藍(lán)如果不在一條線上，就是這個問題，對于Z終結(jié)果有影響，建議重做。當(dāng)然，在灌注濃縮膠前，你可能使用30%酒精封閉過，酒精除不干凈，或者濾紙吸干酒精碰觸了膠面，都會有影響，前者會讓蛋白傳樣，導(dǎo)致所有蛋白散了，后者會導(dǎo)致下面電泳條帶歪了。 染色后偏下方有紫色，我不清楚，只能認(rèn)為是雜質(zhì)……，灌膠漏了無所謂，只要凝固后分離膠能占全版的一半，就能用，兌電泳結(jié)果沒影響。膠配好后混勻不難，手搖即可。 初學(xué)western可以去丁香園看看視頻，順便學(xué)下blot，對于以后試驗進(jìn)行會有所幫助。 傳送門：http://bbs.bbioo.com/forum.php?mod=viewthread&tid=37871&extra=&highlight=western&page=1
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