- 2025-01-10 17:02:23純化小課堂
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純化小課堂問答
- 2023-04-04 15:58:48【THUNDER小課堂】腦神經(jīng)發(fā)育
- 整個小鼠胚胎的圖像:(左)原始寬場成像結(jié)果和(右)應(yīng)用Large Volume Computational Clearing(LVCC)后的成像結(jié)果。圖片來源:A. Popratiloff和Z. Motahari,美國喬治·華盛頓大學(xué)。本文介紹了如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing(LVCC)對小鼠胚胎快速、高對比度成像,實現(xiàn)了對軸突生長和腦神經(jīng)發(fā)育的研究。許多在發(fā)育早期階段損害神經(jīng)回路發(fā)育的遺傳性疾病被認(rèn)為會對行為造成干擾。用小鼠模型研究早期神經(jīng)發(fā)育的細(xì)胞變化、定義與人類疾病相似的行為及潛在發(fā)育機(jī)制,是非常困難的。而鑒別發(fā)育的神經(jīng)元回路中三叉神經(jīng)(其參與面部感覺和運(yùn)動機(jī)能)軸突生長的早期分化,使得這些困難迎刃而解。簡介人們普遍認(rèn)為,很多遺傳性疾病都通過損害神經(jīng)回路發(fā)育的早期階段來對行為產(chǎn)生干擾[1]。事實證明,在模型動物中分辨早期神經(jīng)發(fā)育中細(xì)胞的此類變化具有一定的難度。用與人類遺傳性疾病中臨床顯著缺陷相似的基因突變小鼠模型來定義行為、神經(jīng)回路和潛在發(fā)育機(jī)制,是非常困難的[1]。檢測單個神經(jīng)元初始分化中的變化難以實現(xiàn)。這些挑戰(zhàn)可通過確定發(fā)育的神經(jīng)回路中三叉神經(jīng)這一關(guān)鍵組分的軸突生長的早期分化來解決[1]。通過著眼于參與面部感覺及運(yùn)動機(jī)能如哺乳、進(jìn)食、咬、咀嚼和吞咽等的三叉神經(jīng)(腦神經(jīng)V),以及軸突生長和原生傳導(dǎo)通路,可以對使用組織學(xué)處理可能會缺失的三維環(huán)境進(jìn)行研究[1]。本文介紹如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing(LVCC)[2,3]對小鼠胚胎快速、高對比度成像,以幫助進(jìn)行腦神經(jīng)發(fā)育研究。挑戰(zhàn)如要以實用高效的方式對整個小鼠胚胎成像,快速、清晰的高對比度3D成像解決方案,對于重要細(xì)節(jié)展示和解析大有益處。相較于激光共聚焦成像,可在很短的時間內(nèi)一次性采集到完整胚胎的成像結(jié)果。傳統(tǒng)寬場顯微成像速度快,檢測靈敏度高,但是對厚標(biāo)本的成像,如小鼠胚胎,通常會由于非焦平面信號的影響,呈現(xiàn)模糊的成像結(jié)果,降低圖像對比度[2,3]。方法使用THUNDER Imager 3D Cell Culture對小鼠胚胎成像。使用抗βIII微管蛋白(Tuj1)抗體對胚胎的神經(jīng)系統(tǒng)和腦神經(jīng)進(jìn)行染色。結(jié)合BABB透明化處理,即可對整個胚胎中的神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行三維結(jié)構(gòu)成像。圖1中的圖像使用數(shù)值孔徑(NA)0.75、工作距離700μm的20x多浸液物鏡采集。該圖像由32個視野拼接組成,成像深度為672 μm(337層切),采集了完整的胚胎結(jié)構(gòu)。數(shù)據(jù)采集總時長為18分鐘。結(jié)果通過LVCC和Instant Computational Clearing(ICC)將寬場成像固有的非焦面模糊信號清除[2,3]。之后,再使用徠卡自適應(yīng)式反卷積技術(shù)來增強(qiáng)三維特征結(jié)構(gòu)的分辨率[4]。這種成像模式便于觀察胚胎的神經(jīng)結(jié)構(gòu)以及胚胎的整體布局中更有價值的神經(jīng)元定位。圖1:展示整個小鼠胚胎的俯視圖,顯示原始數(shù)據(jù)(A)與應(yīng)用LVCC后(B)的差異。根據(jù)相對物鏡深度進(jìn)行顏色標(biāo)識的胚胎的角度視圖,其中zui大深度為672 μm。C)應(yīng)用LVCC后的腦部側(cè)視圖,顯示了沿Z軸方向的精密細(xì)節(jié)。圖片來源:Anastas Popratiloff博士和Zahra Motahari博士,喬治·華盛頓大學(xué)納米制造與成像中心(GWNIC),美國華盛頓特區(qū)。結(jié)論與傳統(tǒng)的寬場成像不同,THUNDER技術(shù)Large Volume Computational Clearing(LVCC)[2,3]在對小鼠胚胎中的腦神經(jīng)發(fā)育成像時,顯著增強(qiáng)了圖像對比度,對精密細(xì)節(jié)有更好的解析。References:1.Z. Motahari, T.M. Maynard, A. Popratiloff, S.A. Moody, A.-S. LaMantia, Aberrant early growth of individual trigeminal sensory and motor axons in a series of mouse genetic models of 22q11.2 deletion syndrome, Human Molecular Genetics (2020) vol. 29, iss. 18, pp. 3081-3093, DOI: 10.1093/hmg/ddaa199.2.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.3.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.4.V. Kohli, J.M. Marr, O. Schlicker, L. Felts, The Power of Pairing Adaptive Deconvolution with Computational Clearing: Technical Brief, Science Lab (2021) Leica Microsystems. 相關(guān)產(chǎn)品THUNDER Imager 3D Live Cell 和 3D Cell Culture
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- 本生課堂:實驗室微量移液器小知識 微量移液器是一種標(biāo)準(zhǔn)的實驗室設(shè)備,用于精確地量取和轉(zhuǎn)移少量液體。市場上有幾種類型的微量移液器,可根據(jù)以下類型進(jìn)行分類: 體積:固定或可變體積的微量移液器 操作原理:空氣置換或容積式微量移液器?! 〔僮鳈C(jī)構(gòu):機(jī)械或電子微量移液器 通道數(shù):單通道或多通道微量移液器?! W(xué)會正確使用微量移液器被認(rèn)為是一項的實驗室技能,它是微生物實驗室、醫(yī)學(xué)實驗室、大學(xué)和研究實驗室廣泛使用的工具?! ∥⒘恳埔浩鞑考骸 ”M管微量移液器不盡相同,但所有微量移液器的基本部件都是相同的: 柱塞是微量移液器的最頂端部分,用于調(diào)節(jié)體積以及將所需量的液體吸入和分配到微量移液器的。柱塞中有兩個擋塊,用于在正向和反向移液中吸取液體?! 棾霭粹o:只需按下吸頭彈出按鈕,即可輕松從微量移液器中取出吸頭,而無需接觸它們。 容量窗口:調(diào)整后的容量顯示在容量窗口中(要吸入/分配的容量)?! ∥⒘恳埔浩鬏S:是充滿空氣的管子。推動活塞排出桿中包含的一定體積的空氣,釋放活塞允許這些空氣返回桿?! ∥⒘恳埔浩魑^:是附在微量移液器上的吸頭,用于收集液體,然后將其從一個地方轉(zhuǎn)移到另一個地方。不同尺寸的吸頭用于收集不同體積的液體?! ∥⒘恳埔浩鞯念愋停骸 「鶕?jù)體積的微量移液器類型 固定體積微量移液器:固定體積微量移液器的體積不能改變,每次分配時分配相同數(shù)量的液體?! 】勺凅w積微量移液器:可以根據(jù)微量移液器的容量(特定的最小和體積范圍)調(diào)整要吸取或分配的液體體積?! 「鶕?jù)操作機(jī)制的微量移液器類型: 機(jī)械移液器中的柱塞壓力和真空被電動移液器中的按鈕所取代,并且可以對電動移液器進(jìn)行編程以遵循您的工作協(xié)議?! ∨艢馐轿⒘恳埔浩鳎寒?dāng)柱塞被壓下時,它會下降到儀器內(nèi)部以排出空氣。排出的空氣量等于吸入/分配的液體量。 容積式微量移液器:柱塞與樣品直接接觸,在這些微量移液器中,包含筒和柱塞(如注射器)?! ∥⒘恳埔浩魅绾喂ぷ? 當(dāng)柱塞被按下時,由于微量移液器吸頭中的液體也被推出的力,微量移液器套管內(nèi)的空氣被排出?! ‘?dāng)活塞向上運(yùn)動時,在活塞騰出的空間內(nèi)產(chǎn)生真空。這導(dǎo)致吸嘴中的空氣上升以填充空置空間,然后吸嘴中的空氣被吸入吸嘴的液體代替。 【本文標(biāo)簽】 移液器 吸頭 移液器吸頭 微量移液器 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。
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