美國戴安公司的LC-PACKING納升級HPLC是當(dāng)今世界Zxian 進的微量色譜之一.已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)的研究 領(lǐng)域.特別是其同MADLI TOF質(zhì)譜的完全兼容性,使得LC- PACKING更是廣大MADLI TOF質(zhì)譜用戶的**選擇. LC Packings/Dionex /Nano LC 系統(tǒng)的組成: 1.UltiMate™微孔泵和檢測單元 流速范圍從 50 nl/mi n 到 200 µl/min,壓力范圍0-6000psi 2.FAMOS™ 微量自動進樣器，樣品體積：50nL-5 µl， 5 µl-1mL，注入樣品量為 1 µl 輸出樣品量也是1µl (無樣品丟失)，取樣對象可以是96384多孔板，1.5ml 樣品瓶（密封與開口均可，（雙針技術(shù)）放置7塊384孔 板，可連續(xù)取樣2688次內(nèi)置雙泵可以完成梯度2D色譜 分析. 3.Swithchos™ 微孔柱切換單元，允許全柱切換和快速 加載樣品典型的裝置 4.Probot 微量樣品收集器,是目前**一種可以直接將 分離樣品點在MALDI TOF 質(zhì)譜專用板上的樣品收集儀 器.可以同ABI公司,布魯克公司等大型TOF質(zhì)譜直接連 接. 工作流程 用 FAMOS™向反向捕獲柱注入樣品, 使用Switchos™加 載泵以 30 µl/min的速度加載樣品. 樣品進到捕獲柱后， Switchos 閥切換關(guān)閉， UltiMat e™ 單元的Nano梯度以 200 nl/min的速度將捕獲柱中 的濃縮樣品反沖到NanoLC的分析柱中，分析柱直徑是7 5 µm ，填料是C18 PepMap™.，各種組分在這里分離然 后進入質(zhì)譜檢測NanoLC的技術(shù)特點 1.提供了比 毛細管液相更高的靈敏度2.使用 Capillar y/Nano 柱，可在日常工作中達到Z高的分離效率和極 好的峰容量 3.由于分析柱極小的直徑，成為分析極少的樣品量和稀 釋樣品的極好分析技術(shù)4.確保Z少的樣品丟失與質(zhì)譜聯(lián) 機有zhuo越的性能（特別是具有電噴霧離子源（ESI）的 在線質(zhì)譜，可以Z小的流速提供高濃度的樣品） Capillary/Nano LC 與 MS聯(lián)機: 1.可達到Z高的靈敏度，使得毛細管/毫微級液相** 的分離效果與質(zhì)譜Z高的分辨檢測結(jié)果有機地結(jié)合； 2所有的進樣分離檢測和數(shù)據(jù)處理全部自動化： 全自動樣品處理和導(dǎo)入多維分離MS/MS測序和采 集數(shù)據(jù)庫搜索；3翻譯后的修飾的鑒別；4可大大 增加蛋白鑒別的通量5可與ESIMALDI離子源質(zhì)譜 聯(lián)機 Peak parking 峰停駐技術(shù) 峰停駐技術(shù)用來增強 MS/MS 的靈敏度,用來分析不太復(fù) 雜的蛋白混合物(<50)；峰停駐技術(shù)可配合使用原位消 化技術(shù)，使靈敏度增加（樣品量減少，光譜信息增 加）； 可改進數(shù)據(jù)質(zhì)量和序列的覆蓋面 原位消化技術(shù) 與2D膠相比可增加蛋白識別數(shù)量；可識別高含量蛋白污 染下存在的低豐量蛋白，同時極大地節(jié)省實驗時間 峰停駐技術(shù)可做下列描述： •進入質(zhì)譜的峰淋洗速度被降低，使得有更多的時間識 別先進入的離子. •同時從 Nano LC分析柱來的淋洗液被停止. UltiMate™ 系統(tǒng) 提供Nano梯度淋洗(200 nl/min), 在 Nano LC (75 µm i.d.)柱中進行分離，被分離的組 分通過微量閥進入質(zhì)譜，一旦進入質(zhì)譜的峰達到一個確 定的峰高，MS將切換成MS/MS方式并得到MS/MS的光 譜 ，同時給出兩個信號 ：1微量閥被通知關(guān)閉，噴 射泵與MS在線連接，噴射泵以 25 nl/min的速度工作， 給質(zhì)譜留有更多的時間得到MS/MS光譜,. 2UltiMate ™ 系統(tǒng)被通知保持梯度 (35%B remains 35%B) ，流 速進一步降低以保持柱壓的穩(wěn)定，一旦質(zhì)譜中的峰從一 個確定的溢出或確定的高度開始下降，MS開始切換回質(zhì) 譜的模式，微量閥和UltiMate™接到通知恢復(fù)到峰停駐 發(fā)生開始時的條件 NanoLC 2維液相色譜技術(shù) 2維毛細管/NanoLC/MS可取代2D凝膠分析2D凝膠被廣 泛地應(yīng)用在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中，但它有下列的缺點： 1重現(xiàn)形不好 2覆蓋的蛋白數(shù)量少 3對低峰量蛋白的靈敏度不夠 4消耗時間和勞動力 5pH范圍有限 6不能直接與質(zhì)譜在線聯(lián)機 以下是典型的UltiMate Nano LC系統(tǒng)2D分離的流程： 樣品用FAMOS微量自動進樣器注入到BioX-SCX離子交換 捕獲柱上.通過自動進樣器上的梯度泵緩慢梯度改變淋 洗鹽溶液濃度(at 30 ul/min),從 BioX-SCX柱上將肽的 不同片段分別洗脫,并通過RP捕獲柱分別收集，當(dāng)捕集 到肽后，鹽被沖洗出系統(tǒng)并確認鹽不會進入MS,此時Nan oLC的主梯度泵(200 nl/min) 開始從捕獲柱反沖肽 片段進入NanoLC毛細管分析柱，肽在這里被分離,Z后 進入MS做定性