不經(jīng)樣品凈化和色譜的生物分析：對(duì)實(shí)時(shí)電離質(zhì)譜直接分析進(jìn)行生物基質(zhì)中藥物定量測(cè)定的初步實(shí)驗(yàn)和評(píng)價(jià) 藥物生物分析的兩個(gè)主要瓶頸問(wèn)題就是樣品凈化和色譜分離雖然過(guò)去的十年中已開(kāi)發(fā)了許多方法，使這些步驟變短或多元化，但其仍然是藥物研究中ADME（吸收分布代謝和排泄）性質(zhì)篩選的限速步驟本研究開(kāi)發(fā)并評(píng)價(jià)了一個(gè)進(jìn)行定量生物分析的新系統(tǒng)，該系統(tǒng)由自動(dòng)化實(shí)時(shí)直接分析（DART）離子源與三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀組成，具有直接分析生物基質(zhì)中樣品的功能，不需要進(jìn)行樣品凈化和色譜分離定制了 LEAP 科技公司的自動(dòng)進(jìn)樣器，以高精密度將樣品自動(dòng)導(dǎo)入DART束，顯著提高了方法的重現(xiàn)性在質(zhì)譜儀的大氣壓入口處加一個(gè)泵，以補(bǔ)償DART使用的高流速氦氣增加的真空負(fù)荷從而使檢測(cè)靈敏度提高了10到100倍直接評(píng)價(jià)了未經(jīng)處理血漿對(duì)各類(lèi)型化合物的基質(zhì)效應(yīng)，約為0.05到0.7本文還測(cè)定了動(dòng)態(tài)范圍在4個(gè)數(shù)量級(jí)的多種化合物的精密度和準(zhǔn)確性用該系統(tǒng)分析了體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和體外微粒體/S9穩(wěn)定性研究的生物樣品，所得結(jié)果與常規(guī)LC/MS/MS方法結(jié)果一致總之，研究結(jié)果顯示，該自動(dòng)化DART-三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜新系統(tǒng)在高通量生物分析中有極大的應(yīng)用潛力 對(duì)ADME（吸收分布代謝排泄）特性的篩查是藥物研發(fā)早期階段關(guān)注的焦點(diǎn)，大多數(shù)ADME篩查都要對(duì)生物基質(zhì)中的各種化合物進(jìn)行定量測(cè)定，稱為藥學(xué)生物分析由于生物基質(zhì)的復(fù)雜性，在質(zhì)譜分析之前，一般都要先進(jìn)行樣品凈化和色譜分離樣品凈化和色譜分離步驟常常成為生物分析的瓶頸總體而言，過(guò)去十年來(lái)生物分析界為此付出了巨大努力，也取得了許多進(jìn)展，如自動(dòng)處理96或384孔板上的液體樣品高速分離平行分離和在線提取，等等但這些方法中的大部分都要配備精密儀器，有更高的維護(hù)需求和成本現(xiàn)在仍然需要開(kāi)發(fā)生物分析新方法，能夠免除樣品凈化和色譜分離步驟，在復(fù)雜生物基質(zhì)上進(jìn)行分析 實(shí)時(shí)直接分析（DART）是一項(xiàng)新的電離技術(shù)，Cody Larame´e和Durst 2005年S次報(bào)導(dǎo)了固體液體氣體樣品的大氣壓電離自推出以來(lái)，已有在許多領(lǐng)域中應(yīng)用的報(bào)導(dǎo)，如反應(yīng)監(jiān)測(cè)TLC薄板直接分析仿冒抗瘧藥的檢測(cè)各種調(diào)料和香精化合物的研究，以及與質(zhì)譜結(jié)合測(cè)定元素組成等這些應(yīng)用大多涉及非生物基質(zhì)樣品的定性分析，但用DART進(jìn)行生物基質(zhì)中樣品的定量分析還未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)我們嘗試對(duì)生物基質(zhì)進(jìn)行直接分析，取得了初步成功，但由于取樣方法重現(xiàn)性不夠，定量結(jié)果還不甚理想我們認(rèn)為更可靠的樣品定位器可能會(huì)改善DART電離的定量功能，為此設(shè)計(jì)了玻璃取樣器，能夠更可靠地在DRAT離子源中對(duì)樣品定位采用了這種半定量取樣配置后，結(jié)果得到了大大改善定量重現(xiàn)性也有所提高 在本研究中，我們用DART電離質(zhì)譜對(duì)未經(jīng)凈化和色譜分離的生物樣品進(jìn)行直接測(cè)定，報(bào)導(dǎo)了方法的開(kāi)發(fā)評(píng)價(jià)和初步實(shí)施由于制藥生物分析通常需要高靈敏度的三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，所以我們開(kāi)發(fā)了一種新的氣體離子分離器接口(Vapur 接口)，將DART離子源與應(yīng)用生物系統(tǒng)/ MDS SCIEX API-4000三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)機(jī)如果沒(méi)有Vapur接口， API-4000將不能在制造商要求的質(zhì)譜操作壓力下保持穩(wěn)定的真空使用Vapur 接口使DART用氦氣作為離子化氣體時(shí)API-4000保持了真空也改善了系統(tǒng)的靈敏度，將分析物吹進(jìn)載氣帶入API進(jìn)樣口區(qū)，減少了被氣體吹入大氣中的可能性為了獲得生物分析所需要的高重現(xiàn)性和高通量，開(kāi)發(fā)了一種自動(dòng)樣品導(dǎo)入裝置我們對(duì)這一有效的自動(dòng)化DART/MS/MS系統(tǒng)的主要分析指標(biāo)進(jìn)行了評(píng)價(jià)，包括重現(xiàn)性基質(zhì)效應(yīng)精密度和準(zhǔn)確度我們還用該系統(tǒng)分析了藥代動(dòng)力學(xué)研究和體外微粒體/S9穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的生物樣品，將結(jié)果與常規(guī)LC/MS/MS系統(tǒng)所得結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比 DART?-MS 實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜系統(tǒng) DART? SVP 實(shí)時(shí)直接分析-質(zhì)譜系統(tǒng)