本文由 東莞市譜標(biāo)實(shí)驗(yàn)器材科技有限公司 整理匯編

2013-12-21 00:00 468閱讀次數(shù)

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  氣相色譜儀由于其能夠?qū)ξ镔|(zhì)進(jìn)行物理分析的特殊性，已經(jīng)廣泛應(yīng)用到食品、環(huán)境、石化、YL等多個領(lǐng)域，而氣相色譜儀的檢定工作也隨之重要起來。 基于此， 本文就氣相色譜儀檢定過程中常見的問題以及解決方案進(jìn)行簡要闡述，其中著重講述檢測器點(diǎn)火失敗、色譜峰出現(xiàn)反常、信號無響應(yīng)等問題的解決方案。 [詳細(xì)]

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• ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題的解決

  ELISA操作常見問題1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。5．溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗Z為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因?yàn)?，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。7．邊緣效應(yīng)使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較ZX孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與ZX孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測定的重復(fù)性。8．顯色顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時間過短，結(jié)果偏低；顯色時間過長，空白或者非特異性顯色增加。9．比色比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題。其次，單波長或雙波長比色選擇的問題。所謂的單波長比色即是通常的以對顯色具有Zda吸收的波長如450nm或492nm進(jìn)行比色測定；而雙波長雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長如450nm和非敏感波長如630nm下各測定一次，敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長下測定即改變波長至一定值，使得樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零，此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。Z后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn)。由于ELISA測定中單個空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值，故而在ELISA測定比色時，**是使用雙波長比色。綜上所述，盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會影響測定結(jié)果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法問題可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低1、試劑盒在運(yùn)輸途中時間太長，溫度太高盡量縮短運(yùn)輸時間，夏季應(yīng)放冰塊降溫2、試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意4、保溫時間不足校正定時鐘準(zhǔn)確定時5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加按說明書要求保留洗滌時間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，**一次性使用7、蒸餾水水質(zhì)有問題使用新鮮合格的蒸餾水8、底物作用時間不足準(zhǔn)確定時背景深，全部呈有色,1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染2、樣品污染樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底吸嘴盡可能一次性使用5、蒸餾水被污染使用新鮮蒸餾水6、酶等試劑混用不同批號試劑勿混用7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過多，加樣時間太長，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時間延長合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時加樣重復(fù)性不佳1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時間有長有短重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與**次接近2、保溫時間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性3、加樣量不一致樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴出現(xiàn)白板，陽性對照不顯色顯色液變質(zhì)更換新的顯色液洗滌液配制有誤請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

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• 可編程恒溫恒濕箱常見問題及如何解決

  可編程恒溫恒濕試驗(yàn)箱平時使用是偶爾會遇到一些問題，常見故障主要有哪些呢？這些故障又如何解決呢？詳細(xì)見資料。[詳細(xì)]

  2018-09-10 11:11

  產(chǎn)品樣冊

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• 德國赫斯曼交換機(jī)的常見問題及解決方式

  德國Hirschmann（赫斯曼）作為自動化技術(shù)的專家，赫思曼的許多設(shè)計(jì)都是具有革新性的，這些方案能夠充分滿足客戶在性能、效率和投資可靠性方面的要求。作為IAONA（工業(yè)自動化開放網(wǎng)絡(luò)聯(lián)盟）組織的創(chuàng)始人之一，赫思曼在以太網(wǎng)技術(shù)的確立和在工業(yè)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)化上扮演了主要的角色。EPSG（以太網(wǎng)Powerlink標(biāo)準(zhǔn)化組織）倡導(dǎo)的Powerlink已提供了一個開放的平臺，可以通過以太網(wǎng)實(shí)現(xiàn)硬實(shí)時的應(yīng)用，例如機(jī)器人控制等。赫思曼也是EPSG的創(chuàng)始人之一?！　榱颂岣呔钟蚓W(wǎng)的運(yùn)行維護(hù)效率，我們需要在平時積累各種交換機(jī)故障排除經(jīng)驗(yàn)，以便在遇到故障時，能夠快速地將交換機(jī)的故障解決掉?！　?.德國Hirschmann（赫斯曼）交換機(jī)解決數(shù)據(jù)嚴(yán)重掉包故障　　網(wǎng)絡(luò)管理員先嘗試著將集線器的進(jìn)線直接與故障工作站連接，之后再對服務(wù)器執(zhí)行ping命令測試，測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒有出現(xiàn)數(shù)據(jù)包延時現(xiàn)象，也沒有發(fā)生數(shù)據(jù)掉包現(xiàn)象，測試結(jié)果很正常。接著網(wǎng)絡(luò)管理員又在安裝了10M網(wǎng)卡的舊計(jì)算機(jī)中進(jìn)行ping命令測試操作，測試結(jié)果竟然也是正常的，而出現(xiàn)故障的計(jì)算機(jī)恰好是一些安裝了100M網(wǎng)卡設(shè)備的新工作站。網(wǎng)絡(luò)管理員反復(fù)對這種現(xiàn)象進(jìn)行了分析，會不會是工作站的網(wǎng)卡傳輸速度和交換機(jī)的傳輸速度存在匹配問題呢?想到這一點(diǎn)，網(wǎng)絡(luò)管理員于是在那些故障計(jì)算機(jī)中將100M網(wǎng)卡設(shè)備的傳輸速度強(qiáng)制調(diào)整為10M，之后再進(jìn)行訪問測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)故障現(xiàn)象居然沒有了，很顯然上面的故障的確是由于速度不匹配引起的。日后，當(dāng)我們遇到相同的故障現(xiàn)象時，不妨仔細(xì)檢查故障工作站與交換機(jī)的傳輸速度是否匹配，要是不匹配的話，只需要在故障工作站中強(qiáng)行修改網(wǎng)卡設(shè)備的傳輸速度，確保網(wǎng)卡設(shè)備與交換機(jī)的工作速度保持匹配?！　?.德國Hirschmann（赫斯曼）交換機(jī)解決IP報(bào)文無法轉(zhuǎn)發(fā)故障　　如果本地交換機(jī)的接口鏈路層協(xié)議狀態(tài)以及該接口的物理狀態(tài)全部都顯示為UP，而交換機(jī)無法正常轉(zhuǎn)發(fā)IP數(shù)據(jù)報(bào)文時，那多半是本地交換機(jī)指定協(xié)議發(fā)現(xiàn)路由參數(shù)沒有設(shè)置正確，或者是本地交換機(jī)的靜態(tài)路由沒有設(shè)置生效。此時，我們可以利用telnet命令遠(yuǎn)程登錄進(jìn)目標(biāo)交換機(jī)后臺管理界面，并進(jìn)入到命令行狀態(tài)，輸入字符串命令“displayiprouting-tableprotocolstatic”，單擊回車鍵后來查看本地交換機(jī)有沒有正確配置靜態(tài)路由，要是沒有配置的話需要及時重新進(jìn)行配置;　　在確認(rèn)上面的配置正確后，再執(zhí)行字符串命令“displayiprouting-table”，來檢查本地靜態(tài)路由有沒有設(shè)置生效，要是沒有生效的話需要重新啟用并設(shè)置好靜態(tài)路由，如此一來就能解決IP報(bào)文無法轉(zhuǎn)發(fā)的故障了?！　?.德國Hirschmann（赫斯曼）交換機(jī)解決主機(jī)無法Ping通故障　　在管理維護(hù)網(wǎng)絡(luò)時，我們時常會在交換機(jī)上對局域網(wǎng)中的某臺主機(jī)IP地址進(jìn)行Ping命令測試，在測試過程中要是遇到目標(biāo)主機(jī)IP地址無法被Ping通的故障現(xiàn)象時，我們究竟該如何來排除呢?在確認(rèn)目標(biāo)主機(jī)已經(jīng)開通電源，并且該系統(tǒng)自身工作狀態(tài)一切正常的情況下，我們可以在交換機(jī)中進(jìn)行如下排查操作：　　首先通過telnet命令登錄進(jìn)目標(biāo)交換機(jī)后臺管理界面，在該界面的命令行中執(zhí)行字符串命令“displayinterfaces”，從其后彈出的結(jié)果界面中看看目標(biāo)主機(jī)與本地交換機(jī)所連端口的IP地址是否處于同一個網(wǎng)段，或者檢查本地交換機(jī)指定連接端口的工作模式是否為“trunk”類型，如果這些參數(shù)設(shè)置不正確的話，我們必須及時將它們修改過來。　　其次執(zhí)行字符串命令“displayarp”，從彈出的結(jié)果界面中仔細(xì)檢查本地交換機(jī)管理維護(hù)的ARP表內(nèi)容是否設(shè)置正確，一旦發(fā)現(xiàn)有不正確的記錄或條目，必須及時將它修改過來。　　接著檢查本地交換機(jī)連接目標(biāo)主機(jī)的通信端口處于哪一個虛擬子網(wǎng)中，找到對應(yīng)的虛擬子網(wǎng)后，查看該虛擬子網(wǎng)有沒有正確配置VLAN通信接口，要是已經(jīng)配置了的話，我們不妨再檢查該VLAN通信接口的IP地址是否和目標(biāo)主機(jī)的IP地址位于相同的工作子網(wǎng)中，如果發(fā)現(xiàn)配置不正確的話，必須及時修改過來?！　∫巧厦娴母黜?xiàng)配置參數(shù)都正常的話，本地交換機(jī)還無法Ping通局域網(wǎng)中的目標(biāo)主機(jī)地址時，那我們不妨在本地交換機(jī)系統(tǒng)中啟用ARP調(diào)試開關(guān)，以便詳細(xì)地檢查本地交換機(jī)是否能夠正確地發(fā)送ARP報(bào)文和接受ARP報(bào)文，要是本地交換機(jī)只能對外發(fā)送ARP報(bào)文而無法從外面接受ARP報(bào)文時，那故障原因很可能出在以太網(wǎng)的物理鏈路層，此時我們需要ZD對物理鏈路層進(jìn)行檢查。　　4.德國Hirschmann（赫斯曼）交換機(jī)解決重新設(shè)置VLAN麻煩　　在管理維護(hù)單位局域網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)的時候，要是連接普通交換機(jī)的級聯(lián)端口發(fā)生改變時，那么之前在該交換機(jī)系統(tǒng)中劃分設(shè)置的VLAN往往就無法正常發(fā)揮作用了。如此說來，難道我們只有重新劃分設(shè)置VLAN嗎?如果真是這樣的話，那網(wǎng)絡(luò)維護(hù)工作量顯然是很大的；其實(shí)，在改變普通交換機(jī)的級聯(lián)端口后，我們只需要進(jìn)入交換機(jī)的后臺管理界面，修改一下級聯(lián)端口的工作模式，以便讓所有的VLAN訪問都能通過，這樣的話就能避免重新設(shè)置VLAN操作了?，F(xiàn)在我們就以某單位的局域網(wǎng)為例，來向各位詳細(xì)介紹一下交換機(jī)的具體設(shè)置步驟：　　假設(shè)該單位局域網(wǎng)共有6個VLAN，其中S1交換機(jī)位于A子網(wǎng)中，S2交換機(jī)位于B子網(wǎng)中；Z近單位新購買了幾臺工作站，現(xiàn)在需要把S1交換機(jī)移動到B子網(wǎng)中，而之前S1交換機(jī)是在端口24上用光纖線纜與單位局域網(wǎng)的核心交換機(jī)直接相連的。為了避免在交換機(jī)系統(tǒng)中重新劃分VLAN，我們可以改變S1、S2交換機(jī)的端口工作模式。例如，我們可以先查看一下S1交換機(jī)的端口設(shè)置情況；在進(jìn)行這種檢查時，可以先通過telnet命令遠(yuǎn)程登錄到交換機(jī)的后臺管理界面，并執(zhí)行字符串命令“displayinterfaces”，這樣我們就能查看到該交換機(jī)各個端口的具體配置情況了。從上述命令返回的結(jié)果中，我們看到與S2交換機(jī)保持級聯(lián)關(guān)系的S1交換機(jī)26端口狀態(tài)為“interfaceethernet0/26，portaccessvlan2”，通過該狀態(tài)我們不難明白S1交換機(jī)只屬于VLAN2，也就是說該交換機(jī)只允許來自VLAN2中的工作站通行，其他VLAN中的工作站都無法通行;當(dāng)S1交換機(jī)改變擺放位置后，它肯定會位于新的VLAN中，為了讓新VLAN中的所有工作站都能通行，我們需要在這里將S1交換機(jī)的26端口工作模式修改為“trunk”，這樣一來S1交換機(jī)就不需要重新劃分設(shè)置VLAN，就能讓新VLAN中的所有工作站都可以通行了?！　∫苍S有不少用戶會感到納悶，為什么S1交換機(jī)之前可以和單位局域網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)正常通信呢?原來S1交換機(jī)之前是通過光纖線纜與單位核心交換機(jī)相連的，那個光纖連接端口的工作模式已經(jīng)被設(shè)置為了“trunk”，當(dāng)S1交換機(jī)的擺放位置發(fā)生變化后，由于沒有使用光纖線纜來連接交換機(jī)，所以對應(yīng)的光纖連接端口也就沒有作用了?！　≡谛薷腟1交換機(jī)的26端口工作模式時，我們可以先遠(yuǎn)程登錄進(jìn)該交換機(jī)的后臺管理界面，并在該界面的命令行中執(zhí)行字符串命令“system”，將S1交換機(jī)的工作狀態(tài)切換到系統(tǒng)配置狀態(tài)，接著執(zhí)行“interfaceethernet0/26”命令進(jìn)入S1交換機(jī)的第26號連接端口配置狀態(tài)，再在該狀態(tài)下輸入字符串命令“portlink-typetrunk”，單擊回車鍵后，S1交換機(jī)的26號連接端口工作模式就被成功修改成“trunk”類型了；為了讓局域網(wǎng)中的所有VLAN都能通過該端口訪問S1交換機(jī)，我們還需要執(zhí)行字符串命令“porttrunkpermitvlanall”，以便指定26號連接端口允許來自所有VLAN中的工作站訪問。按照同樣的操作，我們可以修改S2交換機(jī)的級聯(lián)端口工作模式，確保局域網(wǎng)中的所有工作站都能訪問S2交換機(jī)。[詳細(xì)]

  2018-09-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 超聲波測厚儀校準(zhǔn)中常見問題及解決方式

  為保證校準(zhǔn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，本文從校準(zhǔn)試塊、耦合劑、校準(zhǔn)方法、測厚儀探頭和聲速幾個方面分析超聲波測厚儀校準(zhǔn)工作中顯示示值不準(zhǔn)確的原因，并提出了相應(yīng)的建議。[詳細(xì)]

  2018-11-06 14:49

  操作手冊

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• TREF常見問題分析

  TREF常見問題分析[詳細(xì)]

  2011-09-22 00:00

  安裝說明

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• CRYSTAF 常見問題分析

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  2011-09-22 00:00

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  2009-11-25 00:00

  操作手冊

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  2015-10-21 00:00

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  2018-07-16 13:38

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  2024-09-16 03:39

  期刊論文

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  2010-04-20 00:00

  安裝說明

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