本文由 大連日普利科技儀器有限公司 整理匯編

2024-09-28 00:39 244閱讀次數(shù)

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更多資料

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  毛細(xì)管色譜分析常見問題的解決[詳細(xì)]

  2024-09-28 00:39

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  毛細(xì)管色譜分析常見問題[詳細(xì)]

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  2024-09-30 14:15

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題的解決

  ELISA操作常見問題1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。5．溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗Z為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時(shí)間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因?yàn)?，不同試劑盒有不同的溫育時(shí)間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時(shí)間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。7．邊緣效應(yīng)使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較ZX孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與ZX孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測定的重復(fù)性。8．顯色顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時(shí)間過短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過長，空白或者非特異性顯色增加。9．比色比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問題。其次，單波長或雙波長比色選擇的問題。所謂的單波長比色即是通常的以對顯色具有Zda吸收的波長如450nm或492nm進(jìn)行比色測定；而雙波長雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長如450nm和非敏感波長如630nm下各測定一次，敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長下測定即改變波長至一定值，使得樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零，此時(shí)測得的吸光度即為臟物的吸光度值。Z后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn)。由于ELISA測定中單個(gè)空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值，故而在ELISA測定比色時(shí)，**是使用雙波長比色。綜上所述，盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會影響測定結(jié)果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法問題可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長，溫度太高盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫2、試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意4、保溫時(shí)間不足校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增加按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，**一次性使用7、蒸餾水水質(zhì)有問題使用新鮮合格的蒸餾水8、底物作用時(shí)間不足準(zhǔn)確定時(shí)背景深，全部呈有色,1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染2、樣品污染樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時(shí)4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底吸嘴盡可能一次性使用5、蒸餾水被污染使用新鮮蒸餾水6、酶等試劑混用不同批號試劑勿混用7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過多，加樣時(shí)間太長，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣重復(fù)性不佳1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長有短重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與**次接近2、保溫時(shí)間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性3、加樣量不一致樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴出現(xiàn)白板，陽性對照不顯色顯色液變質(zhì)更換新的顯色液洗滌液配制有誤請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 解決白酒氣相色譜分析的異?，F(xiàn)象

  解決白酒氣相色譜分析的異?，F(xiàn)象[詳細(xì)]

  2016-05-23 00:00

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 生物柴油的氣相色譜分析-毛細(xì)管-內(nèi)標(biāo)法

  生物柴油的氣相色譜分析-毛細(xì)管-內(nèi)標(biāo)法[詳細(xì)]

  2015-12-05 00:00

  報(bào)價(jià)單

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• 白酒的氣相色譜分析-毛細(xì)管-內(nèi)標(biāo)法

  白酒的氣相色譜分析-毛細(xì)管-內(nèi)標(biāo)法[詳細(xì)]

  2015-09-07 00:00

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 香水成分的毛細(xì)管氣相色譜分析

  實(shí)驗(yàn)名稱：香水成分的毛細(xì)管氣相色譜分析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解氣相色譜法分離的原理及其適用范圍；2、學(xué)習(xí)氫火焰離子化檢測器的結(jié)構(gòu)和使用方法；3、了解程序升溫技術(shù)在氣相色譜分析中的應(yīng)用；4、了解毛細(xì)管氣相色譜柱的性能；二、實(shí)驗(yàn)原理氣相色譜法是采用氣體作為流動相的一種色譜法，多組分的試樣是通過色譜柱得到分離，主要是通過物質(zhì)在固定相和流動相（氣相）之間發(fā)生吸附、脫附和溶解、揮發(fā)的分配過程。氣相色譜法應(yīng)用于氣體試樣的分析，也可以分析易揮發(fā)或可轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)物質(zhì)的液體和固體。但其不適用于高沸點(diǎn)，熱敏性物質(zhì)的檢測。在同一氣相色譜分析條件下,采用純樣加大法和保留值對照,對風(fēng)油精的5個(gè)主要組分進(jìn)行了定性分析氫火焰離子化檢測器是以氫氣和空氣燃燒生成的火焰為能源，當(dāng)有機(jī)化合物進(jìn)入以氫氣和氧氣燃燒的火焰，在高溫下產(chǎn)生化學(xué)電離，電離產(chǎn)生的離子，在高壓電場的作用下，形成離子流，經(jīng)過高阻（106～1011Ω）放大，成為與進(jìn)入火焰的有機(jī)化合物量成正比的電信號，因此可以根據(jù)信號的大小對有機(jī)物進(jìn)行定量分析。本實(shí)驗(yàn)采用程序升溫，低沸點(diǎn)先出峰，高沸點(diǎn)后出峰。風(fēng)油精中含有的有機(jī)物成分復(fù)雜，沸程較寬，宜采用程序升溫（即柱溫按預(yù)定的加熱速度，隨時(shí)間作線性或非線性的增加），可使各組分以**柱溫流出色譜柱，改善復(fù)雜試樣的分離，縮短分析時(shí)間。針對風(fēng)油精的主要成分（薄荷腦、樟腦、桉油、丁香酚、水楊酸甲酯）是具有香味的揮發(fā)性有機(jī)物，因此適合采用毛細(xì)管柱氣相色譜法，氫火焰離子化檢測器，程序升溫進(jìn)行分離和分析。三、實(shí)驗(yàn)步驟1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件，將色譜儀按儀器操作步驟調(diào)節(jié)至進(jìn)樣狀態(tài)，，待儀器的電路和氣路系統(tǒng)達(dá)到平衡?；鞣€(wěn)定后，準(zhǔn)備進(jìn)樣。2、吸取風(fēng)油精0.2μL分別四次進(jìn)樣，程序升溫從140℃，以20℃/min的速度升至200℃。采樣并記錄色譜數(shù)據(jù)。3、實(shí)驗(yàn)完畢后，按要求關(guān)好儀器。四、實(shí)驗(yàn)條件1、儀器與試劑氣相色譜儀（山東金普—GC2010，配有氫火焰離子化檢測器，毛細(xì)管氣路）氮?dú)怃撈?，氫氣鋼瓶，空氣壓縮機(jī)微量進(jìn)樣器1μL風(fēng)油精（主要組成：薄荷腦、樟腦、桉油、丁香酚、水楊酸甲酯）無水乙醇（分析純），萘（分析純）0.5g/10ml風(fēng)油精-乙醇0.1g/10ml萘-乙醇2、色譜條件色譜柱：彈性石英毛細(xì)管色譜柱（件號：01—11—1109柱型：SF—54（高惰聯(lián)）規(guī)格：30m×0.32mm×0.4um汽化室溫度：220℃柱溫采用程序升溫：起點(diǎn)140℃，以20℃/min的速度升至200℃。混合載氣流速：1.0ml/min分流比：30:1進(jìn)樣量：0.2μL五、數(shù)據(jù)記錄及處理（附原始圖）1、原始數(shù)據(jù)圖序號被測物萘濃度（g/mL）萘峰面積水楊酸甲酯峰面積標(biāo)1#10ml乙醇+0.1097g水楊酸0.131345.610740.1標(biāo)2#10ml乙醇+0.1975g水楊酸26458.30922120.291標(biāo)3#10ml乙醇+0.3158g水楊酸51124.42223376.277標(biāo)4#10ml乙醇+0.3923g水楊酸15472.2769764.674標(biāo)5#10ml乙醇+0.5077g水楊酸4459.21919447.699風(fēng)油精1#10ml乙醇+0.5597g水楊酸2、將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果列入下表中以**組為計(jì)算示例Ai/As=10740.1/31345.6=0.3426，mi/ms=0.1097/0.1000=1.097序號Ai/Asmi/ms標(biāo)1#0.34261.097標(biāo)2#0.83601.975標(biāo)3#0.45723.158標(biāo)4#0.63113.923標(biāo)5#4.36125.0773、.以Ai/As為縱坐標(biāo)，mi/ms為橫坐標(biāo)，做內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線。（因?yàn)闃?biāo)3#、標(biāo)4#點(diǎn)偏差較大，所以舍棄。）4、風(fēng)油精樣品（1）、定性分析A、從保留時(shí)間定性知：因?yàn)檩帘Ａ魰r(shí)間為4.9min左右，所以6號峰為萘的出峰數(shù)據(jù)；B、其他組份按沸點(diǎn)高低出峰，沸點(diǎn)低的先出峰，沸點(diǎn)高的后出峰（桉油176℃、樟腦204℃、薄荷腦216℃、水楊酸甲223℃、萘230℃、乙醇78.4℃），其出峰順序和峰高，峰面積等相關(guān)數(shù)據(jù)列表如下。峰號峰名保留時(shí)間峰高峰面積1乙醇1.0231033005.6251986655.6252桉油2.6323058.8576757.9003樟腦3.4324253.6678443.3164薄荷腦3.55747698.66881538.8985水楊酸甲酯3.7457240.332107425.5476萘4.8482597.9186185.573（2）、定量分析在樣品中Ai/As=107425.547/6185.573=17.3671。代入y=1.043x-0.9866，則mi/ms=17.597,那么mi=1.7597g即水楊酸甲酯的含量為1.7597g六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論（1）、為什么毛細(xì)管氣相色譜柱的柱效比填充柱高？答：氣相色譜組分在氣相中流動速度快，增加柱長，可以提高柱效。毛細(xì)管柱（一般為30-100m），填充柱（一般為15m），而且毛細(xì)管柱要比一般的直譯柱細(xì)的多，所以毛細(xì)管氣相色譜的柱效比填充柱高。（2）、程序升溫技術(shù)可用于何種試樣的分析？答：恒溫條件下，沸程很寬的樣品才采用程序升溫操作。柱溫按一定的加熱速率，隨時(shí)間做線形或非線性的增加。在較低的初始溫度下，沸點(diǎn)較低的組分先出峰，隨著柱溫的增加，較高沸點(diǎn)的組分也能較快的流出，并得到分離良好的尖峰。各組分的保留值可用色譜峰Z高處的相應(yīng)溫度即保留溫度表示。3、注意事項(xiàng)（1）、實(shí)驗(yàn)前先開載氣，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后關(guān)載氣，實(shí)驗(yàn)過程中不能斷氣。（2）、避免出現(xiàn)超前鋒，所以要進(jìn)樣準(zhǔn)確進(jìn)樣準(zhǔn)確，樣品濃度不能太大。（3）、氣相溫度不夠，溫度太低會造成峰拖尾，流動相速度太慢也會造成峰拖尾。（4）、進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣針應(yīng)先用被測試液潤洗幾次，然后緩慢抽取一定量試液，然后針頭朝上派去多于試液便可進(jìn)樣。[詳細(xì)]

  2018-08-15 10:57

  產(chǎn)品樣冊

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• 凍干機(jī)制冷系統(tǒng)常見問題分析與解決

  凍干機(jī)制冷系統(tǒng)常見問題分析與解決[詳細(xì)]

  2016-09-05 00:00

  期刊論文

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• 凍干機(jī)真空系統(tǒng)常見問題分析與解決

  凍干機(jī)真空系統(tǒng)常見問題分析與解決[詳細(xì)]

  2016-08-18 00:00

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• 可編程恒溫恒濕箱常見問題及如何解決

  可編程恒溫恒濕試驗(yàn)箱平時(shí)使用是偶爾會遇到一些問題，常見故障主要有哪些呢？這些故障又如何解決呢？詳細(xì)見資料。[詳細(xì)]

  2018-09-10 11:11

  產(chǎn)品樣冊

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• 氣相色譜分析測試常見問題及解決方案

  氣相色譜分析測試常見問題及解決方案[詳細(xì)]

  2012-12-17 00:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 氣相色譜儀檢定中常見問題的分析與解決

  氣相色譜儀由于其能夠?qū)ξ镔|(zhì)進(jìn)行物理分析的特殊性，已經(jīng)廣泛應(yīng)用到食品、環(huán)境、石化、YL等多個(gè)領(lǐng)域，而氣相色譜儀的檢定工作也隨之重要起來。 基于此， 本文就氣相色譜儀檢定過程中常見的問題以及解決方案進(jìn)行簡要闡述，其中著重講述檢測器點(diǎn)火失敗、色譜峰出現(xiàn)反常、信號無響應(yīng)等問題的解決方案。 [詳細(xì)]

  2024-09-27 23:50

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 多維色譜分析系統(tǒng)解決工業(yè)氣體的檢測方案

  儀器分析系統(tǒng)的基本配置（僅做參考，根據(jù)分析目的不同會有所變動）序號產(chǎn)品名稱及型號價(jià)格（元）數(shù)量金額備注1主機(jī)GC-9310Q488001臺48800含方法2氫火焰離子化檢測器（FID）50001只5000自動點(diǎn)火，穩(wěn)定快3高靈敏度熱導(dǎo)檢測器（TCD）60001只6000池體積小，可改裝毛細(xì)柱分析4填充柱進(jìn)樣器50001只5000可選配毛細(xì)柱進(jìn)樣器（分流/不分流）5進(jìn)口電磁十通閥加無死體積接頭132001只13200Valco公司6進(jìn)口六通閥80002只16000Valco公司8分析專用柱（四根）6000`1套6000國產(chǎn)或選配進(jìn)口毛細(xì)柱9天然氣分析專用軟件200001套20000測氣體熱值等性能參數(shù)計(jì)算，不含電腦、打印機(jī)。10電腦、打印機(jī)80001套8000聯(lián)想啟天M430，惠普激光打印機(jī)合計(jì)價(jià)款RMBRMB128000.[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 香水成分毛細(xì)管氣相色譜分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告

  香水成分毛細(xì)管氣相色譜分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告[詳細(xì)]

  2015-11-30 00:00

  專利

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