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糖基化是Z重要的一種翻譯后修飾,指的是將糖基部分連接到蛋白質(zhì)上。糖基化模式的 改變對(duì)免疫原性和整體生物活性有很大影響。因此,糖基化表征對(duì)基于生物醫(yī)藥的應(yīng)用 至關(guān)重要。雖然現(xiàn)在已有多種分析技術(shù)被應(yīng)用于分析 N-糖基化,但低水平糖基化的極ng確 測(cè)定仍面臨著極大的挑戰(zhàn)。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)展示了利用毛細(xì)管電泳和質(zhì)譜 (CEMS) 對(duì)重組單克隆抗體 (mAb) 糖基化進(jìn)行分 析。此方法包括利用 N-糖苷酶 F (PNGase F) 酶解 mAb 得到多糖,對(duì)多糖進(jìn)行熒光標(biāo)記 (8-氨基吡-1,3,6-三磺酸三鈉鹽,ATPS),并利用 Agilent 7100 CE 串聯(lián) Agilent 6520 精 確質(zhì)量 Q-TOF LC/MS 進(jìn)行分析。從使用的重組 mAb 中,我們共鑒定出 7 種多糖,從 每種多糖成分的相對(duì)百分比可知,主要及次要糖基化修飾均有存在。本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)證明了 高分離速度的 CE 與高靈敏度檢測(cè)限的 MS 相結(jié)合,使 CE-MS 成為一種替代 LC/MS 方 法對(duì) mAb 或其它糖蛋白進(jìn)行糖基化表征的有效且Z有前景的方法。
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