什么是WB(Western Blot)
蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)是一種基于抗體技術(shù)的經(jīng)典蛋白質(zhì)分析方法,常用于鑒定某種蛋白,并能對該蛋白進行定性和半定量分析,在分子生物學、生物化學、免疫遺傳學等方面有著廣泛的應用。
WB常規(guī)實驗流程
什么是WB(Western Blot)
首先,為了實現(xiàn)重生
要在瑤池里泡七七四十九天
再通過天雷錘煉九九八十一下
最后,再......
(呸,這么久鬼才選擇重生)
什么是WB(Western Blot)
當然我們的蛋白印跡膜想要實現(xiàn)一張膜進行多中抗體檢測,肯定不會經(jīng)歷這么繁瑣的步驟啦,我們可以使用蛋白印跡膜再生液來實現(xiàn)Western blot中轉(zhuǎn)移了蛋白后膜的重復利用。
有的看客會問為什么我們要重復利用蛋白膜呢?因為在Western blot中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學發(fā)光檢測后,有時我們還需要檢測 Actin 、Tubulin 等表達量相對穩(wěn)定的蛋白作為參照,或檢測其它蛋白進行比較。這時我們就可通過使用蛋白印跡膜再生液中特殊成分解離一抗二抗與印跡膜上抗原的結(jié)合從而去除一抗二抗,即可非常方便地重新利用同一張膜檢測其它蛋白。
同時相比較重新跑一個SDS-PAGE膠,使用蛋白印跡膜再生液不僅省時省力,而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,使得實驗結(jié)果的可比性大大增強。最快15-30分鐘就可以完成洗脫全過程。
如何選擇蛋白印跡膜再生液?
我們在選擇蛋白印跡膜再生液時可遵循以下原則:
1. 對蛋白作用溫和,不影響目的蛋白;
2. 適用范圍廣,能夠在多種膜上使用;
3. 無毒無味,可在室溫條件下使用保存;
4. 洗脫效果好,能去除在WB中難以去除、需長孵育時間或孵育溫度在22°C以上的抗體。
再生液產(chǎn)品哪家好?
博鷺騰
博鷺騰依據(jù)上述的原則及特點,推出了兩款蛋白印跡膜再生液,其適用于 PVDF 膜和 NC 膜上的 ECL 化學發(fā)光檢測后的膜再生。
使用方法
1、使用前將 5×蛋白印跡膜再生液用去離子水稀釋為1倍。
2、將膜放在潔凈的玻璃平皿中,倒入 20 mL 的 1× PBS 或 1× TBS 溶液,輕微振蕩 10 min,倒去 PBS 或 TBS 溶液。
3、加入 10~20 mL 的 1× Stripping Buffer,室溫下振蕩 20~60 min,倒去溶液。
4、倒入 20 mL 的 1× PBS 或 1× TBS 溶液,輕微振蕩 10 min,倒去 1× PBS 或 1× TBS 溶液,重復 1 次。
5、倒入相應的封閉液,準備進行下一輪的 Western Blot。
案例分享
注:樣品為bela細胞裂解液
圖1為beta-actin抗體孵育后ECL發(fā)光圖片
圖2為博鷺騰強烈型抗體洗脫液洗脫50min后ECL發(fā)光圖片
圖3為beta-actin抗體重新孵育后ECL發(fā)光圖片
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博鷺騰
博鷺騰作為一家集生命科學儀器設備的研發(fā)、生產(chǎn)、服務于一體的國家高新技術(shù)企業(yè),目前已開發(fā)并上市了多款具有自主知識產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品,形成了活體影像、分子影像、細胞影像以及配套試劑四個系列,用戶包括清華大學、中山大學、南京大學、西北農(nóng)林科技大學等上百家高校及科研單位。
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