氯霉素ELISA檢測快速試劑盒的研制和性能測試
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2018-11-15 10:00 1217閱讀次數(shù)
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氯霉素ELISA檢測試劑盒的研制及其性能測試郭逸蓉桂文君王姝婷朱國念(浙江大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所杭州310029)摘要采用包被多克隆抗體直接競爭ELISA法建立了氯霉素殘留的酶聯(lián)免疫分析方法,并構(gòu)建了氯霉素殘留ELISA檢測試劑盒。研究結(jié)果表明,所選用的抗體對氯霉素親合力強(qiáng)、特異性高,試劑盒對氯霉素殘留檢測的線性范圍為0.24~250ng/mL,檢測限(IC10)0.47ng/mL,樣品的加標(biāo)回收率70%~130%。試劑盒性能測試結(jié)果表明,其準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性較好,保存期至少6個月,可用于蝦肉、雞肉、蜂蜜、鮮奶樣品中氯霉素殘留的批量快速、廉價檢測。關(guān)鍵詞氯霉素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒文章編號1009-7848(2007)06-0118-06氯霉素(chloramphenicol,CAP)是**個采用化學(xué)合成法生產(chǎn)的抗生素,對多種病原菌具有較強(qiáng)的YZ作用。由于其效高價廉,曾被廣泛應(yīng)用于各類家禽、家畜、蜜蜂和水產(chǎn)品的各種傳染病的FZ。然而,氯霉素存在著嚴(yán)重的毒副作用,能引起人的再生障礙性貧血、粒狀白細(xì)胞缺癥以及新生兒、早產(chǎn)兒灰色綜合癥等,對人類健康構(gòu)成巨大的潛在威脅[1~2]。因此,氯霉素殘留問題已引起國際組織和許多國家及地區(qū)的高度重視。近年來歐盟、美國等發(fā)達(dá)國家已相繼禁止氯霉素用于動物源性食品,并明確規(guī)定氯霉素殘留限量為不得檢出[3~4]。目前,國外采用商品化的氯霉素試劑盒,直接競爭酶聯(lián)免疫法檢測氯霉素。該法靈敏度高、操作方便。國內(nèi)對氯霉素殘留快速檢測技術(shù)的研究相對滯后,大多停留在間接競爭ELISA法,僅少數(shù)采用包被羊抗兔IgG抗體(二抗)的直接競爭ELISA法[5]。普遍使用的試劑盒主要為德國r-Biopharm公司、英國RANDOX公司及荷蘭Euro-Diagnostica公司的產(chǎn)品[6],價格昂貴。國產(chǎn)氯霉素殘留檢測試劑盒的質(zhì)量和性能不夠穩(wěn)定,市場化范圍很小。因此,研究具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的氯霉素殘留快速檢測技術(shù)很有必要本文選用抗氯霉素琥珀酸單酯(CAP-HS1)多克隆抗體,采用包被抗體-酶標(biāo)半抗原直接競爭ELISA法構(gòu)建氯霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,并與國內(nèi)外同類商用試劑盒進(jìn)行了性能對比試驗(yàn)。1材料與方法1.1材料與儀器1.1.1材料與試劑99.1%氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品,浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院提供;99.4%甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)品,浙江潤康藥業(yè)有限公司;氟甲砜霉素標(biāo)樣、四環(huán)素標(biāo)樣、磺胺二甲嘧啶標(biāo)樣、鹽酸克倫特羅標(biāo)樣,浙江省疾病預(yù)防控制ZX;辣根過氧化物酶(HRP),華美生物工程公司;N,N-二甲基甲酰胺(DMF),杭州雙林化工試劑廠;正三丁胺,上海業(yè)聯(lián)聯(lián)合化工有限公司;氯甲酸乙酯,上海同濟(jì)微量元素研究所;乙酸乙酯,杭州余杭高晶精細(xì)化工有限公司;正已烷,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;氯霉素半抗原CAP-HS1,由本實(shí)驗(yàn)室制備;碳酸鹽緩沖溶液(CBS,0.01mol/L、pH9.6);磷酸鹽緩沖溶液(PBS,0.01mol/L、pH7.4);洗滌液(PBST,含0.05%吐溫-20的PBS,pH7.4);底物溶液:每25mL0.05mol/L、pH5.0~5.5檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液,臨用前加入10mg鄰苯二胺(OPD),溶解后加入10μL30%H2O2,混勻待用;終止液:2mol/L硫酸。更多氯霉素ELISA檢測試劑盒的研制及其性能測試資料請看附件:
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氯霉素ELISA檢測快速試劑盒的研制和性能測試
- 氯霉素ELISA檢測試劑盒的研制及其性能測試郭逸蓉桂文君王姝婷朱國念(浙江大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所杭州310029)摘要采用包被多克隆抗體直接競爭ELISA法建立了氯霉素殘留的酶聯(lián)免疫分析方法,并構(gòu)建了氯霉素殘留ELISA檢測試劑盒。研究結(jié)果表明,所選用的抗體對氯霉素親合力強(qiáng)、特異性高,試劑盒對氯霉素殘留檢測的線性范圍為0.24~250ng/mL,檢測限(IC10)0.47ng/mL,樣品的加標(biāo)回收率70%~130%。試劑盒性能測試結(jié)果表明,其準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性較好,保存期至少6個月,可用于蝦肉、雞肉、蜂蜜、鮮奶樣品中氯霉素殘留的批量快速、廉價檢測。關(guān)鍵詞氯霉素酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒文章編號1009-7848(2007)06-0118-06氯霉素(chloramphenicol,CAP)是**個采用化學(xué)合成法生產(chǎn)的抗生素,對多種病原菌具有較強(qiáng)的YZ作用。由于其效高價廉,曾被廣泛應(yīng)用于各類家禽、家畜、蜜蜂和水產(chǎn)品的各種傳染病的FZ。然而,氯霉素存在著嚴(yán)重的毒副作用,能引起人的再生障礙性貧血、粒狀白細(xì)胞缺癥以及新生兒、早產(chǎn)兒灰色綜合癥等,對人類健康構(gòu)成巨大的潛在威脅[1~2]。因此,氯霉素殘留問題已引起國際組織和許多國家及地區(qū)的高度重視。近年來歐盟、美國等發(fā)達(dá)國家已相繼禁止氯霉素用于動物源性食品,并明確規(guī)定氯霉素殘留限量為不得檢出[3~4]。目前,國外采用商品化的氯霉素試劑盒,直接競爭酶聯(lián)免疫法檢測氯霉素。該法靈敏度高、操作方便。國內(nèi)對氯霉素殘留快速檢測技術(shù)的研究相對滯后,大多停留在間接競爭ELISA法,僅少數(shù)采用包被羊抗兔IgG抗體(二抗)的直接競爭ELISA法[5]。普遍使用的試劑盒主要為德國r-Biopharm公司、英國RANDOX公司及荷蘭Euro-Diagnostica公司的產(chǎn)品[6],價格昂貴。國產(chǎn)氯霉素殘留檢測試劑盒的質(zhì)量和性能不夠穩(wěn)定,市場化范圍很小。因此,研究具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的氯霉素殘留快速檢測技術(shù)很有必要本文選用抗氯霉素琥珀酸單酯(CAP-HS1)多克隆抗體,采用包被抗體-酶標(biāo)半抗原直接競爭ELISA法構(gòu)建氯霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,并與國內(nèi)外同類商用試劑盒進(jìn)行了性能對比試驗(yàn)。1材料與方法1.1材料與儀器1.1.1材料與試劑99.1%氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品,浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院提供;99.4%甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)品,浙江潤康藥業(yè)有限公司;氟甲砜霉素標(biāo)樣、四環(huán)素標(biāo)樣、磺胺二甲嘧啶標(biāo)樣、鹽酸克倫特羅標(biāo)樣,浙江省疾病預(yù)防控制ZX;辣根過氧化物酶(HRP),華美生物工程公司;N,N-二甲基甲酰胺(DMF),杭州雙林化工試劑廠;正三丁胺,上海業(yè)聯(lián)聯(lián)合化工有限公司;氯甲酸乙酯,上海同濟(jì)微量元素研究所;乙酸乙酯,杭州余杭高晶精細(xì)化工有限公司;正已烷,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;氯霉素半抗原CAP-HS1,由本實(shí)驗(yàn)室制備;碳酸鹽緩沖溶液(CBS,0.01mol/L、pH9.6);磷酸鹽緩沖溶液(PBS,0.01mol/L、pH7.4);洗滌液(PBST,含0.05%吐溫-20的PBS,pH7.4);底物溶液:每25mL0.05mol/L、pH5.0~5.5檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液,臨用前加入10mg鄰苯二胺(OPD),溶解后加入10μL30%H2O2,混勻待用;終止液:2mol/L硫酸。更多氯霉素ELISA檢測試劑盒的研制及其性能測試資料請看附件:[詳細(xì)]
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氯霉素檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)1原理及用途本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)組織、畜禽組織、肝臟、蛋類、蜂蜜、牛奶及飼料等樣本中的氯霉素藥物(Chloramphenicol,CAP),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的氯霉素藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含氯霉素藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中氯霉素藥物的殘留量。2技術(shù)指標(biāo)2.1試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)2.2反應(yīng)模式:25℃,30min~30min~15min2.3檢測下限:組織、肝臟、蜂蜜、牛奶……………0.025ppb蛋類……………………………………0.1ppb尿液、血清、腸衣、飼料、奶粉……0.05ppb2.4交叉反應(yīng)率:氯霉素…………………………………1**%甲砜霉素、氟甲砜霉素………………<0.1%2.5樣本回收率:組織、肝臟……………………………85%±20%蜂蜜、腸衣……………………………85%±25%牛奶、飼料……………………………75%±25%尿液、血清……………………………70%±20%3試劑盒組成酶標(biāo)板……………………………96孔標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):100ppb………1ml酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml底物液A(白蓋)……………………6ml底物液B(黑蓋)……………………6ml終止液(黃蓋)………………………6ml20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml2X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml說明書………………………………1份4需要的器材和試劑4.1儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)4.2微量移液器:單道20l-200l,100l-1000l、多道300l4.3試劑:乙酸乙酯、正己烷、乙腈、醋酸鈉、醋酸、亞硝基鐵(K2Fe(CN)5(NO)2H2O)、葡萄糖苷酸酶、硫酸鋅(ZnSO47H2O)5樣本前處理5.1樣本處理前須知:實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。5.2配液:配液1:0.36M亞硝基鐵溶液(牛奶、奶粉樣本)11.9g亞硝基鐵加去離子水至100ml溶解。配液2:1.04M硫酸鋅溶液(牛奶、奶粉樣本)29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。配液3:0.1MpH4.8醋酸鈉緩沖液(尿液樣本)2.4g醋酸鈉加去離子水500ml溶解,加1.2ml醋酸混勻。配液4:乙腈-水溶液V乙腈:V水=84:16配液5:復(fù)溶液將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。5.3樣本前處理步驟:5.3.1組織、魚、蝦、肝臟樣本處理方法1)稱取均質(zhì)后的樣本3±0.05g于50ml離心管中,先加入3ml去離子水振蕩混勻,再加入6ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體2ml在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入0.5ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機(jī)相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):0.5檢測下限:0.025ppb5.3.2血清、血漿樣本處理方法1)取1ml血清或血漿至離心管中,加入2ml乙酸乙酯振蕩1分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,或靜置使水相與有機(jī)相分離;2)取全部上層液體在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入1ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機(jī)相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb5.3.3尿液樣本處理方法1)取2ml尿液至離心管中,加入0.1MpH4.8醋酸鈉緩沖液0.5ml混合,加40ul葡萄糖苷酸酶,混勻,37℃水解2小時以上(或過夜);2)將上述溶液恢復(fù)至室溫后加入8ml乙酸乙酯振蕩1分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取4ml上層液體在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用1ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;4)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb5.3.4蜂蜜樣本處理方法1)取2±0.05g蜂蜜于離心管中,用4ml去離子水溶解,加入4ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體2ml在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用0.5ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;4)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):0.5檢測下限:0.025ppb(檢測下限0.025ppb,定量下限0.1ppb,因某些樣本有干擾建議以0.1ppb作為陽性判定值)5.3.5腸衣樣本處理方法1)腸衣經(jīng)清洗后均質(zhì),稱取均質(zhì)后的樣本1±0.05g于50ml離心管中,加入10ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體5ml在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入0.5ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機(jī)相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb5.3.6牛奶樣本處理方法1)將牛奶樣本15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,去除上層脂肪,取5ml去脂肪奶樣于50ml離心管中,加250ul亞硝基鐵溶液(配液1)振蕩混合30秒,加250ul硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合30秒,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體2.2ml(相當(dāng)于2ml鮮奶)于另一離心管中,加入4ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;3)取上層液體2ml在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用0.5ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;5)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):0.5檢測下限:0.025ppb(檢測下限0.025ppb,定量下限0.05ppb,因某些樣本有干擾建議以0.15ppb作為陽性判定值)5.3.7奶粉樣本處理方法1)取2±0.05g奶粉于50ml離心管中,用10ml去離子水溶解,加入1ml亞硝基鐵溶液(配液1)和1ml硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體3.6ml(相當(dāng)于0.6g奶粉)于另一離心管中,加入6ml乙酸乙酯振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;3)取上層液體4ml在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用0.4ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;5)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb(檢測下限0.05ppb,定量下限0.15ppb,因某些樣本有干擾建議以0.15ppb作為陽性判定值)5.3.8蛋類樣本處理方法1)取3±0.05g均質(zhì)的蛋類樣本于50ml離心管中,加9ml乙腈-水溶液振蕩混合2分鐘,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體3ml于另一離心管中,加入3ml去離子水,再加4.5ml乙酸乙酯振蕩1分鐘,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;3)取全部上層液體在50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入2ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機(jī)相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):2檢測下限:0.1ppb(檢測下限0.1ppb,定量下限0.3ppb)5.3.9飼料樣本處理方法1)取2±0.05g均質(zhì)的飼料于50ml離心管中,用2ml去離子水溶解,再加入6ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體3ml載50-60℃下氮?dú)獯蹈桑?)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入1ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機(jī)相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb6酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。實(shí)驗(yàn)開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。6.1編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。6.2加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50l/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50l/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光反應(yīng)30分鐘。6.3洗滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250l/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,Z后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。6.4加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100l/孔,25℃避光反應(yīng)30分鐘。6.5洗滌:同上6.6顯色:加底物液A50l/孔,再加底物液B50l/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。6.7終止:每孔加入終止液50l,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。6.8測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。7結(jié)果分析7.1百分吸光率的計算標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以**個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以1**%,即百分吸光度值(%)=A×1**%A0A標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值A(chǔ)00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值7.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索?。?注意事項(xiàng)8.1室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。8.2在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。8.3混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。8.4在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。8.5不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。8.6顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。8.7反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。9貯藏及保存期儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。保質(zhì)期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。[詳細(xì)]
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牛奶中過氧化氫快速檢測試紙條的研制
- 摘要:當(dāng)前,食品安全問題日益突出,其中乳制品安全問題也備受關(guān)注,為了防止牛奶變質(zhì),不法經(jīng)營者向牛奶中摻入過氧化氫,對消費(fèi)者健康造成巨大威脅。傳統(tǒng)的過氧化氫檢測方法復(fù)雜且耗時較長,為滿足現(xiàn)場快速、準(zhǔn)確檢測過氧化氫殘留的需求,本研究利用酶促反應(yīng)原理,將含有1g/L的四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和10μg/mL的辣根過氧化物酶(HRP)混合溶液作為顯色劑,并加入適當(dāng)?shù)谋Wo(hù)劑,以定量濾紙為載體,經(jīng)真空干燥并加工制成過氧化氫快速檢測試紙條。該試紙條能夠在10秒鐘內(nèi)對牛奶中的過氧化氫殘留進(jìn)行半定量檢測,Zdi檢出限達(dá)到0.5mg/L,并且操作簡單,價格低廉,十分適用于奶制品廠和基層奶站的現(xiàn)場檢測。上海納锘--為您提供納米級專業(yè)細(xì)致服務(wù)!如欲了解更多該產(chǎn)品信息,可來電咨詢。--------------------------------------------------------------------- 上海納锘實(shí)業(yè)有限公司 地址:上海市閔行區(qū)金都路1165弄123號21幢綜合樓5001室 電話:021-60900829,60900830,61131031,61131051 傳真:021-61131052[詳細(xì)]
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2018-11-13 15:46
產(chǎn)品樣冊
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氯霉素(一步法,快速出結(jié)果)檢測試劑
- 氯霉素(一步法,快速出結(jié)果)檢測試劑[詳細(xì)]
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2024-09-12 21:56
標(biāo)準(zhǔn)
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微流控芯片紫外檢測儀的研制及性能考察*
- 微流控芯片紫外檢測儀的研制及性能考察*[詳細(xì)]
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2024-09-15 17:10
產(chǎn)品樣冊
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Elisa試劑盒性能
- 人組胺(Histamine)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中組胺(Histamine)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人組胺(Histamine)水平。用純化的人組胺(Histamine)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入組胺(Histamine),再與HRP標(biāo)記的組胺(Histamine)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺(Histamine)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人組胺(Histamine)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:18μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為12μg/L,8μg/L,4μg/L,2μg/L,1μg/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:0.75μg/L-15μg/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-10-23 10:31
產(chǎn)品樣冊
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牛奶中氯霉素的檢測
- 氯霉素是第一-個可以人工合成的抗生素,常用于家禽疾病的預(yù)防和治療。由于氯霉素對人體有嚴(yán)重的毒副作用,而動物源性食品中的氣霉素殘留會通過肉、蛋、奶等食物傳遞給人類。目前美國、日本、韓國和歐盟等國家和地區(qū)均已禁止在食用性動物中使用氣霉素,并規(guī)定在動物源性食品中不得檢出。本實(shí)驗(yàn)參考《GB 29688 2013食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)牛奶中氣霉素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》采用??艶otector Plus全自動固相萃取儀進(jìn)行凈化,??艫uto EVA 80全自動平行濃縮儀進(jìn)行濃縮,高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定,內(nèi)標(biāo)法定量。在添加濃度為0.1~5. 0 Hg/kg范圍內(nèi),回收率為78%~-89%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%,準(zhǔn)確度和精密度均符合殘留分析要求,可以滿足牛奶中氯霉素殘留量的檢測需要。
[詳細(xì)]
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2024-01-29 15:21
應(yīng)用文章
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牛奶快速檢測試劑盒說明書,elisa檢測方法
- 牛奶快速檢測試劑盒說明書,elisa檢測方法此說明書為PDF格式,請下載參閱!謝謝在線QQ:747582432,電話:15810802415010-59974429聯(lián)系人:張龍郵箱:bjdgsw001@163.comDD0260北京,大鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISA檢測試劑盒kitRatCollagenaseTypeIIELISAKitDD0261北京,大鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA檢測試劑盒kitRatTriggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,TREM-1ELISAKitDD0262北京,大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測試劑盒kitRatCollagenaseIELISAKitDD0263北京,大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA檢測試劑盒kitRatphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKitDD0264北京,大鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA檢測試劑盒kitRatCathepsinK,cath-KELISAKitDD0265北京,大鼠巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA檢測試劑盒kitRatAlternativemacrophageactivation-associatedCCchemokine1,AMAC-1ELISAKitDD0266北京,大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA檢測試劑盒kitRatbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKitDD0267北京,大鼠視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA檢測試劑盒kitRatRetinolbindingprotein4,RBP-4ELISAKitDD0268北京,大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA檢測試劑盒kitRat6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISAKitDD0269北京,大鼠戊糖素(Pentosidine)ELISA檢測試劑盒kitRatPentosidineELISAKitDD0270北京,大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA檢測試劑盒kitRatadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKitDD0271北京,大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA檢測試劑盒kitRatneutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISAKitDD0272北京,大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA檢測試劑盒kitRatHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKitDD0273北京,大鼠雌激素受體(ER)ELISA檢測試劑盒kitRatEstrogenReceptor,ERELISAKitDD0274北京,大鼠β-防御素(β-Defensins)ELISA檢測試劑盒kitRatβ-DefensinsELISAKit[詳細(xì)]
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2018-09-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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針織物的物理和化學(xué)性能測試
- 針織物的物理和化學(xué)性能測試[詳細(xì)]
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2015-06-09 00:00
安裝說明
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氯霉素(CAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA) 試劑盒使
- 氯霉素(CAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T3μg/L-120μg/L使用目的:氯霉素(CAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素(ET)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠內(nèi)皮素(ET)水平。用純化的大鼠內(nèi)皮素(ET)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素(ET),再與HRP標(biāo)記的內(nèi)皮素(ET)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素(ET)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠內(nèi)皮素(ET)濃度。氯霉素(CAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。120μg/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60μg/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30μg/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15μg/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5μg/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。氯霉素(CAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效:6個月[詳細(xì)]
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2018-09-28 10:00
產(chǎn)品樣冊
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研制生產(chǎn)密度測試系統(tǒng)用于測試液體和固體的密度
- 研制生產(chǎn)密度測試系統(tǒng)用于測試液體和固體的密度[詳細(xì)]
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2007-08-24 00:00
操作手冊
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赭曲霉毒素ELISA快速檢測試劑盒
- 赭曲霉毒素ELISA快速檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2012-08-21 00:00
選購指南
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牛乳中四環(huán)素和氯霉素殘留快速測定方法研究
- 牛乳中四環(huán)素和氯霉素殘留快速測定方法研究[詳細(xì)]
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2024-09-22 08:12
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ELISA試劑盒檢測樣本的原理和步驟
- ELISA試劑盒檢測樣本的原理和步驟標(biāo)本:細(xì)胞液、體液以及組織勻漿使用說明書產(chǎn)品編號:E01H0019本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床及診斷使用!預(yù)期應(yīng)用ELISA試劑盒定量檢測人細(xì)胞液、體液以及組織勻漿中8羥基脫氧鳥苷的含量。自備物品1.酶標(biāo)儀(盡量提前預(yù)熱)2.微量加液器、吸頭3.蒸餾水或去離子水以及濾紙樣本的采集及保存一般的生物標(biāo)本包括有:血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等一般為無菌操作,低溫保存(-80℃、液氮)一.如果采集的實(shí)質(zhì)器官則要求:1、器官實(shí)質(zhì)不能太小2、以采集實(shí)質(zhì)性病灶區(qū)為佳:如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳3、同一病例裝入同一容器,并做好標(biāo)記4、應(yīng)在0-8℃的低溫儲存和運(yùn)輸5、實(shí)質(zhì)性器官的處理:5.1、取實(shí)質(zhì)性器官約0.5mg左右,充分剪碎或研磨5.2、加入約500ul的PBS/生理鹽水,充分混勻5.3、離心5000rmpx10min,去上清5.4、-20℃保存,作為待檢標(biāo)本(切勿反復(fù)凍融)二.體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式1、血液包括血漿和血清它們的主要區(qū)別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集,因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,**的采集的時間時空腹采集;3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般隔夜尿不采集;4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmpx5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫蝗S便以及天然孔排泄物:采集后一般現(xiàn)用PBS/生理鹽水溶解,充分混勻,800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆?;四.活檢組織一般進(jìn)行穿刺檢測,Z常見的就是肝活檢,像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進(jìn)行活檢簡單方便、準(zhǔn)確。三、表達(dá)產(chǎn)物的檢測(一)真核表達(dá)產(chǎn)物1、細(xì)胞上清(分泌性蛋白)1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;1.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmpx10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmpx10min,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;2、細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001MPBS(pH7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管,500-800rmpx10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中,DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;2.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmpx10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01MPBS(pH7.4)重懸,500-800rmpx10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中,DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;(二)原核(大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng))表達(dá)產(chǎn)物1、表達(dá)上清(非融合性蛋白)直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;2、菌體裂解物(融合性蛋白)直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmpx10min,棄上清,沉淀用PBS洗一遍,500-800rmpx10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;ELISA試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免**孔與Z后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響Z后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。5.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,SY幾個標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。操作步驟1.取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。2.取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。3.空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;4.在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔?。?.在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對照孔)6.將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng)1小時;(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)7.充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)8.酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙徹底拍干;9.各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)10.20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;11.各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);ELISA試劑盒結(jié)果判斷1.30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;2.以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;3.根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍;4.敏感度:0.1ng/ml[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
產(chǎn)品樣冊
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2014-12-29 00:00
產(chǎn)品樣冊
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人抗糖抗體ELISA檢測試劑盒性能
- 人抗Chitobioside糖抗體(ACCA)ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清或血漿試驗(yàn)原理:ACCA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知ACCA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將ACCA和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ACCA的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品:40IU/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標(biāo)記的抗ACCA抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型人抗Chitobioside糖抗體(ACCA)ELISA檢測試劑盒自備材料蒸餾水。加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。人抗Chitobioside糖抗體(ACCA)ELISA檢測試劑盒的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:40IU/ml(6號標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。20IU/ml(5號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10IU/ml(4號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0IU/ml(3號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5IU/ml(2號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.25IU/ml(1號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0IU/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度(IU/ml)A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F1.251.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。人抗Chitobioside糖抗體(ACCA)ELISA檢測試劑盒結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的ACCA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的ACCA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍:0-40IU/ml4、敏感度:0.1IU/ml[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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牛奶中抗生素殘留檢測試劑盒的研制及應(yīng)用
- 牛奶中抗生素殘留檢測試劑盒的研制及應(yīng)用[詳細(xì)]
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2024-09-28 00:55
專利
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