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豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒使用說明書

本文由 上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商 整理匯編

2018-11-16 10:02 777閱讀次數(shù)

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Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4    豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒本試劑僅供研究使用試驗原理:TNF-Α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知TNF-Α濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將TNF-Α和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-Α的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制:試劑盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)塑料膜板蓋1塊半塊標(biāo)準(zhǔn)品:600pg/ml1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)生物素標(biāo)記的抗TNF-Α抗體1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)親和鏈酶素-HRP1瓶(12ml)1瓶(5ml)洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)自備材料:1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。樣品收集、處理及保存方法:1、血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。5、保存……如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒操作注意事項:●試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存?!駥嶒炛胁挥玫陌鍡l應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)?!癫挥玫钠渌噭?yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。●使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器?!袷褂酶蓛舻乃芰先萜髋渲孟礈煲?。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。●底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值?!窦尤朐噭┑捻樞驊?yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣?!癜凑照f明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。安全性:1.避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。試劑的準(zhǔn)備:1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:600pg/ml(6號標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul300pg/ml(5號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150pg/ml(4號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液75pg/ml(3號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液37.5pg/ml(2號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液18.7pg/ml(1號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0pg/ml(空白對照)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒性能:1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。豚鼠腫瘤壞死因子α試劑盒操作步驟:1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷與分析:1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的TNF-Α標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的TNF-Α含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。3、檢測值范圍:0-600pg/ml4、敏感度:1.0pg/ml

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