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茶多酚的色譜分析法
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本文由 蘭州中科安泰分析科技有限責任公司 整理匯編
2024-09-25 06:56 294閱讀次數(shù)
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茶多酚的色譜分析法
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酶聯(lián)免疫電泳轉(zhuǎn)移分析法
- 該法是分析蛋白質(zhì)的一種新方法,由southernblot衍化而來,后者是由SouthernE.M.所創(chuàng)建,即將在瓊脂糖凝膠中電泳后的DNA,原位吸附于硝酸纖維素膜上,再用放射性同位素如32P等標記的單鏈RNA或DNA探針,與板上的核酸分子雜交,從而達到分析DNA中基因位置和順序的目的。以后Alwine等采用另一種固相化的重氮芐氧甲基薄膜,以共價鍵方式和電泳后的RNA連接,從而固相化于薄膜上,再用分子探針雜交,分析RNA核酸的結(jié)構(gòu),由于此法與southernblot相對,故稱之為northernblot。接著,Towbin等又將在聚丙烯酰胺凝膠上電泳后的蛋白質(zhì)按其原來的圖形,電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,再用酶標記的抗蛋白質(zhì)抗體分析蛋白質(zhì)電泳圖譜,現(xiàn)稱之為westernblot,即酶聯(lián)免疫電泳轉(zhuǎn)移分析法或免疫印跡法(immunoblotting,IB)。其基本程序是先將待測蛋白質(zhì)混合物標本點在板狀聚丙烯酰胺凝膠板孔上走一維或二維電泳,使樣品中的單一成分分離出來,然后取硝酸纖維素膜與電泳后的凝膠相貼,在電場方向與板面垂直的條件下,進行轉(zhuǎn)移電泳,此時,蛋白質(zhì)在電場力及印跡紙的自然吸附力的共同作用下,使各個單一成分進入硝酸纖維素膜,并固相化。該膜即可用作蛋白質(zhì)活性分析或免疫反應分析。硝酸纖維素膜上未吸附蛋白的活性,可用牛血清白蛋白或非離子型去垢劑滅活。然后與**抗體溫育、洗滌,再與酶標第二抗體溫育、洗滌、酶底物顯色,進行蛋白質(zhì)活性等分析。IB法的優(yōu)點是,不同的抗原成分在聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離,然后轉(zhuǎn)移并固相化于硝酸纖維素膜上,進行抗原抗體反應時,不受其他條件的限制,加上酶標抗體的放大作用,可以鑒定微量或低效價的抗體。這樣使SDS(十二烷基硫酸鈉)聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨率與ELISA的高敏感性相結(jié)合,可廣泛用于McAb等的篩選和鑒定等。另外,將新建立的兩項與ELISA有關的檢測法簡介如下:①IgM抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗(IgMantibodycaptureELISA,MAC-ELISA),又稱反向間接ELISA,即利用抗μ鏈特異性抗體包被固相載體,吸附待檢血清中的IgM,再加入特異性抗原與“捕捉”到的相應IgM抗體結(jié)合,然后加入酶標記抗體及底物進行測定的一種方法,該法的特異性及敏感性均較高,不受血清中IgG等的干擾,可用于各種感染性疾病的早期輔助診斷;②ELISPOT測定法,用已知抗細胞因子的抗體包被固相載體,加入待檢效應細胞,溫育一定時間,洗去細胞,如細胞在溫育過程中有相應細胞因子產(chǎn)生,加酶標記抗體及底物溶液后則顯色,該法用于效應細胞分泌的單一細胞因子的測定。若用已知抗原包被固相載體,也可測定分泌特異抗體的B細胞頻數(shù)。[詳細]
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2018-09-27 10:00
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安培酶聯(lián)免疫分析法
- 安培酶聯(lián)免疫分析法安培法是酶聯(lián)免疫分析中另一種常用的電化學分析技術(shù)。它是將工作電極的電為控制在被測定物質(zhì)能發(fā)生氧化/還原反應的某個確定電位上,當樣品中含有該物質(zhì)時,就會產(chǎn)生可以檢測的電流,通過電流的大小就可以對該物質(zhì)的濃度進行測定。由于該方法常應用在色譜和流動體系的電化學檢測器上,所以又稱為控制電位安培檢測。當色譜和流動體系中分離流出的化合物經(jīng)過該檢測器時,可根據(jù)所產(chǎn)生的電流來判斷吧被測物質(zhì)流出的時間,根據(jù)電流峰的大小來判斷化合物的濃度。由于電化學檢測器的靈敏度高、死體積小,所以在色譜和流動分析中應用廣泛。只要具有電話性的物質(zhì)都可以進行測定,如苯酚類、硫醇類、硝基化合物、亞胺類、醌類、吩噻嗪類有機物,可以根據(jù)所測定的化合物的電化學性質(zhì)選擇相應的測定電位。安培法中Z簡單、Z常用的模式是在恒定的電位下測定待測物質(zhì)的氧化還原電流,這種恒電位測量模式可以避免雙電層充電和表面瞬變效應,因而信噪比高,可以達到很低的測定下限,還可以根據(jù)需要改變電位的各種參數(shù),采用不同的電位脈沖檢測模式如示差脈沖安培法、反向脈沖安培法、三脈沖安培法,或是采用雙電極或多電極檢測模式,以達到檢測低濃度樣品的要求。[詳細]
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2018-10-08 10:00
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