1.納米抗體介紹

      納米抗體(nanobody, Nb)僅由兩條重鏈構(gòu)成，其重鏈的可變區(qū)稱為VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)，通過(guò)體外重組表達(dá)制備的VHH 分子質(zhì)量?jī)H僅為15kDa，是傳統(tǒng)抗體的十分之一左右，是抗原結(jié)合片段（scFV，VH-VL）的二分之一左右。

       由于沒(méi)有輕鏈，納米抗體僅有3個(gè)屬于重鏈的抗原識(shí)別區(qū)域（CDRs 區(qū)）。為了彌補(bǔ)缺少的輕鏈CDRs的生物學(xué)活性，納米抗體在 CDR3部分增加了氨基酸長(zhǎng)度（16~18個(gè)氨基酸殘基，對(duì)應(yīng)的傳統(tǒng)抗體的CDR3有8-15個(gè)氨基酸），以增加CDR的多樣性和特異性。

圖1：納米抗體的結(jié)構(gòu)圖（卡梅德生物科技（天津）有限公司 ）

2.納米抗體的表達(dá)和純化策略

     不同于經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體，納米抗體開(kāi)發(fā)的整個(gè)流程主要包括羊駝免疫、噬菌體文庫(kù)構(gòu)建、抗體篩選、表達(dá)純化及驗(yàn)證等階段。羊駝免疫后，從羊駝外周血分離B淋巴細(xì)胞，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板PCR擴(kuò)增獲得多樣化的納米抗體基因片段，然后將其連接到載體上，從而構(gòu)建噬菌體文庫(kù)。隨后進(jìn)行多輪淘洗步驟獲得抗原特異性納米抗體，并對(duì)其進(jìn)行測(cè)序、表達(dá)和驗(yàn)證。

圖2：納米抗體的制備流程（卡梅德生物科技（天津）有限公司 ）

         卡梅德生物建立了完善的哺乳表達(dá)體系進(jìn)行抗體表達(dá)，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等細(xì)胞系，配合卡梅德設(shè)計(jì)的高表達(dá)載體（含有全長(zhǎng)的CMV啟動(dòng)子以及優(yōu)化后的分泌信號(hào)肽序列）進(jìn)行重組抗體表達(dá)與制備。表達(dá)完成后，納米抗體過(guò)鎳柱進(jìn)行純化。再將純化好的納米抗體進(jìn)行Biacore親和力檢測(cè)。

圖3：Fc-VHH納米抗體表達(dá)結(jié)果圖片（卡梅德生物科技（天津）有限公司 ）

3. 納米抗體的應(yīng)用

       納米抗體由于分子量小，是單一基因編碼，容易進(jìn)行基因工程改造，并且可以通過(guò)短小的連接序列聚合多個(gè)納米抗體，形成多價(jià)或者是多特異的抗體結(jié)構(gòu)。納米抗體容易和其他結(jié)構(gòu)(如BSA、IgG-Fc等)形成新的融合分子。在新的融合分子中，納米抗體與其靶抗原定向結(jié)合，與納米抗體融合的部分就能發(fā)揮相應(yīng)的功能，因此可以與其他藥物聯(lián)用，或者是應(yīng)用于診斷和充當(dāng)多種領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)研究工具，應(yīng)用場(chǎng)景廣闊。

     具體詳情可咨詢卡梅德生物官網(wǎng)https://www.kmdbioscience.cn/pages/vhhnamikangtipingtai1.html，或直接拔打13116038708電話咨詢。

參考文獻(xiàn)

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