【概述】

DNA、RNA和PNA等核酸可以采用與蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)結(jié)合的活性結(jié)構(gòu)。與蛋白質(zhì)-抗體結(jié)合類似, 蛋白質(zhì)-核酸 (NA) 結(jié)合表現(xiàn)出各種親和力，這可以通過改變NA的序列來調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)-NA對(duì)的親和力。這種設(shè)計(jì)NA序列以與靶蛋白達(dá)到特定親和力范圍的篩選策略被用于新興的應(yīng)用，例如個(gè)性化YL。SPR(Surface Plasmon Resonance)是一種功能強(qiáng)大的無標(biāo)記技術(shù)，可以提供蛋白質(zhì)-NA結(jié)合動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，以便支持學(xué)術(shù)和臨床研究,從而理解和調(diào)節(jié)核心細(xì)胞過程，如轉(zhuǎn)錄調(diào)控。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

（1）Affinite的肽SPR芯片

（2）硫醇化寡核苷酸

（3）PBS 1 × pH 7.4 緩沖液

（4）便攜多通道P4SPR表面等離子體共振分析儀

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

（1）配置PBS緩沖液

（2）配置硫醇化寡核苷酸溶液

（3）在SPR玻璃芯片上做蛋白質(zhì)修飾

（4）將實(shí)驗(yàn)溶液緩慢恒定的通入到P4SPR分析儀中

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

Affinité的技術(shù)已用于測(cè)定蛋白質(zhì)-DNA相互作用。  在該測(cè)定中,雙鏈DNA片段在SPR芯片上雜交，以無標(biāo)記方法監(jiān)測(cè)與可溶性蛋白質(zhì)的相互作用。該方法適用于任何硫醇化核酸鏈的應(yīng)用。

Lacl repressor protein / dsDNA

使用dsDNA對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分步檢測(cè)

【儀器/耗材清單】

Affinité的P4SPR具有獨(dú)特的方法來鑒別小型ZL藥物的結(jié)合配體，并確定結(jié)合親和力和結(jié)合動(dòng)力學(xué)。蛋白質(zhì)固定的簡(jiǎn)單性和儀器的易用性使這種方法在培訓(xùn)的幾分鐘內(nèi)對(duì)任何人(本科生到宇航員,高級(jí)化學(xué)家到周末科學(xué)家)都會(huì)有一個(gè)直觀的了解。