1.儀器和耗材

鎘柱

蠕動泵管

移液槍

儀器自帶10mL玻璃管及50mL玻璃管

冷凍離心機

中速濾紙

0.45μm尼龍濾膜

超聲波清洗器

除非另有說明，所有試劑均為分析純。實驗用水為超純水機新鮮制備的超純水。除標(biāo)準(zhǔn)溶液外，流動注射試劑和實驗用水均超聲除氣后再使用。

飽和硼砂溶液（50g/L）：稱取25g硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O），溶于500mL熱水中，冷卻后備用。

亞鐵氰化鉀（106g/L）：稱取26.5g亞鐵氰化鉀［K4Fe(CN)6·3H2O］，用水溶解，并稀釋至250mL。

乙酸鋅溶液（220g/L）：稱取55g乙酸鋅［Zn(CH3COO)2·2H2O］，加入7.5mL冰乙酸，用水溶解并稀釋至250mL。

氯化銨緩沖溶液（pH=8.5）：先配制溶液1，再配制緩沖溶液，具體如下。

溶液1：稱取42.5g氯化銨(NH4Cl）、0.5g乙二胺四乙酸二鈉（EDTANa2·2H2O）到燒杯中，加入300mL超純水進行溶解，完全溶解后將樣液移入500mL容量瓶中，洗滌液一并移入，水定容至刻度，配制好后將溶液倒入1000mL試劑瓶中。

緩沖溶液：稱取2g氫氧化鈉（NaOH）到燒杯中，加入30mL水進行溶解，完全溶解后將樣液移入50mL容量瓶中，洗滌液一并移入，水定容至刻度，將這50mL氫氧化鈉溶液全部倒入溶液1所在的試劑瓶中與之混合，混勻后使用。此溶液放冰箱可保存3個月。

顯色劑：往燒杯中加入200mL超純水，量筒量取50mL磷酸（ρ=1.69 g/mL，優(yōu)級純），緩慢倒入燒杯中，混勻，稱取20g磺胺（C6H8N2O2S）、0.5g鹽酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl），倒入燒杯中進行溶解，完全溶解后將樣液移入500mL容量瓶中，洗滌液一并移入，水定容至刻度。此溶液室溫下保存1個月。

亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度：100mg/L（以N計）。

2.分析步驟

選擇13個250mL錐形瓶，編號1-13，1號錐形瓶加入10mL超純水，2-13號錐形瓶則準(zhǔn)確稱取5g（精確到0.001g）預(yù)制菜樣品移入瓶中。1號為空白樣，2-4號作為預(yù)制菜樣品，5-7號作為低濃度加標(biāo)樣（加標(biāo)濃度為3mg/kg），8-10號作為中濃度加標(biāo)樣（加標(biāo)濃度為10mg/kg），11-13號作為高濃度加標(biāo)樣（加標(biāo)濃度為20mg/kg）。

往錐形瓶中加入12.5mL飽和硼砂溶液（50g/L），搖勻后加入150mL 70℃的超純水，搖勻后放入水浴鍋中沸水浴15min，之后將錐形瓶取出，放入水中進行冷水浴，待樣液冷至室溫后，往里面加入5mL亞鐵氰化鉀溶液（106g/L），搖勻，接著加入5mL乙酸鋅溶液（220g/L），多次搖勻，將樣液移至200mL容量瓶中，清洗液也全部移入容量瓶，用水定容至刻度，靜置30min。

取上清液50mL到離心管中，放入冰箱冷藏過夜或放入冷凍30min再放入冰箱冷藏10min。將冷藏過后的樣液從冰箱取出，放入離心機4℃冷凍離心5min（轉(zhuǎn)速8000min?1），離心后用濾紙（中速）將樣液過濾，移取30mL濾液到另一個離心管，稱取1g顆粒性活性炭加入離心管中，振蕩1min，靜置5min，之后用0.45μm尼龍濾膜過濾，濾液超聲2min，上流動注射分析儀測試。

將亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液用水稀釋成1.00mg/L（以NaNO2 計）的母液，母液倒入儀器自帶的50mL玻璃管中，玻璃管放入儀器樣品盤中。

選擇亞硝酸鹽的儀器方法，編輯序列，讓儀器自動稀釋一條標(biāo)曲（稀釋倍數(shù)為1代表原液不稀釋），亞硝酸鹽母液為1.00mg/L，稀釋6個點，標(biāo)曲點稀釋倍數(shù)分別為20、10、5、4、2、1，濃度為：0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L；再加超純水為0 mg/L，一共7個點。

將儀器調(diào)到正常狀態(tài)后，選擇儀器方法儀器自動稀釋標(biāo)曲。

質(zhì)控樣使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線測試結(jié)果如下表1、圖3。

選擇3種預(yù)制菜（炒空心菜、咖喱雞塊、黃花魚）作為樣品，進行低中高三種濃度加標(biāo)測試，加標(biāo)濃度分別為3mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，樣品3平行，每個加標(biāo)濃度3平行，加標(biāo)后根據(jù)上2.2的步驟進行前處理，前處理的濾液上機測試。加標(biāo)樣測試結(jié)果如下表2、表3、表4。

由數(shù)據(jù)可看出，三種預(yù)制菜加標(biāo)回收率在93.4%~101%之間。

將儀器調(diào)到正常狀態(tài)，選擇亞硝酸鹽的儀器方法，編輯序列，使用空白樣（經(jīng)過前處理的空白樣）進樣，重復(fù)20次，計算檢出限，具體數(shù)據(jù)見表5。

檢出限使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.9741 x-0.03156；R2=0.9995；

亞硝酸鹽流動注射分析法的檢出限為0.40 mg/kg（以NaNO2 計）。

3.注意事項