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限制微RNA轉(zhuǎn)錄因子活性的小分子篩選方法
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本文由 上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商 整理匯編
2018-11-15 10:03 1101閱讀次數(shù)
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據(jù)《化學(xué)與工程新聞》(C&EN)周刊網(wǎng)站2014年2月17日?qǐng)?bào)道,美國斯克利普斯研究所(TheScrippsResearchInstitute)和布法羅大學(xué)(TheUniversityatBuffalo)的研究人員合作,研究發(fā)現(xiàn)小分子可以YZ微小核糖核酸(微RNA)轉(zhuǎn)錄因子的活性(SmallMoleculesBlockActivityofMicroRNATranscriptionFactors),這項(xiàng)研究結(jié)果對(duì)于藥物發(fā)現(xiàn)意義重大,因?yàn)樽璧K或限制微RNA就意味著使癌細(xì)胞中的致死基因保持沉默而不會(huì)興風(fēng)作浪。要在成千上萬的分子中找到可以限制微RNA活性的小分子可以說如同大海撈針,技術(shù)分析小分子(形狀)和折疊RNA序列(黑色線條)之間的相互作用(見下圖中的上方圖示),來識(shí)別可以限制與癌癥相關(guān)的微RNA-96(如左下角圖示)活性的苯并咪唑(如右下角圖示)之類的藥劑。NEEDLEINAHAYSTACKTechniqueanalyzesinteractions(top)betweensmallmolecules(shapes)andfoldedRNAsequences(blacklines)toidentifyagentssuchasabenzimidazole(bottomright)thatblockscancer-associatedmiRNA-96(bottomleft).研究人員開發(fā)了一種可以確定具有限制微小核糖核酸(miRNAs)功能的小分子的計(jì)算方法,該方法對(duì)于癌癥和其他疾病的目標(biāo)細(xì)胞而言是非常重要的。研究結(jié)果于2014年2月9日在《天然化學(xué)生物學(xué)》(NatureChemicalBiology)雜志網(wǎng)站發(fā)表SaiPradeepVelagapudi,StevenMGallo,MatthewDDisney.Sequence-baseddesignofbioactivesmallmoleculesthattargetprecursormicroRNAs.NatureChemicalBiology;Publishedonline09February2014;DOI:10.1038/nchembio.1452。這類可以限制微RNA活性的藥劑之一,具有一種選擇性的活性,表明基于此方法篩選的藥物可能比傳統(tǒng)癌癥化療藥物的副作用更少。miRNAs是三維折疊的蛋白質(zhì)未編碼的RNA類小分子,而且可調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。在各種疾病如癌癥中則出現(xiàn)過表達(dá),在免疫反應(yīng)中起到調(diào)節(jié)關(guān)鍵步驟的作用。諾貝爾獎(jiǎng)得主、分子生物學(xué)家和生物化學(xué)家、美國麻省理工學(xué)院的菲利普A夏普(PhillipA.Sharp)教授對(duì)此研究成果評(píng)議認(rèn)為,除了抗生素將細(xì)菌核糖體中的RNA作為目標(biāo)之外,幾乎沒有開發(fā)出具有調(diào)節(jié)RNA功能作用的小分子,特別是在此之前miRNAs還沒有可行的藥物靶點(diǎn)。但是,這種新技術(shù)的能力就是來確定可以限制miRNA活性,“提供一組新藥物”的小分子,來彌補(bǔ)以往之空缺。美國佛羅里達(dá)斯克里普斯研究所的馬修D(zhuǎn)迪斯尼(MatthewD.Disney)和開發(fā)這種新方法的同事們,用其已經(jīng)確定了20多種可以與miRNAs相應(yīng)位點(diǎn)相互作用的小分子。其**的候選藥物就是一種苯并咪唑(benzimidazole)化合物,會(huì)使miRNA-96的功能失去活力,而miRNA-96就是一種與癌癥有關(guān)的miRNA。其活性類似于以前開發(fā)的miRNA-96-inhibitingantagomirs,這些物質(zhì)都是一些通過特殊序列結(jié)合的,可以限制miRNA活性的寡核苷酸類物質(zhì)(oligo-nucleotides)。但antagomirs不容易進(jìn)入細(xì)胞,在體內(nèi)迅速降解,而小分子如苯并咪唑類(benzimidazoles)類物質(zhì)可以透過細(xì)胞,且往往持續(xù)時(shí)間更長。miRNAantagomir是經(jīng)過特殊化學(xué)修飾的miRNA拮抗劑,通過與體內(nèi)的成熟miRNA強(qiáng)競爭性結(jié)合,阻止miRNA與其靶基因mRNA的互補(bǔ)配對(duì),YZmiRNA發(fā)揮作用。與普通YZ劑相比,miRNAantagomir在動(dòng)物體內(nèi)外具有更高的穩(wěn)定性和YZ效果,且能克服體內(nèi)細(xì)胞膜、組織等障礙富集于靶細(xì)胞。antagomir在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中不需要轉(zhuǎn)染試劑,從而避免了轉(zhuǎn)染試劑包裝過程的復(fù)雜步驟及其對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可用全身或局部注射、吸入、喂藥等方法進(jìn)行給藥,作用效果持續(xù)時(shí)間可長達(dá)數(shù)周。與antagomirs不同,苯并咪唑與miRNA-96前體中的折疊結(jié)構(gòu)基元結(jié)合,并不是與其本身的序列結(jié)合。小分子限制或阻礙miRNA-96的正常功能,即在癌細(xì)胞內(nèi)YZ誘導(dǎo)凋亡FOXO1蛋白,該蛋白可能是一種細(xì)胞增殖的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,同時(shí)亦是一種細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子,苯并咪唑是通過細(xì)胞凋亡而引起腫瘤細(xì)胞死亡。但是它并不會(huì)對(duì)沒有FOXO1蛋白的細(xì)胞產(chǎn)生影響,這意味著類似苯并咪唑的藥物可能藥物副作用Z小。為了找到抗miRNA的小分子,迪士尼及其合作者采用一個(gè)名為Inforna的計(jì)算技術(shù)從序列來預(yù)測(cè)miRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu),然后使用一個(gè)小分子/RNA相互作用數(shù)據(jù)庫,識(shí)別可透過細(xì)胞的化合物,這種方法雖然有確定小分子藥物的能力,但是迪斯尼認(rèn)為從miRNA序列來開發(fā)藥物尚有“許多疑慮有待解決?!泵绹笨_萊納大學(xué)(UniversityofNorthCarolina)的RNA折疊生物信息學(xué)家(RNA-foldingbioinformatician)AlainLaederach對(duì)此研究結(jié)果評(píng)議說,“這是一項(xiàng)在選擇細(xì)胞調(diào)節(jié)器的核心類作為目標(biāo)進(jìn)行研究的突破性成果,這種類型的化學(xué)打開一個(gè)潛在ZL目標(biāo)的全新世界。”
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限制微RNA轉(zhuǎn)錄因子活性的小分子篩選方法
- 據(jù)《化學(xué)與工程新聞》(C&EN)周刊網(wǎng)站2014年2月17日?qǐng)?bào)道,美國斯克利普斯研究所(TheScrippsResearchInstitute)和布法羅大學(xué)(TheUniversityatBuffalo)的研究人員合作,研究發(fā)現(xiàn)小分子可以YZ微小核糖核酸(微RNA)轉(zhuǎn)錄因子的活性(SmallMoleculesBlockActivityofMicroRNATranscriptionFactors),這項(xiàng)研究結(jié)果對(duì)于藥物發(fā)現(xiàn)意義重大,因?yàn)樽璧K或限制微RNA就意味著使癌細(xì)胞中的致死基因保持沉默而不會(huì)興風(fēng)作浪。要在成千上萬的分子中找到可以限制微RNA活性的小分子可以說如同大海撈針,技術(shù)分析小分子(形狀)和折疊RNA序列(黑色線條)之間的相互作用(見下圖中的上方圖示),來識(shí)別可以限制與癌癥相關(guān)的微RNA-96(如左下角圖示)活性的苯并咪唑(如右下角圖示)之類的藥劑。NEEDLEINAHAYSTACKTechniqueanalyzesinteractions(top)betweensmallmolecules(shapes)andfoldedRNAsequences(blacklines)toidentifyagentssuchasabenzimidazole(bottomright)thatblockscancer-associatedmiRNA-96(bottomleft).研究人員開發(fā)了一種可以確定具有限制微小核糖核酸(miRNAs)功能的小分子的計(jì)算方法,該方法對(duì)于癌癥和其他疾病的目標(biāo)細(xì)胞而言是非常重要的。研究結(jié)果于2014年2月9日在《天然化學(xué)生物學(xué)》(NatureChemicalBiology)雜志網(wǎng)站發(fā)表SaiPradeepVelagapudi,StevenMGallo,MatthewDDisney.Sequence-baseddesignofbioactivesmallmoleculesthattargetprecursormicroRNAs.NatureChemicalBiology;Publishedonline09February2014;DOI:10.1038/nchembio.1452。這類可以限制微RNA活性的藥劑之一,具有一種選擇性的活性,表明基于此方法篩選的藥物可能比傳統(tǒng)癌癥化療藥物的副作用更少。miRNAs是三維折疊的蛋白質(zhì)未編碼的RNA類小分子,而且可調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。在各種疾病如癌癥中則出現(xiàn)過表達(dá),在免疫反應(yīng)中起到調(diào)節(jié)關(guān)鍵步驟的作用。諾貝爾獎(jiǎng)得主、分子生物學(xué)家和生物化學(xué)家、美國麻省理工學(xué)院的菲利普A夏普(PhillipA.Sharp)教授對(duì)此研究成果評(píng)議認(rèn)為,除了抗生素將細(xì)菌核糖體中的RNA作為目標(biāo)之外,幾乎沒有開發(fā)出具有調(diào)節(jié)RNA功能作用的小分子,特別是在此之前miRNAs還沒有可行的藥物靶點(diǎn)。但是,這種新技術(shù)的能力就是來確定可以限制miRNA活性,“提供一組新藥物”的小分子,來彌補(bǔ)以往之空缺。美國佛羅里達(dá)斯克里普斯研究所的馬修D(zhuǎn)迪斯尼(MatthewD.Disney)和開發(fā)這種新方法的同事們,用其已經(jīng)確定了20多種可以與miRNAs相應(yīng)位點(diǎn)相互作用的小分子。其**的候選藥物就是一種苯并咪唑(benzimidazole)化合物,會(huì)使miRNA-96的功能失去活力,而miRNA-96就是一種與癌癥有關(guān)的miRNA。其活性類似于以前開發(fā)的miRNA-96-inhibitingantagomirs,這些物質(zhì)都是一些通過特殊序列結(jié)合的,可以限制miRNA活性的寡核苷酸類物質(zhì)(oligo-nucleotides)。但antagomirs不容易進(jìn)入細(xì)胞,在體內(nèi)迅速降解,而小分子如苯并咪唑類(benzimidazoles)類物質(zhì)可以透過細(xì)胞,且往往持續(xù)時(shí)間更長。miRNAantagomir是經(jīng)過特殊化學(xué)修飾的miRNA拮抗劑,通過與體內(nèi)的成熟miRNA強(qiáng)競爭性結(jié)合,阻止miRNA與其靶基因mRNA的互補(bǔ)配對(duì),YZmiRNA發(fā)揮作用。與普通YZ劑相比,miRNAantagomir在動(dòng)物體內(nèi)外具有更高的穩(wěn)定性和YZ效果,且能克服體內(nèi)細(xì)胞膜、組織等障礙富集于靶細(xì)胞。antagomir在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中不需要轉(zhuǎn)染試劑,從而避免了轉(zhuǎn)染試劑包裝過程的復(fù)雜步驟及其對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可用全身或局部注射、吸入、喂藥等方法進(jìn)行給藥,作用效果持續(xù)時(shí)間可長達(dá)數(shù)周。與antagomirs不同,苯并咪唑與miRNA-96前體中的折疊結(jié)構(gòu)基元結(jié)合,并不是與其本身的序列結(jié)合。小分子限制或阻礙miRNA-96的正常功能,即在癌細(xì)胞內(nèi)YZ誘導(dǎo)凋亡FOXO1蛋白,該蛋白可能是一種細(xì)胞增殖的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,同時(shí)亦是一種細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子,苯并咪唑是通過細(xì)胞凋亡而引起腫瘤細(xì)胞死亡。但是它并不會(huì)對(duì)沒有FOXO1蛋白的細(xì)胞產(chǎn)生影響,這意味著類似苯并咪唑的藥物可能藥物副作用Z小。為了找到抗miRNA的小分子,迪士尼及其合作者采用一個(gè)名為Inforna的計(jì)算技術(shù)從序列來預(yù)測(cè)miRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu),然后使用一個(gè)小分子/RNA相互作用數(shù)據(jù)庫,識(shí)別可透過細(xì)胞的化合物,這種方法雖然有確定小分子藥物的能力,但是迪斯尼認(rèn)為從miRNA序列來開發(fā)藥物尚有“許多疑慮有待解決。”美國北卡羅萊納大學(xué)(UniversityofNorthCarolina)的RNA折疊生物信息學(xué)家(RNA-foldingbioinformatician)AlainLaederach對(duì)此研究結(jié)果評(píng)議說,“這是一項(xiàng)在選擇細(xì)胞調(diào)節(jié)器的核心類作為目標(biāo)進(jìn)行研究的突破性成果,這種類型的化學(xué)打開一個(gè)潛在ZL目標(biāo)的全新世界?!?a href="/doc/detail_eafb305aa7617cda.html" target="_blank">[詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
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人PPARα轉(zhuǎn)錄因子 elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T7ng/L-250ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中PPARα轉(zhuǎn)錄因子含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人PPARα轉(zhuǎn)錄因子水平。用純化的人PPARα轉(zhuǎn)錄因子抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入PPARα轉(zhuǎn)錄因子,再與HRP標(biāo)記的PPARα轉(zhuǎn)錄因子抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PPARα轉(zhuǎn)錄因子呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人PPARα轉(zhuǎn)錄因子濃度。[詳細(xì)]
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2018-12-30 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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生物小分子分離體積排阻色譜
- 生物小分子分離體積排阻色譜[詳細(xì)]
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2024-09-15 22:18
課件
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人核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)試劑盒產(chǎn)品供應(yīng)
- 人核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)試劑盒產(chǎn)品供應(yīng)[詳細(xì)]
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2015-04-23 00:00
報(bào)價(jià)單
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大鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65(NF-p65)ELISA試劑盒
- 大鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65(NF-kBp65)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠NF-kBp65單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的NF-kBp65與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠NF-kBp65,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,NF-kBp65濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中NF-kBp65濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊,上下混勻。4.即用,或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標(biāo)本NF-kBp65的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度)5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標(biāo)本稀釋液+50ul樣本+20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH)。檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)NF-kBp65含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的NF-kBp65檢測(cè)濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠NF-kBp65。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人核轉(zhuǎn)錄因子(NF-)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人核轉(zhuǎn)錄因子(NF-kB)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人NF-kB單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的NF-kB與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人NF-kB,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,NF-kB濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中NF-kB濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):10ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊,上下混勻。4.即用,或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標(biāo)本NF-kB的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度)5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標(biāo)本稀釋液+50ul樣本+20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH)。檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)NF-kB含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的NF-kB檢測(cè)濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人NF-kB。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人轉(zhuǎn)錄因子TBX3(TBX3)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人轉(zhuǎn)錄因子TBX3(TBX3)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人TBX3單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的TBX3與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人TBX3,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,TBX3濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中TBX3濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):40ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)TBX3含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的TBX3檢測(cè)濃度小于30pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人TBX3。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人轉(zhuǎn)錄因子E2F1(E2F1)ELISA試劑盒說明書
- 人轉(zhuǎn)錄因子E2F1(E2F1)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人E2F1單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的E2F1與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人E2F1,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測(cè)OD值,E2F1濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中E2F1濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):2ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液200ul。在**管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊,上下混勻。4.即用,或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標(biāo)本E2F1的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度)5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標(biāo)本稀釋液+50ul樣本+20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH)。檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)E2F1含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的E2F1檢測(cè)濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人E2F1。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人轉(zhuǎn)錄因子AP-1(AP-1)ELISA試劑盒說明書
- 人轉(zhuǎn)錄因子AP-1(AP-1)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人AP-1單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的AP-1與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人AP-1,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測(cè)OD值,AP-1濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中AP-1濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):40ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)AP-1含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的AP-1檢測(cè)濃度小于30pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人AP-1。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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