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氯霉素ELISA檢測快速試劑盒的研制和性能測試

本文由 上海華壹生物科技有限公司 整理匯編

2018-11-15 10:00 1217閱讀次數(shù)

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氯霉素ELISA檢測試劑盒的研制及其性能測試郭逸蓉桂文君王姝婷朱國念(浙江大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所杭州310029)摘要采用包被多克隆抗體直接競爭ELISA法建立了氯霉素殘留的酶聯(lián)免疫分析方法,并構(gòu)建了氯霉素殘留ELISA檢測試劑盒。研究結(jié)果表明,所選用的抗體對氯霉素親合力強(qiáng)、特異性高,試劑盒對氯霉素殘留檢測的線性范圍為0.24~250ng/mL,檢測限(IC10)0.47ng/mL,樣品的加標(biāo)回收率70%~130%。試劑盒性能測試結(jié)果表明,其準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性較好,保存期至少6個月,可用于蝦肉、雞肉、蜂蜜、鮮奶樣品中氯霉素殘留的批量快速、廉價檢測。關(guān)鍵詞氯霉素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒文章編號1009-7848(2007)06-0118-06氯霉素(chloramphenicol,CAP)是**個采用化學(xué)合成法生產(chǎn)的抗生素,對多種病原菌具有較強(qiáng)的YZ作用。由于其效高價廉,曾被廣泛應(yīng)用于各類家禽、家畜、蜜蜂和水產(chǎn)品的各種傳染病的FZ。然而,氯霉素存在著嚴(yán)重的毒副作用,能引起人的再生障礙性貧血、粒狀白細(xì)胞缺癥以及新生兒、早產(chǎn)兒灰色綜合癥等,對人類健康構(gòu)成巨大的潛在威脅[1~2]。因此,氯霉素殘留問題已引起國際組織和許多國家及地區(qū)的高度重視。近年來歐盟、美國等發(fā)達(dá)國家已相繼禁止氯霉素用于動物源性食品,并明確規(guī)定氯霉素殘留限量為不得檢出[3~4]。目前,國外采用商品化的氯霉素試劑盒,直接競爭酶聯(lián)免疫法檢測氯霉素。該法靈敏度高、操作方便。國內(nèi)對氯霉素殘留快速檢測技術(shù)的研究相對滯后,大多停留在間接競爭ELISA法,僅少數(shù)采用包被羊抗兔IgG抗體(二抗)的直接競爭ELISA法[5]。普遍使用的試劑盒主要為德國r-Biopharm公司、英國RANDOX公司及荷蘭Euro-Diagnostica公司的產(chǎn)品[6],價格昂貴。國產(chǎn)氯霉素殘留檢測試劑盒的質(zhì)量和性能不夠穩(wěn)定,市場化范圍很小。因此,研究具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的氯霉素殘留快速檢測技術(shù)很有必要本文選用抗氯霉素琥珀酸單酯(CAP-HS1)多克隆抗體,采用包被抗體-酶標(biāo)半抗原直接競爭ELISA法構(gòu)建氯霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,并與國內(nèi)外同類商用試劑盒進(jìn)行了性能對比試驗(yàn)。1材料與方法1.1材料與儀器1.1.1材料與試劑99.1%氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品,浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院提供;99.4%甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)品,浙江潤康藥業(yè)有限公司;氟甲砜霉素標(biāo)樣、四環(huán)素標(biāo)樣、磺胺二甲嘧啶標(biāo)樣、鹽酸克倫特羅標(biāo)樣,浙江省疾病預(yù)防控制ZX;辣根過氧化物酶(HRP),華美生物工程公司;N,N-二甲基甲酰胺(DMF),杭州雙林化工試劑廠;正三丁胺,上海業(yè)聯(lián)聯(lián)合化工有限公司;氯甲酸乙酯,上海同濟(jì)微量元素研究所;乙酸乙酯,杭州余杭高晶精細(xì)化工有限公司;正已烷,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;氯霉素半抗原CAP-HS1,由本實(shí)驗(yàn)室制備;碳酸鹽緩沖溶液(CBS,0.01mol/L、pH9.6);磷酸鹽緩沖溶液(PBS,0.01mol/L、pH7.4);洗滌液(PBST,含0.05%吐溫-20的PBS,pH7.4);底物溶液:每25mL0.05mol/L、pH5.0~5.5檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液,臨用前加入10mg鄰苯二胺(OPD),溶解后加入10μL30%H2O2,混勻待用;終止液:2mol/L硫酸。更多氯霉素ELISA檢測試劑盒的研制及其性能測試資料請看附件:

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