近日，雀巢公司在全qiu范圍內(nèi)召回多批次嬰兒配方奶粉的新聞，將蠟樣芽孢桿菌這一食源性致病微生物推向了風(fēng)口浪尖。事件起因是供應(yīng)商提供的花生四烯酸油原料存在質(zhì)量問題，相關(guān)產(chǎn)品可能存在蠟樣芽孢桿菌及其毒素污染風(fēng)險。

     這一事件將嬰幼兒配方乳粉生產(chǎn)中的微生物風(fēng)險防控推至臺前，也凸顯了從原料到成品全鏈條精準(zhǔn)檢測的極端重要性。

01參與團標(biāo)制定——納鷗科技提供專業(yè)方案

  納鷗科技基于在復(fù)雜樣品前處理與分離分析領(lǐng)域的技術(shù)專長，為團體標(biāo)準(zhǔn)《T/WSJD 57-2024 食品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的測定》 的建立與驗證提供了關(guān)鍵的產(chǎn)品技術(shù)支持與實驗驗證。

  我們深刻理解標(biāo)準(zhǔn)對檢測方法的具體要求，并以此為導(dǎo)向進行產(chǎn)品研發(fā)。緊密契合標(biāo)準(zhǔn)方法，確保能夠滿足蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素檢測中對凈化效果的關(guān)鍵要求。

02獨有技術(shù)產(chǎn)品——源于標(biāo)準(zhǔn)的針對性解決方案

1、新型反相固相萃取柱（HLB-P）

專為高效保留目標(biāo)毒素并去除常見極性干擾物而設(shè)計，其性能在標(biāo)準(zhǔn)制定過程中得到充分驗證。

2、脂質(zhì)增強去除柱（HMR）

采用無機骨架通過修飾對磷脂具有特異性吸附的官能團，能夠高效、選擇性地去除磷脂等雜質(zhì)，顯著降低基質(zhì)效應(yīng)。

3、Leosil 蠟樣芽孢桿菌專用UPLC C18柱

大孔徑C18鍵合相設(shè)計，經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)方法驗證，確保實現(xiàn)高靈敏度與準(zhǔn)確定量。

食品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的測定

方法優(yōu)勢：

試樣中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素經(jīng)乙腈提取，采用新型反相親水親脂固相萃取小柱(HLB-P)、脂質(zhì)增強去除柱(HMR)凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定， 內(nèi)標(biāo)法定量；

該方法操作簡便、 快速，靈敏度和準(zhǔn)確度高，實現(xiàn)了蠟樣芽孢桿菌引發(fā)食物中毒的快速處置。

1、適用范圍

本文件適用于面米制品、乳及乳制品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的測定，也適用于食物中毒嘔吐物中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素的測定。

2、標(biāo)準(zhǔn)品

蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液（C57H96N6O18，CAS 號：157232-64-9，濃度為 25μg/500μL 或經(jīng)國家認證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。

13C6-蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液（C5113C6H96N6O18，CAS號1487375-69-8），濃度為 20 μg/mL或經(jīng)國家認證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。

3、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.1、蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 mg/L）：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.200 mL 置于10.0 mL 棕色容量瓶中，用乙腈溶液定容至 10.0 mL，濃度為 1.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于-18 ℃冷凍保存，有效期3個月。

3.2、蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 mg/L）：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.500mL，置于 10.0 mL 棕色容量瓶中，用乙腈溶液定容至 10.0 mL，濃度為 1.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于-18 ℃冷 凍保存，有效期3個月。

3.3、蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1 mg/L）：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液1.0 mL（1.0 mg/L）置于 10.0 mL 棕色容量瓶中，并用乙腈溶液稀釋成 0. 1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，-18 ℃冷凍保存，有效期1個月。

3.4、蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1 mg/L）：準(zhǔn)確吸取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液1.0 mL，置于 10.0 mL 棕色容量瓶中，并用乙腈溶液稀釋成 0. 1 mg/L 的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，于-18 ℃冷凍保存， 有效期1個月。

3.5、標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確吸取 0.1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作液、10 μL 、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1000 μL 分別置于 10.0 mL 容量瓶中，加入 200 μL 0. 1 mg/L 的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，用初始流動相制成濃度分別為 0. 1 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，含內(nèi)標(biāo)濃度為 2.0μg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4、試樣的制備

（1）樣本量大于250g的面米制品，采用多點取樣法，取250g樣品，按照 1:3 比例加水均質(zhì),制成食糜狀試樣，于-18 ℃以下冷凍保存;

（2)樣本量小于等于 250g的面米制品，則取全部樣品，按照 1:3 比例加水均質(zhì)，制成食糜狀試樣，于-18 ℃以下冷凍保存，取樣前恢復(fù)至室溫。

（3）乳及乳制品混合均勻，于-18 ℃以下冷凍保存，取樣前恢復(fù)至室溫。

（4）食物中毒嘔吐物樣品全部均質(zhì)，于-18 ℃以下冷凍保存，取樣前恢復(fù)至室溫。

5、食品試樣提取

稱取1 g（精確至0.01g）均質(zhì)后的食品樣品置于15 mL離心管，加入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1 mg/L）20μL，靜置30 min后，準(zhǔn)確加入5.0 mL乙腈，渦旋混均30s，超聲30 min。4 ℃下12000 r/min離心10 min 。轉(zhuǎn)移全部上清液至15 mL離心管中，加入5.0 mL水，渦旋混合30s ，待HLB-P（AN60F098）柱凈化。

6、樣品凈化

(1) 食品試樣凈化（面米制品、乳及乳制品）

HLB-P柱經(jīng)3.0 mL甲醇，3.0 mL純水依次活化，取食品樣品提取液上樣（如果上柱溶液粘度較大，過濾較為緩慢，可以1.2 mL/min 速度抽濾過柱），待上樣液完全過柱后，以3.0 mL純水淋洗小柱，5.0 mL乙腈：甲醇（9:1）洗脫，收集全部洗脫液，氮氣濃縮至近干，殘渣用1.0 mL初始流動相復(fù)溶，過微孔濾膜供上機測定。

(2) 食物中毒嘔吐物樣品凈化

吸取食物中毒嘔吐物樣品提取液5.0 mL，直接上HMR（AN60F245）脂質(zhì)增強去除小柱凈化，棄去前0.5 mL過柱液后收集2.0 mL過柱溶液，過膜供上機測定。

7、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀器參考條件

a) 色譜柱：Leosil Gold Protein C18 300?, for Cereulide, 3μm, 100 x 2.1 mm（AN80A364）。

b)流動相：流動相A相為0. 1%甲酸乙腈溶液，B相為0. 1%甲酸-2.0 mmol/L乙酸銨水溶液。

c) 流速：0.35 mL/min

d)柱溫：40 ℃

e)進樣量：5 μL

梯度洗脫程序見表

質(zhì)譜條件：

a) 離子化模式：電噴霧電正離子模式（ESI+ )；

b) 質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

c) 毛細管電壓： 3.5 kV；

d) 離子源溫度：150 ℃；

e) 脫溶劑溫度：500 ℃；

f) 脫溶劑氣流量：1000 L/h；

g) 碰撞室壓力：0.36 Pa；

h) 監(jiān)測參數(shù)見表2。

蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素監(jiān)測參數(shù)

7、回收率

8、譜圖

原料樣品中蠟樣芽孢桿菌嘔吐毒素總離子流圖( 0.4 μg /kg）

雀巢事件再次警示，食品安全無小事。選擇為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)專門優(yōu)化、性能經(jīng)過針對性驗證的檢測耗材，是構(gòu)建可靠質(zhì)量防線的重要一步。

納鷗科技致力于為食品安全檢測提供契合標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定可靠的前處理產(chǎn)品和色譜柱支持。

關(guān)鍵耗材配套方案

標(biāo)簽：蠟樣芽孢桿菌實驗室液質(zhì)