從細胞培養(yǎng)或血清等復雜樣品中純化蛋白質(zhì)需要多個層析步驟,純化過程中的每一步都需要優(yōu)化,以最大限度地提高目標蛋白質(zhì)的產(chǎn)量和純度。因此,在開發(fā)和優(yōu)化階段要進行小規(guī)模純化實驗,以保留珍貴的樣品,同時提供關鍵信息。
圖1:使用多孔濾板進行純化過程
1、平衡:使用樣品緩沖液;2、裝載樣品;3、清洗未結合的樣品;4、洗脫感興趣的蛋白質(zhì);5、CIP
使用帶有1.2 μm Supor膜的AcroPrep Advance過濾板(PN8039)和Pall的混合模式層析樹脂HEA HyperCel,在多孔板抽濾裝置(PN5017)和真空泵(PN13158)的負壓過濾條件下可高效分離混合樣品中的三種蛋白質(zhì)。
圖2:用1.2 μm Supor膜的AcroPrep Advance過濾板(PN8039)從蛋白質(zhì)混合物中高效回收溶菌酶、人IgG和牛血清白蛋白
為了克服傳統(tǒng)填料的傳質(zhì)限制,獲得更好的流量分布、更快的流速和更高的可及性,從而快速純化目標蛋白質(zhì)或去除污染物,Pall AcroPrep Advance過濾板提供兩種IEX膜,分別為Mustang Q(強陰離子)和Mustang S(強陽離子)。
圖3:使用帶有Mustang Q膜(左圖)和Mustang S膜(右圖)的AcroPrep Advance濾板進行目標蛋白分離
從細胞培養(yǎng)物中回收單克隆抗體(mAB)等胞外蛋白時經(jīng)常需要離心及過濾進行澄清。對于在24孔板中培養(yǎng)細胞的實驗室來說,這些步驟既費時又費錢。利用具有Seitz深層過濾介質(zhì)和Supor EKV(0.65/0.2 μm PES)濾膜的AcroPrep 24孔濾板,可替代離心/過濾/絮凝的方法來澄清細胞培養(yǎng)物,回收上清液中的蛋白質(zhì)。
圖4:使用AcroPrep 24孔板對細胞培養(yǎng)液一步完成澄清和無菌過濾
表1:用Acroprep 24孔澄清/除菌濾板(PN97026)從高密度CHO細胞培養(yǎng)物(26x106 個/mL)中收集IgG(數(shù)據(jù)為平均值)
表2:分別用AcroPrep 24孔澄清/除菌濾板(PN97026)和AcroPrep 24孔除菌濾板(PN97027)從高密度HEK293T細胞培養(yǎng)物(2-4x106 個/毫升)中收集蛋白(數(shù)據(jù)為平均值)
裂解物中的生物大分子濃度比較高,往往比感興趣的目標分子高出數(shù)百萬倍。
離心是沉淀細胞碎片的主要方法;
沉淀法在許多需要小規(guī)模、高通量處理的應用中存在一些限制;
過濾法很容易實現(xiàn)自動化,速度相對較快,并允許使用額外的清洗步驟來最大限度地回收樣本。
圖5:利用帶有3.0 μm GF/0.2 μm Supor濾膜的AcroPrep Advance 96孔過濾裂解物后,樣品濁度降低了95%以上
使用AcroPrep Advance過濾板對裂解液進行澄清后,可以用過濾板進行下游應用,如:
使用AcroPrep Advance NAB過濾板進行質(zhì)粒DNA的核酸純化;
使用帶有Omega膜的AcroPrep Advance過濾板進行超濾脫鹽;
使用AcroPrep Advance NAB過濾板進行核酸純化的RNA分離。
圖6:利用AcroPrep Advance 96孔核酸結合過濾板從HEK293和CHO細胞中分離和純化基因組DNA,用于實時qPCR和新一代測序文庫構建等下游應用
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什么光譜儀能夠檢測出T7, T8, T8Mn這幾個工具鋼牌號里面的元素?
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