【概述】

蔬菜作為人們?nèi)粘Ｉ钪斜夭豢缮俚氖称?，其日常消費量和市場需求量巨大。蔬菜種植過程中，為了提高蔬菜的產(chǎn)量，改善其品質(zhì)，施用農(nóng)藥不可避免，由于缺少施用常識及監(jiān)管措施，在農(nóng)藥的使用過程中存在濫用、誤用等不規(guī)范現(xiàn)象，種植者在農(nóng)藥的選擇上往往傾向于價格低廉，且GX的農(nóng)藥，而忽略了農(nóng)藥毒性及高殘留等問題；另外，為了提高果蔬的產(chǎn)量和質(zhì)量，減少種植、采摘以及運輸、存儲過程中的損失，種植者經(jīng)常多種高毒農(nóng)藥混配使用，而且加大了施YY量和頻次，這不僅使得果蔬中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，并且加重了農(nóng)藥在產(chǎn)區(qū)周邊環(huán)境中的殘留，形成了難以逆轉(zhuǎn)的惡性循環(huán)。許多國家和國際性組織（CAC、歐盟、美國、日本和ZG等）對農(nóng)藥的Zda殘留限量（MRLs）進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定[1]。蔬菜中農(nóng)藥殘留問題，不僅成為食品安全領(lǐng)域面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，而且也制約了我國蔬菜產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易[2][3]。因此，農(nóng)藥多殘留檢測方法已成為國內(nèi)及國際上的ZD研究方向，許多檢測技術(shù)也應(yīng)運而生。

有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是常用農(nóng)藥，包括多種高毒、劇毒農(nóng)藥及我國禁用農(nóng)藥。我國已頒布了GBNY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》[4]的檢測方法。本實驗參照此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，采用賽默飛世爾科技全新一代三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（TSQ 8000Evo）結(jié)合對應(yīng)的農(nóng)藥殘留篩查方法包（670種化合物質(zhì)譜信息），對樣品中含有的有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行篩查，進(jìn)而對其中含有的相應(yīng)農(nóng)藥進(jìn)行確證和定量。

【樣品提取】

實驗前處理方法參照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》。具體前處理方法如下：

取可食部分，經(jīng)縮分后，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣；準(zhǔn)確稱取25.0 g，加入50.0 mL

乙腈，高速均質(zhì)2 min后過濾，濾液中加入5-7g氯化鈉，震蕩，靜置；取上清液10 mL，80℃水浴加熱，氮氣或空氣濃縮至干；加入2.0 mL丙酮，轉(zhuǎn)移至15 mL，3.0 mL丙酮洗三次，定容至5.0 mL，過0.2μm濾膜后待檢測。

【實驗/操作方法】

色譜方法

程序升溫梯度：40℃(維持1.5 min)，25℃/min到90℃(維持1.5 min)，25℃/min到180℃(維持0 min)，5℃/min到

280℃(維持0 min)，10℃/min到300℃(維持5 min)

進(jìn)樣口溫度: SSL (270℃)   Splitless

載氣流速：1.2 mL/min (恒流)

傳輸線溫度：280℃

進(jìn)樣體積：1.0μL

質(zhì)譜方法

離子源溫度：300℃。

結(jié)合RT-Alignment功能的定時掃描-SRM模式（Timed -SRM）。

運用賽默飛世爾農(nóng)藥殘留方法包（含670種農(nóng)藥化合物質(zhì)譜方法）進(jìn)樣農(nóng)殘定性篩查和定量檢測。

【實驗結(jié)果/結(jié)論】

快速篩查方法建立

農(nóng)藥殘留方法包中包含了670種農(nóng)藥化合物優(yōu)化后的相關(guān)信息，包括離子對（母離子和子離子）、碰撞能量、掃描時間、駐留時間及監(jiān)測反應(yīng)離子的數(shù)目等一系列質(zhì)譜參數(shù)。利用TSQ8000Evo氣質(zhì)聯(lián)用儀的高速掃描，采用特有的Timed -SRM模式，快速建立儀器采集方法，如圖1，圖2所示。

圖1. 670種農(nóng)藥化合物相關(guān)信息

圖2. 670種農(nóng)藥化合物儀器采集方法

農(nóng)藥種類確定途徑

Trace Finder軟件結(jié)合農(nóng)藥殘留方法包可直接、快速建立數(shù)據(jù)處理方法。對采集樣品的數(shù)據(jù)進(jìn)行快速處理，確定所含農(nóng)藥的具體種類以及相應(yīng)的保留時間。如圖3所示。

圖3.對具體農(nóng)藥化合物進(jìn)行確證

篩查方法驗證

首先應(yīng)用上述建立好的快速篩查方法，對基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)磷(濃度8μg/kg），有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類(濃度10μg/kg）進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，使用Trace Finder進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，確定了18種有機(jī)磷農(nóng)藥及17種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥離子對信息，如表1所示。根據(jù)確認(rèn)的農(nóng)藥信息優(yōu)化儀器采集方法，對實際樣品進(jìn)行定量檢測分析，以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時對其他樣品進(jìn)行定量。檢測的實際樣品共12個（依照標(biāo)準(zhǔn)，有機(jī)磷、有機(jī)氯及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分別進(jìn)行樣品前處理。每個樣品有2個濃度，每個濃度3個平行樣品。

色譜分離結(jié)果

實驗所采用的TG-5SILMS色譜柱對農(nóng)藥化合物有良好的分離效果。35種農(nóng)藥在2個基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（濃度≤10μg/kg）樣品中均得到了良好的色譜圖，如圖4所示。本實驗在保證了農(nóng)藥化合物分離的同時，避免了基質(zhì)中干擾物質(zhì)的影響，使定性結(jié)果達(dá)到方法要求，真實可靠。

圖4. 35種農(nóng)藥化合物的色譜圖

定性結(jié)果

按照歐盟方法指令[5]，質(zhì)譜方法的確證要求必須達(dá)到4個定性點，表2及表3列出了具體判定標(biāo)準(zhǔn)及常見檢測方式的定性點數(shù)量要求。對于GC-MS/MS，3對離子對的定性點有5-6個，完全達(dá)到了相關(guān)方法的要求。因此，實現(xiàn)了良好的定性效果。圖5，圖6，圖7為樣品中農(nóng)藥丙溴磷、林丹及氯氟氰菊酯特征離子色譜圖及離子比率圖。

表2.定性點判定標(biāo)準(zhǔn)

注：

(1)每一種離子只能計算一次；

(2)轉(zhuǎn)換產(chǎn)物包括子離子和次級子離子產(chǎn)物。

表3.常見檢測方式的定性點

圖5.丙溴磷特征離子色譜圖及離子比率圖

圖6.林丹特征離子色譜圖及離子比率圖

圖7.氯氟氰菊酯特征離子色譜圖及離子比率圖

定量結(jié)果

Trace Finder軟件可以在確定農(nóng)藥種類的同時對樣品中含有的農(nóng)藥殘留進(jìn)行準(zhǔn)確定量。使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對樣品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行定量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，針對特定化合物儀器的定量水平達(dá)到1μg/kg以下，完全滿足日常農(nóng)藥殘留檢測的要求（10μg/kg），并且在低濃度時也能獲得良好的譜圖效果和穩(wěn)定的重復(fù)性。實際樣品檢測到的各目標(biāo)物農(nóng)藥濃度如表4所示。

表4.樣品定量結(jié)果

注：“N.A”為未檢出

儀器穩(wěn)定性實驗

將2個基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品各連續(xù)進(jìn)樣10次，計算每個目標(biāo)物濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），測試儀器的穩(wěn)定性，如圖8所示。結(jié)果顯示，所有農(nóng)藥化合物RSD均在20%以下。35種農(nóng)藥化合物RSD＜15%，占總數(shù)的91.4%。儀器在低濃度水平（≤10μg/kg）連續(xù)進(jìn)樣的結(jié)果顯示，儀器穩(wěn)定性良好，滿足檢測需求。

圖8. 35種農(nóng)藥化合物RSD值分布

結(jié)論

賽默飛世爾農(nóng)藥殘留篩查方法包含有670種農(nóng)藥化合物信息，方法包內(nèi)所涉及的化合物均為常見農(nóng)藥殘留化合物，篩查方法快速簡便，真實可靠。實驗結(jié)果表明TSQ8000  Evo在農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留定性定量應(yīng)用領(lǐng)域，具有高選擇性、高靈敏度、高穩(wěn)定性和高通量，定性、定量結(jié)果良好，完全能夠勝任監(jiān)管部門要求的實際樣品中不確定農(nóng)藥的低濃度篩查、確認(rèn)和定量分析的要求。

【儀器/耗材清單】

質(zhì)譜儀：TSQ8000Evo質(zhì)譜儀(賽默飛世爾科技，美國)；

氣相色譜儀：Trace1310氣相色譜配AI 1310自動進(jìn)樣器(賽默飛世爾科技，美國)；

色譜柱：TG-5SILMS  30 m×0.25 mm×0.25μm毛細(xì)管色譜柱；

試劑：正己烷，丙酮；

【參考文獻(xiàn)】

[1] http: / /www.mrldatabase.com/results.cfm

[2]李曉娟等.色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的特點及其在食品污染物分析研究中的應(yīng)用[J].分析測試學(xué)報,2012,31(5):628-632.

[3]陳燕清,顏流水.食品中農(nóng)藥殘留前處理技術(shù)進(jìn)展[J].江西化工,2004(3):17-23．

[4] NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》

[5] European Union (2002) commission decision 2002/657/EC of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and theinterpretation of results.