手工測序以及自動(dòng)測序均屬于DNA序列測定，手工測序可分為maxam-gilbert化學(xué)降解法與sanger雙脫氧鏈終止法，事實(shí)上，目前dna序列分析的主流是自動(dòng)測序。373型、377型、310型、3700和3100型等多種型號DNA測序儀均已經(jīng)被美國pe abi公司生產(chǎn)出來了，在這幾款DNA測序儀中，臨床檢測實(shí)驗(yàn)室使用Z多的一種型號要屬310型。

電泳

1. 預(yù)電泳

（1）在完全聚合凝膠以后，將鯊魚齒梳撥出，翻轉(zhuǎn)梳子，在凝膠中插入有齒的一頭，使加樣孔形成。

（2）立即在測序凝膠槽中固定膠板，通常測序凝膠槽的上下槽是分開的，所以，只有將凝膠板固定好以后，才可以將TBE緩沖液加入。

（3）對10×TBE緩沖液進(jìn)行稀釋變成1×TBE，在上下二個(gè)電泳槽中加入該緩沖液。將產(chǎn)生的氣泡去除，將電源接上，對預(yù)電泳進(jìn)行準(zhǔn)備。

（4）如LKB的Macrophor等電泳槽是使用水浴加熱的，那么預(yù)電泳之前需要先加熱水浴至55℃，一些保溫是依靠電泳過程中自身產(chǎn)生的熱而不是通過水浴加熱。

（5）利用30 V/cm的電壓預(yù)電泳20～30min，將凝膠的雜質(zhì)離子去除同時(shí)使凝膠板達(dá)到所需的溫度是預(yù)電泳的目的，高溫電泳會(huì)對GC豐富區(qū)形成的發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)加以避免，會(huì)對測序的結(jié)果產(chǎn)生影響

2. 制備樣品

樣品的制備在預(yù)電泳時(shí)就能夠進(jìn)行，在沸水浴中加熱反應(yīng)完畢的樣品1～3min，馬上放入冰中就行。如果長時(shí)間沒有對樣品進(jìn)行使用，那么就應(yīng)當(dāng)重新處理。能夠使用4～6%聚丙烯酰胺凝膠，膠厚0.4 mm。信號太弱可能是由厚度小于0.4 mm引起的。在加樣的時(shí)候，沒有必要將上層覆蓋的礦物油吸去，然而需要對礦物油下的藍(lán)色樣品小心地進(jìn)行吸取。

3. 上樣及電泳

將電泳儀關(guān)閉，樣品孔用移液槍吸緩沖液進(jìn)行清洗，將在預(yù)電泳時(shí)擴(kuò)散出來的尿素去除掉，然后馬上用毛細(xì)管進(jìn)樣器對樣品進(jìn)行吸取，在樣品孔中加入，G、A、T、C通常為上樣順序，在結(jié)束加樣以后，馬上電泳。開始可用30 V/cm進(jìn)行電泳，5分鐘后可提高至40～60 V/cm，并保持恒壓狀態(tài)。通常而言，在2500 V恒壓狀態(tài)下將一個(gè)55 cm長，0.2 mm厚的凝膠板電泳2h就能夠走到底部，同時(shí)能夠穩(wěn)定地在電泳過程中將電流從28 mA降至25 mA，能夠采用兩輪或多輪上樣以便使得更長的序列被讀到。

當(dāng)今世界，如果要評說哪個(gè)地方會(huì)誕生傳奇，那么必定是高科技領(lǐng)域，從前DNA測序還作為一個(gè)前沿技術(shù)令人高山仰止，如今卻成為一個(gè)生命科學(xué)常規(guī)技術(shù)，迅速地得到普及，目前為止，能夠和電腦芯片運(yùn)算能力增強(qiáng)的速度相媲美的也就只有DNA測序成本下降的速度，DNA測序的發(fā)展除了在降低成本方面得到了體現(xiàn)，還在高通量測序大幅度提高了工作效率方面得以表現(xiàn)，其鋪平了DNA測序產(chǎn)業(yè)化的道路。

Z大的基因組測序及研究應(yīng)用ZX之一位于深圳的華大基因研究院，華大基因承擔(dān)了人類基因組計(jì)劃1%的工作任務(wù)，之后又對國際HAPmap計(jì)劃進(jìn)行了參與與完成，并且將叫做“炎黃一號”di一個(gè)ZG人也是di一個(gè)亞洲人的基因組測序完成了。

在DNA測序商業(yè)化的浪潮下，完成5個(gè)以上有重大經(jīng)濟(jì)價(jià)值的基因或蛋白的轉(zhuǎn)化應(yīng)用、約500個(gè)新的功能基因的發(fā)現(xiàn)，10000種微生物、100種動(dòng)植物基因組測序等目標(biāo)在我國《生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展“十二五”規(guī)劃》中被提出。根據(jù)30-50萬元為微生物進(jìn)行“基因組完成圖”測序的大致費(fèi)用而言，千億元級別為DNA測序帶來的市場容量，其還只是DNA測序商業(yè)應(yīng)用市場的冰山一角。