本文由 蘇州市萊頓科學儀器有限公司 整理匯編

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  該法是分析蛋白質(zhì)的一種新方法，由southernblot衍化而來，后者是由SouthernE.M.所創(chuàng)建，即將在瓊脂糖凝膠中電泳后的DNA，原位吸附于硝酸纖維素膜上，再用放射性同位素如32P等標記的單鏈RNA或DNA探針，與板上的核酸分子雜交，從而達到分析DNA中基因位置和順序的目的。以后Alwine等采用另一種固相化的重氮芐氧甲基薄膜，以共價鍵方式和電泳后的RNA連接，從而固相化于薄膜上，再用分子探針雜交，分析RNA核酸的結(jié)構(gòu)，由于此法與southernblot相對，故稱之為northernblot。接著，Towbin等又將在聚丙烯酰胺凝膠上電泳后的蛋白質(zhì)按其原來的圖形，電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，再用酶標記的抗蛋白質(zhì)抗體分析蛋白質(zhì)電泳圖譜，現(xiàn)稱之為westernblot，即酶聯(lián)免疫電泳轉(zhuǎn)移分析法或免疫印跡法（immunoblotting，IB）。其基本程序是先將待測蛋白質(zhì)混合物標本點在板狀聚丙烯酰胺凝膠板孔上走一維或二維電泳，使樣品中的單一成分分離出來，然后取硝酸纖維素膜與電泳后的凝膠相貼，在電場方向與板面垂直的條件下，進行轉(zhuǎn)移電泳，此時，蛋白質(zhì)在電場力及印跡紙的自然吸附力的共同作用下，使各個單一成分進入硝酸纖維素膜，并固相化。該膜即可用作蛋白質(zhì)活性分析或免疫反應(yīng)分析。硝酸纖維素膜上未吸附蛋白的活性，可用牛血清白蛋白或非離子型去垢劑滅活。然后與**抗體溫育、洗滌，再與酶標第二抗體溫育、洗滌、酶底物顯色，進行蛋白質(zhì)活性等分析。IB法的優(yōu)點是，不同的抗原成分在聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，然后轉(zhuǎn)移并固相化于硝酸纖維素膜上，進行抗原抗體反應(yīng)時，不受其他條件的限制，加上酶標抗體的放大作用，可以鑒定微量或低效價的抗體。這樣使SDS（十二烷基硫酸鈉）聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨率與ELISA的高敏感性相結(jié)合，可廣泛用于McAb等的篩選和鑒定等。另外，將新建立的兩項與ELISA有關(guān)的檢測法簡介如下：①IgM抗體捕捉酶聯(lián)免疫吸附試驗（IgMantibodycaptureELISA,MAC-ELISA），又稱反向間接ELISA，即利用抗μ鏈特異性抗體包被固相載體，吸附待檢血清中的IgM,再加入特異性抗原與“捕捉”到的相應(yīng)IgM抗體結(jié)合，然后加入酶標記抗體及底物進行測定的一種方法，該法的特異性及敏感性均較高，不受血清中IgG等的干擾，可用于各種感染性疾病的早期輔助診斷；②ELISPOT測定法，用已知抗細胞因子的抗體包被固相載體，加入待檢效應(yīng)細胞，溫育一定時間，洗去細胞，如細胞在溫育過程中有相應(yīng)細胞因子產(chǎn)生，加酶標記抗體及底物溶液后則顯色，該法用于效應(yīng)細胞分泌的單一細胞因子的測定。若用已知抗原包被固相載體，也可測定分泌特異抗體的B細胞頻數(shù)。[詳細]

  2018-09-27 10:00

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  安培酶聯(lián)免疫分析法安培法是酶聯(lián)免疫分析中另一種常用的電化學分析技術(shù)。它是將工作電極的電為控制在被測定物質(zhì)能發(fā)生氧化/還原反應(yīng)的某個確定電位上，當樣品中含有該物質(zhì)時，就會產(chǎn)生可以檢測的電流，通過電流的大小就可以對該物質(zhì)的濃度進行測定。由于該方法常應(yīng)用在色譜和流動體系的電化學檢測器上，所以又稱為控制電位安培檢測。當色譜和流動體系中分離流出的化合物經(jīng)過該檢測器時，可根據(jù)所產(chǎn)生的電流來判斷吧被測物質(zhì)流出的時間，根據(jù)電流峰的大小來判斷化合物的濃度。由于電化學檢測器的靈敏度高、死體積小，所以在色譜和流動分析中應(yīng)用廣泛。只要具有電話性的物質(zhì)都可以進行測定，如苯酚類、硫醇類、硝基化合物、亞胺類、醌類、吩噻嗪類有機物，可以根據(jù)所測定的化合物的電化學性質(zhì)選擇相應(yīng)的測定電位。安培法中Z簡單、Z常用的模式是在恒定的電位下測定待測物質(zhì)的氧化還原電流，這種恒電位測量模式可以避免雙電層充電和表面瞬變效應(yīng)，因而信噪比高，可以達到很低的測定下限，還可以根據(jù)需要改變電位的各種參數(shù)，采用不同的電位脈沖檢測模式如示差脈沖安培法、反向脈沖安培法、三脈沖安培法，或是采用雙電極或多電極檢測模式，以達到檢測低濃度樣品的要求。[詳細]

  2018-10-08 10:00

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  2024-09-16 03:03

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• ASNT超聲II級基礎(chǔ)理論試卷（答案）

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  2018-09-26 10:00

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  以下是歷年超聲波探傷II級證書的習題；僅供參考。點擊文件下載此文件；濟寧儒佳檢測儀器有限公司馮東源18754740103[詳細]

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• 毛細管電色譜的應(yīng)用及發(fā)展

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  2024-09-12 16:54

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