酶標(biāo)儀在細(xì)胞生物學(xué)與

藥物篩選方面有著非常高的使用頻率

而在各種細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)中

細(xì)胞增殖能力的檢測是

Z為常見也是Z基礎(chǔ)的檢測之一

●為什么要檢測細(xì)胞狀態(tài)呢？

       細(xì)胞狀態(tài)是直接反應(yīng)細(xì)胞生理狀態(tài)的重要指標(biāo)，通過監(jiān)測細(xì)胞在各種化合物刺激作用下的反應(yīng)狀態(tài)，從而確定測試分子是否對細(xì)胞增殖有影響或具有直接的細(xì)胞毒性效應(yīng)。

● 有哪些方法能檢測細(xì)胞增殖能力？

       檢測細(xì)胞增殖的方法很多，目前可用直接法和間接法來測定。其中直接法，是通過直接測定進(jìn)行分裂的細(xì)胞數(shù)來評價(jià)細(xì)胞的增殖能力。例如：Ki67細(xì)胞增殖檢測；BrdU細(xì)胞增殖檢測；EdU細(xì)胞增殖檢測。而間接法，即細(xì)胞活力檢測方法，則是通過檢測樣品中健康細(xì)胞數(shù)目來評價(jià)細(xì)胞的增殖能力。例如：MTT法、CCK8法等。細(xì)胞活力檢測法并不能Zui終證明檢測樣品中的細(xì)胞是否在增殖。如細(xì)胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序，但藥物的干擾可Yi制凋亡的發(fā)生；這時(shí)若采用細(xì)胞活力檢測法，顯然可以區(qū)分兩種條件下的細(xì)胞數(shù)量，但我們并不能從藥物干擾組細(xì)胞數(shù)大于對照組的事實(shí)說明藥物可促進(jìn)細(xì)胞增殖的結(jié)論。所以Z直接的證據(jù)還是直接法的測試結(jié)果。

常見可用于酶標(biāo)儀上的

細(xì)胞活力檢測實(shí)驗(yàn)有哪些？

01.BrdU細(xì)胞增殖檢測

       用 BrdU 預(yù)處理的細(xì)胞中， BrdU 可代替胸腺嘧啶核苷插入復(fù)制的 DNA 雙鏈中，而且這種置換可以穩(wěn)定存在，并帶到子代細(xì)胞中。細(xì)胞經(jīng)過固定和變性處理后，可用免疫學(xué)方法檢測DNA 中 BrdU 的含量（如采用鼠抗 BrdU 單克隆抗體特異識別 BrdU, 再采用辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG 二抗標(biāo)記，Zui后用比色法或熒光的方法進(jìn)行定量測定），從而判斷細(xì)胞的增殖能力。若采用ELISA法進(jìn)行檢測，往往在450nm處進(jìn)行檢測。

02.經(jīng)典實(shí)驗(yàn)—MTT法

       MTT（四氮唑藍(lán)）是一種適合于高通量篩選96孔的細(xì)胞活力測定法。它是利用活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶對MTT進(jìn)行還原，形成不溶于水的紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，Zui后使用特定的有機(jī)溶劑，如二甲基亞砜（DMSO）等溶解后，在570nm處檢測。MTT法實(shí)際上是檢測細(xì)胞線粒體的代謝活力。

優(yōu)點(diǎn)：

步驟少

耗材少

無放射性

缺點(diǎn)：

不適合于懸浮細(xì)胞

細(xì)胞毒性大

培養(yǎng)板中沉淀的細(xì)胞碎片易造成讀數(shù)干擾

03.CCK-8法

       CCK-8是由MTT衍生出來的一種方法，它可以被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。通過酶標(biāo)儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

優(yōu)點(diǎn)：

操作簡單快速

無輻射

可檢測活力和毒性

適合懸浮細(xì)胞

甲瓚可溶于水

缺點(diǎn)：

比MTT貴

試劑顏色與細(xì)胞培養(yǎng)基顏色相近

易漏加

04.SRB比色法

       SRB（Sulforhodamine B）是一種粉紅色陰離子染料，易溶于水，在酸性條件下可特異性地與細(xì)胞內(nèi)組成蛋白質(zhì)的堿性氨基酸結(jié)合；在540 nm波長下產(chǎn)生吸收峰，吸光值與細(xì)胞量成線性正相關(guān)，故可用作細(xì)胞數(shù)的定量檢測。

優(yōu)點(diǎn)：

細(xì)胞固定

不易受化合物干擾

不易變色穩(wěn)定性好

缺點(diǎn)：

操作步驟復(fù)雜

間接法比較

● 提示

       細(xì)胞活性與增殖實(shí)驗(yàn)作為Z常見的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之一，市面上已有很多成熟而穩(wěn)定的試劑廠家，但不同廠家的試劑配方略有差異，因而在檢測方式上也會有略微區(qū)別，客戶需根據(jù)不同廠家的操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)的優(yōu)化。