構(gòu)建受QL霉素誘導(dǎo)表達(dá)腦啡肽的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞株（IAST）. 方法：應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建含人前腦啡肽原基因（hPPE)的逆轉(zhuǎn)錄病毒四環(huán)素反應(yīng)質(zhì)粒（pRevTRE/hPPE）；以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒pRevTRE/hPPE和調(diào)節(jié)質(zhì)粒pRevTetOn分別轉(zhuǎn)染入包裝細(xì)胞PT67,分別收集病毒上清；將含有RevTetOn病毒上清感染IAST,挑選單克隆并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染報(bào)告質(zhì)粒pRevTRELuc,通過檢測螢光素酶活性,挑選出QL霉素誘導(dǎo)表達(dá)高背景表達(dá)低IAST/TetOn細(xì)胞株；再將RevTRE/hPPE病毒上清感染IAST/TetOn細(xì)胞株,得到穩(wěn)定表達(dá)腦啡肽的IAST/TetOn/hPPE細(xì)胞株,通過RTPCR免疫細(xì)胞化學(xué)及間接免疫熒光染色檢測該細(xì)胞株中QL霉素定量調(diào)控腦啡肽的表達(dá). 結(jié)果：重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pRevTRE/hPPE構(gòu)建成功；經(jīng)挑選得到了高表達(dá)低背景IAST/TetOn細(xì)胞株,其誘導(dǎo)倍數(shù)為20.6；在IAST/TetOn/hPPE細(xì)胞株中,hPPE基因表達(dá)受QL霉素調(diào)控,呈劑量依賴關(guān)系. 結(jié)論：成功構(gòu)建了受四環(huán)素及其衍生物QL霉素定量調(diào)控表達(dá)腦啡肽的永生化IAST,為可調(diào)控基因ZL慢性疼痛的研究奠定了基礎(chǔ). 超聲波細(xì)胞破碎機(jī)(智能型超聲波細(xì)胞粉碎儀)