【概述】

小型ZL藥物(500 ~ 1000 Da)是一種有助于調(diào)節(jié)生物過程的化合物。大多數(shù)ZL藥物都屬于這一類。表征小型ZL藥物與其受體的相互作用是具有挑戰(zhàn)性的,因?yàn)闃?biāo)記物可以干擾相互作用，而無標(biāo)記技術(shù)受到小分子量的挑戰(zhàn)。盡管如此，無標(biāo)記的表征是藥物篩選和確定藥物選擇性的關(guān)鍵。雖然具有潛在的挑戰(zhàn)性,但Surface Plasmon Resonance (SPR)可用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)藥物-受體的相互作用。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

（1）Affinité的肽 SPR 芯片

（2）Affinité的 NTA 肽SPR芯片

（3）His-tag CD36的固定

（4）PBS 1 × pH 7.4 緩沖液

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

（1）配置PBS緩沖液

（2）準(zhǔn)備His-tag CD36固定的溶液

（3）在SPR玻璃芯片上做NTA肽SPR芯片修飾

（4）將實(shí)驗(yàn)溶液緩慢恒定的通入到P4SPR分析儀中

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

Affinité的技術(shù)已經(jīng)過驗(yàn)證，可用于篩選小型ZL藥物。在該篩選方案中,使用 Affinité的金屬-NTA 表面化學(xué)，將表達(dá)的His標(biāo)記的CD36細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域表達(dá)并固定在PR芯片上。在阻斷表面后，滴定小分子以在臨床前試驗(yàn)環(huán)境中確定藥物-受體的KD。

Cluster of Differentiation 36 / ligands

CD36的不同小分子配體的劑量-反應(yīng)曲線。將數(shù)據(jù)點(diǎn)擬合到Langmuir等溫線，以確定受體的小分子配體的KD。

【儀器/耗材清單】

Affinité的P4SPR具有獨(dú)特的方法來鑒別小型ZL藥物的結(jié)合配體，并確定結(jié)合親和力和結(jié)合動(dòng)力學(xué)。蛋白質(zhì)固定的簡(jiǎn)單性和儀器的易用性使這種方法在培訓(xùn)的幾分鐘內(nèi)對(duì)任何人(本科生到宇航員,高級(jí)化學(xué)家到周末科學(xué)家)都會(huì)有一個(gè)直觀的了解。