《GB 5009.257-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中反式脂肪酸的測定》適用于動植物油脂、氫化植物油、精煉植物油脂及煎炸油和含動植物油脂、氫化植物油、精煉 植物油脂及煎炸油食品中反式脂肪酸的測定。

在開展食品反式脂肪酸的檢測時，實驗員經(jīng)常會遇到各種小問題，小編今天整理了一些常見問題進(jìn)行分享學(xué)習(xí)。

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要檢測哪些反式脂肪酸，標(biāo)準(zhǔn)品怎么選擇？

標(biāo)準(zhǔn)要求檢測食品中C16:1t~C22:1t等16種反式脂肪酸。具體目標(biāo)物信息可參見標(biāo)準(zhǔn)附錄A中的“表A.1 脂肪酸甲酯化學(xué)信息表”，詳見下圖。

針對標(biāo)準(zhǔn)要求的反式脂肪酸，安譜實驗推薦的標(biāo)準(zhǔn)品選擇方案見下表，分別是6種反式單不飽和脂肪酸甲酯、4種十八碳二烯酸甲酯、8種十八碳三烯酸甲酯。

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反式脂肪酸標(biāo)品的使用有些什么注意點？

上述推薦的3種反式脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品中十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸甲酯均為同分異構(gòu)體混合物形式，均無準(zhǔn)確濃度，這是反式脂肪酸的性質(zhì)及其生產(chǎn)工藝導(dǎo)致，但這并不影響結(jié)果的計算，因為標(biāo)準(zhǔn)中反式脂肪酸的定量方法是面積歸一化法，并不需要確定某一個反式脂肪酸的準(zhǔn)確濃度，此標(biāo)準(zhǔn)品更重要的作用是目標(biāo)物的定性。

4種十八碳二烯酸甲酯混標(biāo)和8種十八碳三烯酸甲酯混標(biāo)中的目標(biāo)物信息見下表，可以看出2個混標(biāo)中分別含有順-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亞油酸甲酯）和順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（亞麻酸甲酯）這兩種順式脂肪酸甲酯。因此推薦的3種混標(biāo)產(chǎn)品中總共含有18個目標(biāo)物。

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檢測食品中反式脂肪酸

還需要檢測其他常見脂肪酸嗎？

檢測食品中的反式脂肪酸需要同時檢測其他順式脂肪酸，上圖為國標(biāo)中反式脂肪酸的計算公式，反式脂肪酸的定量計算是使用歸一化法，從公式可以看出需要計算樣品中所有脂肪酸甲酯目標(biāo)物的校準(zhǔn)峰面積。通常我們建議可以和《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》同時檢測，因此檢測食品中反式脂肪酸還需要采購37種脂肪酸甲酯混標(biāo)（貨號：CDAA-252795-MIX-1ml）進(jìn)行檢測。

需要注意的是“GB 5009.168-2016”和“GB 5009.257-2016”兩個標(biāo)準(zhǔn)中脂肪酸的歸一化法的計算公式是并不一樣，在實際檢測過程中需要分別參照標(biāo)準(zhǔn)要求的公式進(jìn)行計算。下圖為使用“GB 5009.257-2016”標(biāo)準(zhǔn)檢測大豆油樣品中反式脂肪酸的計算公式模板。

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標(biāo)準(zhǔn)品中有一些脂肪酸甲酯的CAS號和標(biāo)準(zhǔn)不一樣？

因不飽和脂肪酸甲酯存在順反異構(gòu)，以及順反物質(zhì)的混合物，因此可能設(shè)計多個CAS號，所以需要對標(biāo)準(zhǔn)品的CAS號信息特別注意。特別是“GB 5009.257-2016”中的CAS號信息情況，詳見下表，而在“GB 5009.168-2016”中目標(biāo)物的CAS號信息均正確無誤，各位老師可以結(jié)合“GB 5009.168-2016”進(jìn)行目標(biāo)物CAS號信息的確認(rèn)。

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有一些反式脂肪酸和順式脂肪酸分離度較差怎么優(yōu)化？

在脂肪酸檢測過程中常常遇到的一個問題是，順式脂肪酸 C18:3 6c,9c,12c 和一些反式十八碳三烯酸為同分異構(gòu)體，且在色譜柱上出峰時間完成重合，無法分離，這樣就會導(dǎo)致如果樣品中有出峰，則無法判定該目標(biāo)物是反式和順式的結(jié)構(gòu)，影響結(jié)果判定。小編今天提供2種色譜條件的優(yōu)化方向供各位老師參考。

色譜條件優(yōu)化1（降低初始溫度，降低升溫速率）：

該色譜條件下的譜圖見下圖：

色譜條件優(yōu)化2（降低初始溫度，降低升溫速率，使用梯度流速）：

該色譜條件下的譜圖見下圖：

《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》適用于食用油、乳粉等食品中脂肪酸的檢測。在開展食品脂肪酸的檢測時，實驗員經(jīng)常會遇到各種小問題，小編今天整理了一些常見問題進(jìn)行分享學(xué)習(xí)。

\ 脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品如何選擇？/

國標(biāo)《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》按照定量方法分為三個方法，分別是內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法和歸一化法。內(nèi)標(biāo)法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)，十一碳酸甘油三酯作為定量內(nèi)標(biāo)；外標(biāo)法需要使用相應(yīng)的脂肪酸甘油三酯作為定量外標(biāo)；歸一化法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)。

\ 37種脂肪酸甲酯混標(biāo)如何使用，

內(nèi)標(biāo)法如何配置標(biāo)準(zhǔn)曲線？/

上圖為國標(biāo)GB 5009.168-2016 標(biāo)準(zhǔn)截圖，可以看出，內(nèi)標(biāo)法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的內(nèi)標(biāo)溶液；而混合脂肪酸甲酯標(biāo)液不需要配置標(biāo)準(zhǔn)曲線，僅用于定性和脂肪酸甲酯響應(yīng)因子的計算。

如果選購安譜實驗的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)液（CDAA-252795-MIX-1ml，不同濃度于異辛烷，總計10 mg/mL），建議取1.0mL 混合標(biāo)液稀釋至5mL或10mL，得到總計2mg/mL或1mg/mL的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

內(nèi)標(biāo)法的計算公式見上圖，可以看出，脂肪酸甲酯混標(biāo)的作用主要是用來計算脂肪酸甲酯相對十一碳酸甲酯的響應(yīng)因子，因此進(jìn)樣單點的標(biāo)準(zhǔn)溶液即可；樣品中脂肪酸甲酯的含量計算主要取決于樣品中添加的十一碳酸甲酯內(nèi)標(biāo)的含量和樣品中各脂肪酸甲酯的峰面積及其響應(yīng)因子。樣品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以轉(zhuǎn)換系數(shù)得到。

\ 使用CD-2560進(jìn)樣37種脂肪酸甲酯為什么只出了36個峰？/

不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱，色譜柱污染、柱效下降的色譜柱都可能導(dǎo)致37種脂肪酸的分離有所變化，建議可通過調(diào)整流速等參數(shù)優(yōu)化色譜條件，以達(dá)到最 優(yōu)分離度。

建議先在 0.8mL/min 的流速條件下查看目標(biāo)峰的分離情況，根據(jù)出峰情況，如果是 31 號和 32 號峰分離變差就增加流速，如果是 24 號峰、30 號峰和 35號峰分離變差就減小流速，通過流速的微調(diào)以找到最 優(yōu)的分離條件。具體調(diào)整方法可查看安譜實驗相關(guān)的單頁“37種脂肪酸甲酯分離的小秘密，你知道嗎？”。

\ 外標(biāo)法檢測有哪些需要注意？/

如標(biāo)準(zhǔn)截圖所示，外標(biāo)法使用脂肪酸甘油三酯作為標(biāo)準(zhǔn)品，但需要將脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過酯交換轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅峒柞ド蠙C(jī)檢測，不可直接將脂肪酸甘油三酯直接上機(jī)檢測，也不可使用脂肪酸甲酯作為外標(biāo)進(jìn)行定量計算。

上圖為外標(biāo)法計算公式，可以看出，外標(biāo)法是直接計算樣品中脂肪酸的含量，不需要計算脂肪酸甲酯的含量。通過脂肪酸甘油三酯的單點外標(biāo)法進(jìn)行計算，計算結(jié)果主要與脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度、脂肪酸甲酯的峰面積和脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的系數(shù)有關(guān)。脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的選擇可根據(jù)實際樣品中脂肪酸的含量進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，使其盡量接近樣品中含量。

答：定氮儀的設(shè)計使用壽命是10年，具體要根據(jù)自己的實驗量的多少以及日常保養(yǎng)情況而定。

答：不會，因為在冷凝的過程當(dāng)中會有空氣跟隨氨水一塊進(jìn)入吸收液中會產(chǎn)生氣泡，屬于正?，F(xiàn)象，對實驗結(jié)果沒有影響。

答：定氮儀的易損件主要是消化管，因為是玻璃制品，在日常使用過程中難免出現(xiàn)碰撞、掛擦。建議多配置一部分消化管，產(chǎn)品的易耗品主要體現(xiàn)在日常實驗用的試劑，主要是硫酸銅（催化劑）硫酸鉀（提高硫酸的沸點）濃硫酸、硼酸、氫氧化鈉，鹽酸等。

答：需要，主要是天平，干燥箱、研缽、還有相關(guān)配置試劑的基礎(chǔ)實驗玻璃儀器。

答：配套其它品牌的消解儀需要確定消解儀的消化孔徑與配套廠商是否一致。為保證整個實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與實驗效率，建議購買原廠配套的消解儀。

半自動定氮儀只有蒸餾部分，全自動定氮儀是指含有蒸餾、滴定的一體機(jī)。

答：定氮儀的使用壽命取決于不同廠家采用的原材料，加工工藝和售后服務(wù)。因為凱氏定氮實驗涉及強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫等諸多因素，儀器的日常保養(yǎng)和維護(hù)也是決定儀器使用壽命的重要因素。

（4）超溫報警：當(dāng)蒸汽發(fā)生器的溫度過高時，儀器自動停止工作并報警，保證儀器的使用安全。

答：定氮儀不在國家強(qiáng)制檢定的產(chǎn)品目錄內(nèi)，不屬于計量儀器，因此不需要質(zhì)檢部門的檢定。

答：可以用已知樣品含量的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行校驗，一般常用配置好的硫酸氨進(jìn)行儀器的標(biāo)定校驗。

（來源：濟(jì)南海能儀器股份有限公司）