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翌圣生物SV40LTA&E1A殘留DNA檢測(cè)試劑盒

近年來，隨著相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)與監(jiān)管體系的日益完善，細(xì)胞與基因治療(Cell and Gene Therapy, CGT)發(fā)展迅速，大量CGT產(chǎn)品進(jìn)入臨床試驗(yàn)，生物技術(shù)公司也爭(zhēng)相布局CGT產(chǎn)業(yè)。

CGT產(chǎn)品的主要形式包括基因治療載體、溶瘤病毒產(chǎn)品、細(xì)胞產(chǎn)品（eg.CAR-T、NK細(xì)胞）等，治療策略包括體內(nèi)和體外，常用的載體包括非病毒類的聚合物膠束、脂質(zhì)體顆粒、質(zhì)粒等以及病毒類的慢病毒（LV）、腺病毒（AdV）、腺相關(guān)病毒（AAV）、逆轉(zhuǎn)錄病毒等。

已知，基于動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)平臺(tái)能夠生產(chǎn)復(fù)雜的生物分子，如重組蛋白和病毒載體。其中，大多數(shù)治療性生物分子藥物都是在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞中生產(chǎn)的。然而，鼠源細(xì)胞與人源的HEK293細(xì)胞相比，缺乏人的細(xì)胞翻譯后修飾系統(tǒng)，因此與人源系統(tǒng)表達(dá)的蛋白有差異。所以，一些重組蛋白在HEK293中生產(chǎn)效果更好，且大多數(shù)治療性病毒載體也是在HEK293中產(chǎn)生的。

自2015年以來，F(xiàn)DA已經(jīng)批準(zhǔn)了7種HEK衍生產(chǎn)品，其中有6種是細(xì)胞和基因療法產(chǎn)品，且HEK293細(xì)胞系或其衍生物被用于生產(chǎn)病毒載體。隨著CGT療領(lǐng)域的不斷發(fā)展，HEK293及其衍生細(xì)胞在病毒載體生產(chǎn)中的應(yīng)用也將越來越廣泛。

HEK293細(xì)胞系等用于慢病毒和腺相關(guān)病毒等的生產(chǎn)，在病毒載體生產(chǎn)工藝中，不僅會(huì)不可避免的產(chǎn)生宿主細(xì)胞殘留DNA和RNA雜質(zhì)，還會(huì)產(chǎn)生SV40大T抗原（LTA）殘留DNA、E1A和E1B殘留DNA等雜質(zhì)。這些雜質(zhì)不僅會(huì)降低病毒載體相關(guān)藥物的有效性，還可能帶來傳染性或致瘤性等安全問題。因此，各國(guó)的監(jiān)管機(jī)構(gòu)都對(duì)生物制品中殘余DNA的含量進(jìn)行了嚴(yán)格管控。

SV40LTA&E1A概念及法規(guī)監(jiān)管要求

HEK293細(xì)胞系是通過用剪切的人腺病毒5型DNA片段（即腺病毒E1A和E1B基因）轉(zhuǎn)化人胚胎腎細(xì)胞而建立的。與此同時(shí)，HEK293亞型和衍生物也被建立起來，詳細(xì)信息如下圖：

HEK293T就是HEK293細(xì)胞系衍生物之一，通過表達(dá)一個(gè)溫度敏感的SV40大T抗原突變體而建立的，即轉(zhuǎn)染了一個(gè)SV40大T抗原(LTA)質(zhì)粒。SV40 LTA質(zhì)粒含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)和CMV啟動(dòng)子區(qū)，且SV40（猴空泡病毒40）是在人類和猴子中都發(fā)現(xiàn)的致瘤病毒。

CDE（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心）最新頒布的2022年5月的《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》和《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中都提到包裝病毒載體用細(xì)胞庫，如HEK293T細(xì)胞，對(duì)其攜帶的具有潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)的Adv E1A序列和SV40大T抗原序列，均應(yīng)進(jìn)行殘留控制。

SV40LTA&E1A殘留DNA的檢測(cè)

《中國(guó)藥典》2020年版三部通則3407規(guī)定，宿主細(xì)胞DNA殘留量檢測(cè)方法為DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR法。這些宿主細(xì)胞殘留DNA的檢測(cè)方法，同樣適用于宿主細(xì)胞中具有潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)的特定轉(zhuǎn)化序列（eg.SV40LTA、E1A）的檢測(cè)。

由于定量PCR法相比于其他兩種方法，具有極高的靈敏度、序列特異性和準(zhǔn)確性，可為生物制藥工業(yè)在工藝研究和成品質(zhì)量控制方面提供可靠的檢測(cè)手段，所以定量PCR法現(xiàn)已成為各生物制品廠家首選檢測(cè)方法。

針對(duì)上述情況，翌圣生物自主研發(fā)了SV40LTA&E1A殘留DNA檢測(cè)試劑盒，采用qPCR法分別特異性擴(kuò)增E1A序列和SV40 LTA序列，專一快速的檢測(cè)包裝病毒載體用細(xì)胞庫，如HEK293T細(xì)胞，來源的SV40LTA和E1A殘留DNA含量。還研發(fā)了與之配套使用的宿主細(xì)胞殘留DNA樣本前處理試劑盒，以及配套的自動(dòng)化核酸提取儀器。

下圖就SV40LTA&E1A殘留DNA檢測(cè)工作流程，進(jìn)行了詳細(xì)介紹：

點(diǎn)擊查看大圖

產(chǎn)品性能：

符合法規(guī)：按照法規(guī)要求進(jìn)行全面驗(yàn)證，可提供驗(yàn)證報(bào)告；

保障品質(zhì)：試劑盒原材料全自主研發(fā)，qPCR Mix等酶產(chǎn)品在超潔凈酶工廠生產(chǎn)；

靈敏度高：定量限可達(dá)101copies/μL水平；

精密度高：批內(nèi)重復(fù)性高，批間差異?。?/p>

專屬性強(qiáng)：特異性檢測(cè)SV40LTA和E1A殘留DNA，不受其他外源基因組DNA干擾；

防干擾強(qiáng)：添加內(nèi)部對(duì)照（IC），便于排除樣本干擾、反應(yīng)配制異常等因素。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒(瓶裝)	18461ES	25T/100T
MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA 磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒FA(預(yù)封裝)	18462ES59	2×16 T/ 6×16T
Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A 全自動(dòng)核酸提取儀	80501ES01	32通量
SV40LTA&E1A Residue DNA Detection Kit SV40LTA&E1A 殘留 DNA 檢測(cè)試劑盒	41310ES	50T/100T

參考文獻(xiàn)

[1] Magdalena Malm.Evolution from adherent to suspension:systems biology of HEK293 cell line development [J].Scientifc Reports,(2020) 10:18996.

[2] EvanTan，Cara Sze Hui Chin，Zhi Feng Sherman Lim，Say Kong Ng.HEK293 Cell Line as a Platform to Produce Recombinant Proteins and Viral Vectors.Front Bioeng Biotechnol.2021 Dec 13;9:796991.

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翌圣為您提供MolPure®磁珠法殘留 DNA 樣本前處理試劑盒（貨號(hào)18461ES25)和SV40LTA&E1A殘留DNA檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)41310ES50）試用裝，每個(gè)客戶限申請(qǐng)1套（即2種試劑盒各1盒），總量限購(gòu)20盒（最終解釋權(quán)歸翌圣生物所有）。

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工作人員收到信息后，會(huì)在2天內(nèi)審核，并在5個(gè)工作日內(nèi)派發(fā)產(chǎn)品。

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