1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

Shimadzu LC-20AD 高效液相色譜儀；

色譜柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）；

純水機(jī)：PR-FP-0120α-MT1（+60L水箱+取水器）

SHIMSEN Disc 尼龍雙膜針頭過濾器（P/N：380-00326）；

LC/MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet 移液槍：SHIMSEN Pipet PMII-10（ P/N：380-00751-02）；

SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；

SHIMSEN Pipet PMII-1000（ P/N：380-00751-06）。

1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

分別準(zhǔn)確稱取鹽酸吡哆醛、鹽酸吡哆醇、鹽酸吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)品適量，加 0.1 mol/L 鹽酸溶液配制成每 1mL 含 1mg 的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液；分別取吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，加流動(dòng)相 A 制成每 1mL 分別含吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺 20μg 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液；取維生素 B6 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液適量，加水制成每 1mL 分別含吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺40ng 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 試樣溶液的制備

稱取試樣 2g（精確至 0.01g）于150mL 錐形瓶中。加入 25mL 45℃的水，混勻。靜置 10min，冷卻至室溫。用0.1mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié)上述試樣溶液的pH至1.76，放置1min。再用0.1mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)試樣溶液的 pH 至4.42。把上述錐形瓶放入超聲波振蕩器中，超聲振蕩約10min。將試樣溶液轉(zhuǎn)移至 50 mL容量瓶中，用水沖洗錐形瓶。洗液合并于 50mL容量瓶中，用水稀釋至50mL。另取 50mL錐形瓶，上面放入漏斗和濾紙，把稀釋后的試樣溶液倒入其中，自然過濾。濾液再經(jīng) 0.45μm微孔濾膜過濾后轉(zhuǎn)移1mL至棕色進(jìn)樣瓶作為試樣待測液。

1.4 分析條件

色譜柱：ShimNex CS C18（5 μm，4.6×150 mm；P/N：380-01230-02）

柱溫：30 ℃

檢測波長：激發(fā)波長 293 nm，發(fā)射波長395nm

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：20μL

流動(dòng)相：A：庚烷磺酸鈉與三乙胺混合溶液：稱取庚烷磺酸鈉 2.0 g，用 950 mL 水溶解， 準(zhǔn)確加入 4.0 mL 三乙胺，用冰乙酸調(diào)pH至 3.07，然后轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，并以超純水稀釋至刻度，經(jīng) 0.45 μm微孔濾膜過濾。

B：甲醇

梯度程序如下：