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RNA提取常見問題分析
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2015-10-21 00:00 521閱讀次數(shù)
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RNA提取常見問題分析
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- Trizol總RNA提取試劑原裝現(xiàn)貨TRIZOL簡介: TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細胞并YZ細胞釋放出的核酸酶。 TRIzol在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性,因此對純化DNA及標準化RNA的生產(chǎn)十分有用。 TRIzol的成分 TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞,使細胞中的蛋白,核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì),但不能完全YZRNA酶活性,因此TRIzol中還加入了8-羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來YZ內(nèi)源和外源RNase(RNA酶)。 ※0.1%的8-羥基喹啉可以YZRNase,與氯仿聯(lián)合使用可增強YZ作用?! 惲蚯杷犭覍儆诮馀紕?,是一類QL的蛋白質(zhì)變性劑,可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)消失,導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)降解,核蛋白迅速與核酸分離?! ?巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。 TRIzol的使用方法 用勻漿器將組織磨碎,加入TRIzol處理組織。5分鐘后加入氯仿,以每分鐘12000轉(zhuǎn)離心5分鐘,樣品即分成水樣層、中間層和有機層?! 鵕NA存在于水樣層中,收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原?! 诔ニ畼訉雍?,有機層中的DNA和蛋白質(zhì)也能相繼以沉淀的方式還原:乙醇能使中間層的DNA沉淀析出,在有機層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質(zhì)?! ∶?00mlTRIzol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。無論樣品是人、動物、植物還是細菌組織,該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(約五百萬個)及大量的組織(≥1g)和細胞(超過一千萬個)均有較好的分離效果?! ∶恳话偃f細胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA,每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA(產(chǎn)量因細胞和組織不同而異)。 TRIzol操作上的簡便性允許其同時處理多個樣品,所有的操作可以在一小時內(nèi)完成?! RIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質(zhì)的污染,故而能夠作RNA印跡分析、斑點雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護分析和單分子克隆(PCR)?! 绻怯糜赑CR,當兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時,建議用級聯(lián)擴大的DNaseI(Cat.No.18068)來處理抽提的總RNA?! 鵗RIzol試劑能促進不同種屬、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體RNA條帶位于~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時,其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜?! RIzol對人體有害,使用時應(yīng)戴一次性手套,注意防止濺出。Trizol總RNA提取試劑原裝現(xiàn)貨021-54100800上海索萊寶生物科技有限公司ShanghaisolarbioBioscience&TechnologyCo.,LTD上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷售生化試劑、實驗耗材、自產(chǎn)分子生物學(xué)產(chǎn)品為一體,并能提供技術(shù)支持的專業(yè)性生物科技公司。公司秉承“以客戶為ZX,以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念,在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長。公司組織結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)部管理科學(xué),擁有一支既分工細致又高度合作的年輕化隊伍,保持了各個部門之間的GX合作運轉(zhuǎn),充分保障了公司在充滿競爭的市場中處于領(lǐng)xian地位。公司注重與業(yè)界精英合作,目前公司已經(jīng)和Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf、Fluka、Hyclone、Merck、Millipore、Omega、Oxoid、Pall、Peprotech、Pharmacia、Pierce、Roche、Sigma、Serva、TBD、Whatman、GBD、ADL、R&D、RB等企業(yè)結(jié)成緊密的合作伙伴關(guān)系,代理其領(lǐng)xian世界的產(chǎn)品,并在全國各地設(shè)有分銷機構(gòu)。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實驗技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準確的交貨時間、極具競爭力的價格,所有這些都保證了我們向您提供的是Z專業(yè)Zyou質(zhì)的服務(wù)!立足北京,上海,輻射全國,隨著產(chǎn)品營銷戰(zhàn)略的不斷延伸,我們將逐步發(fā)展成為yi流的專業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起,利用各自的資源優(yōu)勢和勇于進取的敬業(yè)精神,為ZG生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻。為了更好、更全面的發(fā)展,現(xiàn)公司正在誠招各地dai理商和招聘若干銷售、研發(fā)人員,歡迎垂詢并期待您的加入!Trizol總RNA提取試劑原裝現(xiàn)貨上海索萊寶生物科技有限公司電話:021-64855665/54100800傳真:021-54261506郵編:200233地址:上海市欽江路15號14層郵箱:solarbio@126.com網(wǎng)址:www.shsolarbio.com100ml1650促銷大量現(xiàn)貨供應(yīng)熱線:021-54100800[詳細]
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