本文由 北京盈盛恒泰科技有限責(zé)任公司 整理匯編

2025-01-06 15:34 139閱讀次數(shù)

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• 一株野生刺梨來源葡萄汁有孢漢遜酵母的鑒定及釀造學(xué)性能分析

  摘要：為鑒定一株野生刺梨來源產(chǎn)香酵母WR-27的種屬類別與釀造學(xué)性能，采用形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)解析其種屬類別，分光光度法檢測(cè)菌株的生長(zhǎng)特性、釀造環(huán)境耐受性，顯色法分析其產(chǎn)硫化氫和β-葡萄糖苷酶性能[詳細(xì)]

  2025-01-06 15:34

  期刊論文

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• 一株耐單寧酵母菌的篩選、鑒定及發(fā)酵特性---德國(guó)AIRSENSE電子鼻

  摘要：為解決傳統(tǒng)釀造酵母在高單寧水果發(fā)酵中存在品質(zhì)不佳的問題，篩選適合發(fā)酵的優(yōu)良酵母。該研究在單寧脅迫條件下，從刺梨等水果中篩選鑒定出1株具有高單寧耐受性的貝氏酵母菌株N1(Saccharomyces bayanus)，分析其發(fā)酵能力與風(fēng)味組成。結(jié)果表明，菌株N1Z適生長(zhǎng)溫度28 ℃，Z適pH=6，能夠耐受32 g/L單寧、400 g/L糖度、16%乙醇、250 mg/L SO2，單寧降解率為40.01%；將菌株N1用于刺梨果渣發(fā)酵，獲得的刺梨酒酒精度9.23%vol，總酯1.36 g/L，殘?zhí)?.31 g/L；電子鼻主成分分析模型(principal component analysis， PCA)中N1與釀酒酵母SY在第二主成分呈負(fù)相關(guān)；W1S、W1C、W3C傳感器敏感度Z高，表明烷烴類、芳香苯類、芳香胺類在風(fēng)味中貢獻(xiàn)較大，是刺梨酒的主要風(fēng)味成分。該研究為高單寧水果發(fā)酵提供了一定參考價(jià)值。 關(guān)鍵詞：?jiǎn)螌幠褪苄?篩選;貝氏酵母;發(fā)酵特性;電子鼻; [詳細(xì)]

  2023-05-15 11:11

  期刊論文

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• 環(huán)孢霉素A的分析

  環(huán)孢霉素A的分析[詳細(xì)]

  2024-09-29 05:24

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  2024-09-18 11:10

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  2024-09-29 13:46

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  2024-09-13 11:42

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  HPLC法對(duì)頭孢曲松鈉的分析檢測(cè)[詳細(xì)]

  2010-07-13 00:00

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• 僵尸肉的來源及檢測(cè)方案

  “僵尸肉"到底從哪兒來？成都華衡儀器有限公司食品安全檢測(cè)儀之病害肉速測(cè)儀作者：成都華衡儀器有限公司畜牧部田經(jīng)理參考文獻(xiàn)：新聞網(wǎng)今年6月，海關(guān)總署在國(guó)內(nèi)14個(gè)省份統(tǒng)一組織開展打擊凍品走私專項(xiàng)查緝抓捕行動(dòng)。行動(dòng)的成果讓人震驚，“70后"豬蹄、“80后"雞翅……比一些年輕人年紀(jì)還大的“僵尸肉"通過走私途徑，悄無聲息地出現(xiàn)在百姓餐桌上。雖然海關(guān)總署并未公開這些“僵尸肉"的來源，但既然是走私入境，那就是來源于境外。新華國(guó)際客戶端就來追蹤一下“僵尸肉"在國(guó)際上的詭秘行蹤。來源【戰(zhàn)備肉】在歷史上，“僵尸肉"**次作為丑聞主角出現(xiàn)，是在1898年的美西戰(zhàn)爭(zhēng)期間。當(dāng)時(shí)，美國(guó)戰(zhàn)爭(zhēng)部以極低價(jià)格從芝加哥等地的肉制品企業(yè)采購(gòu)戰(zhàn)備肉。由于時(shí)間緊、任務(wù)重、價(jià)格低，為賺取利潤(rùn)，黑心企業(yè)將質(zhì)量極低的牛肉運(yùn)往當(dāng)時(shí)作為雙方戰(zhàn)場(chǎng)的古巴。在戰(zhàn)場(chǎng)上，這些戰(zhàn)備肉由于腐敗變質(zhì)或使用了過量的化學(xué)用品，導(dǎo)致大量士兵患上痢疾和食品中毒。再加上當(dāng)時(shí)軍營(yíng)里瘧疾和黃熱病橫行，這些“僵尸肉"讓當(dāng)時(shí)的美軍遭到嚴(yán)重打擊，Z終患病死亡的美軍人數(shù)是戰(zhàn)死的兩倍之多。這一事件被稱為“美軍牛肉丑聞"，引發(fā)國(guó)會(huì)調(diào)查，但Z終不了了之。不過它揭露的食品工業(yè)亂象卻引起了社會(huì)廣泛關(guān)注。Z終在1906年，美國(guó)國(guó)會(huì)通過了《肉類衛(wèi)生檢查法案》和《純凈食品藥品法案》。但“僵尸肉"的幽靈并未從戰(zhàn)備肉這一類屬當(dāng)中徹底淡出。2010年1月，俄羅斯內(nèi)務(wù)部經(jīng)濟(jì)安全局在俄西南部的別爾哥羅德州破獲一起肉制品走私案。調(diào)查人員發(fā)現(xiàn)，一些年齡超過30年的冷凍“戰(zhàn)備肉"從美國(guó)、巴西、比利時(shí)、加拿大和阿根廷經(jīng)烏克蘭境內(nèi)走私進(jìn)入俄境。涉案的犯罪團(tuán)伙當(dāng)時(shí)從事這種勾當(dāng)已有數(shù)年時(shí)間。警方在偵查過程中發(fā)現(xiàn)，這些肉制品曾被作為“戰(zhàn)略儲(chǔ)備物質(zhì)"長(zhǎng)年保存在拉美某國(guó)的冷庫(kù)里，已經(jīng)嚴(yán)重過期。據(jù)偵查人員提供的資料表明，這些肉制品是在上世紀(jì)的一九七四年被冷凍起來的。來源【黑心肉】“僵尸肉"的來源除了因戰(zhàn)略儲(chǔ)備而嚴(yán)重過期外，還有一些商家昧著良心將過期的肉制品賣給消費(fèi)者。近現(xiàn)代Z的案例出現(xiàn)在德國(guó)。2006年，一家位于德國(guó)巴伐利亞州與奧地利邊境地區(qū)的公司使用偽造保質(zhì)時(shí)間標(biāo)簽，將過期肉制品解凍、腌制，然后再次冷凍出售，警方查封了該公司約120噸腐爛肉制品，有些甚至已經(jīng)過了保質(zhì)期4年之久。這些肉制品解凍后模樣驚人，除了呈詭異的青綠色外，還有發(fā)霉腐敗跡象。類似案件此后繼續(xù)在德國(guó)出現(xiàn)。2007年。德國(guó)再次出現(xiàn)一起全國(guó)范圍的“黑心肉"丑聞，大約150噸腐爛過期的肉類由巴伐利亞州送入首都柏林一家生產(chǎn)土耳其烤肉的公司，經(jīng)加工后分銷到各地，Z終出現(xiàn)在8個(gè)州的快餐攤點(diǎn)，有些甚至出口到國(guó)外。除此之外，2007年2月，德國(guó)警方又在南部城市伊勒蒂森的一家冷凍廠發(fā)現(xiàn)數(shù)噸過期肉制品，它們來自意大利，準(zhǔn)備運(yùn)往法國(guó)和俄羅斯。德國(guó)媒體認(rèn)為，此類事件頻發(fā)除了與德國(guó)食品檢疫等執(zhí)法并不由ZY辦、而是屬于地方政府職責(zé)外，還與德國(guó)人節(jié)儉、愛買便宜貨的習(xí)慣有關(guān)。除了德國(guó)，美國(guó)、瑞典也發(fā)生過類似事件。來源【螞蟻搬家肉】當(dāng)在發(fā)達(dá)國(guó)家面對(duì)越來越嚴(yán)的監(jiān)管和審查之時(shí)，僵尸肉把目光瞄準(zhǔn)了發(fā)展ZG家，近年來肉制品消費(fèi)量顯著增加的ZG首當(dāng)其沖。在6月份的凍品走私專項(xiàng)查緝抓捕行動(dòng)中，據(jù)相關(guān)人員介紹，Z常見的走私路徑是：走私人員從境外以低價(jià)采購(gòu)貨品，用集裝箱發(fā)至香港，然后發(fā)往越南海防，在中越邊境的芒街拆解，雇傭邊民“螞蟻搬家式"將凍品運(yùn)到境內(nèi)。一個(gè)35噸的集裝箱凍品由幾十個(gè)邊民搬運(yùn)，一兩個(gè)小時(shí)就能搬完。這一走私途徑和“螞蟻搬家"的走私方式其實(shí)早就存在。新聞報(bào)道顯示，早在2004年，廣東等地的凍品走私活動(dòng)就呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。當(dāng)時(shí)，由于國(guó)家有關(guān)部門陸續(xù)決定暫停多個(gè)疫情發(fā)生國(guó)禽畜產(chǎn)品的進(jìn)口，導(dǎo)致大量此類產(chǎn)品積壓香港。隨著夏季來臨，香港冷凍租金日高，于是貨主們就不惜低價(jià)拋售尋找出路。加之廣東一帶雞爪、雞翼消費(fèi)量較大，限制進(jìn)口讓此類產(chǎn)品市場(chǎng)價(jià)陡升，一些不法分子在利益的驅(qū)使下，從香港經(jīng)海上走私凍品至廣東等地分銷，引發(fā)雞爪等凍品“走私潮"。而在2012年，廣西南寧市集中深埋銷毀250多噸走私凍品，相關(guān)負(fù)責(zé)人介紹，這些凍品來自美國(guó)、越南、巴西等國(guó)家，并從越南走私入境，走私分子以南寧作為中轉(zhuǎn)站，將這些凍品銷往我國(guó)部分省區(qū)。（記者王豐豐，編輯杜白羽，新華國(guó)際客戶端報(bào)道）成都華衡儀器有限公司食品安全檢測(cè)儀之病害肉速測(cè)儀病害肉速測(cè)儀產(chǎn)品概述病害肉速測(cè)儀適用于各類畜禽肉制品中病死豬肉、新鮮度等理化指標(biāo)的快速測(cè)定。該科研項(xiàng)目由福建省科技廳資助，已獲得國(guó)家發(fā)明ZL保護(hù)，并于2006年通過了福建省科技廳、福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局、廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局等單位的成果鑒定。病害肉速測(cè)儀應(yīng)用領(lǐng)域適用于畜牧業(yè)監(jiān)管部門、動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督部門、屠宰場(chǎng)以及相關(guān)流通企業(yè)對(duì)肉類質(zhì)量安全監(jiān)控病害肉速測(cè)儀檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)配：病害肉特征物、揮發(fā)性鹽基氮、組胺；選配：亞硝酸鹽、硼砂、吊白塊等病害肉速測(cè)儀適用樣品豬肉、牛肉、羊肉、雞肉、鴨肉等各類肉及肉制品病害肉速測(cè)儀性能特點(diǎn)檢測(cè)準(zhǔn)確：采用ZL檢測(cè)技術(shù)，檢出限能夠很好的滿足國(guó)標(biāo)《GB/T9959.2-2008》的要求，檢測(cè)結(jié)果具有良好的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。檢測(cè)快速：?jiǎn)雾?xiàng)測(cè)定時(shí)間只需20-30分鐘，即可得出定量結(jié)果，適用于現(xiàn)場(chǎng)快速監(jiān)測(cè)工作。操作簡(jiǎn)單：中文提示操作，操作簡(jiǎn)便、易學(xué)易會(huì)、快速掌握，無需專業(yè)知識(shí)背景即可操作。適用廣泛：檢測(cè)對(duì)象涵蓋急宰肉（病豬中、后期急宰），冷藏冷凍肉、病死豬肉等。現(xiàn)場(chǎng)操作：配置齊全、攜帶方便，無需復(fù)雜的前處理過程，檢測(cè)人員在現(xiàn)場(chǎng)即可準(zhǔn)確操作。聯(lián)系人：張經(jīng)理/田經(jīng)理028-6600911718140123177感興趣可來電，周末可來電18011534117咨詢[詳細(xì)]

  2018-10-13 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 運(yùn)用 LC-SPE-NMR 鑒定互隔交鏈孢霉的霉菌毒素，及其對(duì)黃

  運(yùn)用 LC-SPE-NMR 鑒定互隔交鏈孢霉的霉菌毒素，及其對(duì)黃[詳細(xì)]

  2014-02-09 00:00

  專利

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• 西安市自來水中鐵錳來源的分析

  西安市自來水中鐵錳來源的分析[詳細(xì)]

  2024-09-28 21:08

  課件

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• 海德漢Heidenhain有內(nèi)置軸承的旋轉(zhuǎn)編碼器選型手冊(cè)

  海德漢Heidenhain的ERN、ECN和EQN旋轉(zhuǎn)編碼器自帶軸承和安裝的定子聯(lián)軸器，具有安裝簡(jiǎn)單、總長(zhǎng)度短的特點(diǎn)。其應(yīng)用包括用于簡(jiǎn)單測(cè)量任務(wù)以及飼服驅(qū)動(dòng)的位置和轉(zhuǎn)速控制?？招妮S可以直接滑入并固定在被測(cè)軸上。海德漢Heidenhain的ROD、ROC和ROQ旋轉(zhuǎn)編碼器自帶軸承且具有密封結(jié)構(gòu)。這些編碼器均堅(jiān)固耐用、結(jié)構(gòu)緊湊。它通過一個(gè)分離聯(lián)軸器由轉(zhuǎn)子連接被測(cè)軸，聯(lián)軸器可以補(bǔ)償軸向運(yùn)動(dòng)和編碼器軸與被測(cè)軸的不同軸度。海德漢Heidenhain有內(nèi)置軸承的旋轉(zhuǎn)編碼器技術(shù)參數(shù)：[詳細(xì)]

  2018-11-15 10:02

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• 室內(nèi)空氣凈化的必要性及危害來源說明

  室內(nèi)空氣凈化的必要性及危害來源說明[詳細(xì)]

  2016-04-11 00:00

  專利

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• R866-917表面張力儀的特點(diǎn)及技術(shù)性能分析

  R866-917表面張力儀的特點(diǎn)及技術(shù)性能分析R866-917表面張力儀采用先進(jìn)的技術(shù)、穩(wěn)定的質(zhì)量、超高的性價(jià)比、完善的服務(wù)，特別適合工礦企業(yè)新品開發(fā)、質(zhì)量檢測(cè)以及大專院?？蒲?、教學(xué)使用。主要特征：1.鉑金板測(cè)試原理，操作簡(jiǎn)單方便；2.自動(dòng)數(shù)字化測(cè)量減少人為操作誤差；3.全量程清零：一鍵清零，瞬間完成，零位溫度無漂移；4.全量程自動(dòng)校正：數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性極好；5.顯示值即為試樣的表面張力值，無需再次計(jì)算；6.儀器結(jié)構(gòu)緊湊，獨(dú)立工作，無需任何附加設(shè)備（如外接電腦等）；7.能測(cè)量試樣的表面張力因時(shí)間不同而產(chǎn)生的變化（特別是有表面活性劑或含有揮發(fā)性物質(zhì)時(shí)）；8.自動(dòng)量測(cè)中、高粘度液體樣品并得到平衡結(jié)果；9.可測(cè)量不相混合液體之間界面張力如：油/水界面；10.可完全取代傳統(tǒng)機(jī)械式表面張力儀；11.本系列儀器除了手動(dòng)控制試樣平臺(tái)升降外，主要結(jié)構(gòu)和技術(shù)參數(shù)與QBZY系列相仿，具有高品質(zhì)設(shè)計(jì)、經(jīng)濟(jì)型價(jià)格，性價(jià)比特高主要技術(shù)參數(shù)：測(cè)試方式:白金板法操作方式：樣品臺(tái)手動(dòng)升降，自動(dòng)測(cè)量測(cè)試范圍:0－400mN/m靈敏度:0.01mN/m測(cè)量精度:±0.04mN/m（測(cè)試20℃時(shí)的2次蒸餾水，與文獻(xiàn)值的誤差）重復(fù)性:±0.04mN/m（測(cè)試20℃時(shí)的2次蒸餾水，與文獻(xiàn)值的誤差）數(shù)據(jù)顯示:LCD顯示屏溫度范圍：15～60℃（需選購(gòu)恒溫槽和恒溫池，標(biāo)配只能在室溫下測(cè)試）測(cè)量時(shí)間:測(cè)量低濃度樣品液需3－5秒容器常量:min.15Ml數(shù)據(jù)輸出:RS232C串口或選配USB數(shù)據(jù)接口電　　壓:市電AC220V,1A[詳細(xì)]

  2018-10-07 10:01

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 天平的計(jì)量性能分析及故障處理

  在現(xiàn)代社會(huì)對(duì)于天平在極ng確度方面的需求越老越高，為了能夠促進(jìn)天平綜性能的提升，就需要技術(shù)人員在使用天平的時(shí)候能夠掌握天平的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，能夠了解影響天平性能的影響因素，并能在此基礎(chǔ)上對(duì)充分的發(fā)揮出天平的性能。本文就天平在其計(jì)量性能以及相應(yīng)故障分析方面進(jìn)行了研究。[詳細(xì)]

  2018-11-22 17:22

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• 氣相色譜法分析野生菱角殼中多糖化合物

  氣相色譜法分析野生菱角殼中多糖化合物[詳細(xì)]

  2013-07-24 00:00

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 酵母雙雜交的實(shí)驗(yàn)步驟和技巧分析

  LexA酵母雙雜交系統(tǒng)簡(jiǎn)介一、LexA酵母雙雜交系統(tǒng)的設(shè)計(jì)原理報(bào)告質(zhì)粒p8op-LacZ的GAL4UAS編碼序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活劑的情況下，報(bào)告基因LacZ的轉(zhuǎn)錄活性為零，該基因的篩選標(biāo)志為URA3，可以作為有自主復(fù)制能力的質(zhì)粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因組DNA上。質(zhì)粒pLexA的篩選標(biāo)志為HIS3，在雙雜交系統(tǒng)中用于表達(dá)DNA-BD（202個(gè)氨基酸殘基組成的LexA蛋白）與目標(biāo)蛋白（釣餌，Bait）的融合蛋白，該融合體的表達(dá)受酵母強(qiáng)啟動(dòng)子ADH1的調(diào)控，選擇與報(bào)告基因的操縱子LexA×8結(jié)合。質(zhì)粒pB42AD的篩選標(biāo)志為TRP1，在其供外源基因插入的多克隆位點(diǎn)（EcoRI與XhoI）上游，含有SV40核定位（SV40nuclearlocalization）、HA（血凝素）及AD（來自于E.coli的88個(gè)氨基酸殘基組成的B42蛋白）等幾種編碼序列，共同組成可以啟動(dòng)報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的激活成份。在酵母EGY48的基因組中還整合有另一個(gè)報(bào)告基因Leu，它與LacZ報(bào)告基因具有相同的操縱子-LexA，但兩者啟動(dòng)子不同。根據(jù)雙雜交系統(tǒng)的原理，如果某一復(fù)合物同時(shí)具有DNA-BD和AD的活性，即可激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。分別將待測(cè)蛋白X、Y的編碼序列插入pLexA質(zhì)粒載體和pB42AD質(zhì)粒載體的多克隆位點(diǎn)中，然后共同轉(zhuǎn)入含有報(bào)告基因的酵母菌株，如果蛋白X與Y能相互作用，則啟動(dòng)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，通過檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)情況，就可以間接反映蛋白X、Y是否具有相互作用以及作用的強(qiáng)弱。如果將蛋白Y換為取自組織或血液的cDNA文庫(kù)，則可用X從該文庫(kù)中篩選出能與其相互作用的蛋白，并且可以獲得編碼這些蛋白的cDNA。二、商品化酵母雙雜交系統(tǒng)的組成1.載體質(zhì)粒：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ、pB42AD-DNA文庫(kù)2.酵母菌株：EGY48、EGY48（p8op-LacZ）、YM4271（EGY48的伴侶菌株）3.大腸桿菌菌株：E.coliKC8株4.對(duì)照質(zhì)粒：質(zhì)粒用途pLexA-53，pB42AD-T陽性對(duì)照pLexA-Pos（LexA/GAL4AD融合蛋白〕陽性對(duì)照pLexA-Lam（LaminC蛋白少與其它蛋白相互作用）假陽性檢測(cè)質(zhì)粒5.引物：pLexA測(cè)序引物及pB42AD測(cè)序引物。三、酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)的基本流程1.將報(bào)告基因p8op-LacZ轉(zhuǎn)化酵母EGY48菌株，用培養(yǎng)基SD/-Ura篩選。2.同時(shí)構(gòu)建或擴(kuò)增DNA文庫(kù)，并純化足夠的質(zhì)粒以轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。3.構(gòu)建DNA-BD/靶蛋白質(zhì)粒pLexA-X，作為釣餌（bait）。4.將上述釣餌質(zhì)粒pLexA-X轉(zhuǎn)化EGY48（p8op-LacZ）細(xì)胞株，用SD/-His/-Ura篩選;并用固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基SD/Gal/Raf/-His/-Ura檢測(cè)此DNA-BD/靶蛋白是否具有直接激活報(bào)告基因的活性，以及對(duì)酵母細(xì)胞是否具有殺傷毒性。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒選擇培養(yǎng)基克隆生長(zhǎng)情況說明（含有Gal/Raf）pLexA-PosSD/-His，-Ura藍(lán)陽性對(duì)照pLexASD/-His，-Ura白陰性對(duì)照PlexA-XSD/-His，-Ura白沒有直接激活活性PlexA-XSD/-His，-Ura藍(lán)具有直接激活活性PlexA-XSD/-His，-Ura菌落不能生長(zhǎng)酵母細(xì)胞毒性4-1.如果pLexA-X-半乳糖苷酶的信號(hào)作用。b能夠自動(dòng)激活報(bào)告基因，則設(shè)法去除其激活活性部位、或者將LacZ報(bào)告基因整合入基因組，減少4-2.如果pLexA-X雖然不會(huì)自動(dòng)激活報(bào)告基因，但對(duì)酵母宿主細(xì)胞有毒性，則需要與純化的文庫(kù)DNA同時(shí)轉(zhuǎn)化酵母。5.如果pLexA-X既不會(huì)自動(dòng)激活報(bào)告基因，也不具有毒性，則可以與純化的文庫(kù)DNA同時(shí)、或順序轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞，并檢測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒SD固體培養(yǎng)基LacZ表型對(duì)照1pLexA-PosGal/Raf/-His/-Ura藍(lán)對(duì)照2pLexA-53Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu藍(lán)+pB42AD-T實(shí)驗(yàn)pLexA-XGal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu待測(cè)+pB42AD-文庫(kù)5-1.用SD/-His/-Trp/-Ura培養(yǎng)基選擇陽性共轉(zhuǎn)化子，并擴(kuò)增，使宿主細(xì)胞中的質(zhì)粒在誘導(dǎo)前達(dá)到Zda拷貝數(shù)。-半乳糖苷酶無表達(dá)。b5-2.上述重組子轉(zhuǎn)至含X-gal的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基SD/Gal/Raf/-His/-Trp/-Ura/-Leu，觀察LacZ及Leu報(bào)告基因的表達(dá)情形，藍(lán)色克隆即為陽性。白色克隆為假陽性，說明Leu雖有表達(dá)，但5-3.同時(shí)用LacZ、Leu兩個(gè)報(bào)告基因的目的，是為了盡可能消除實(shí)驗(yàn)的假陽性誤差，譬如：AD融合蛋白不與目標(biāo)蛋白結(jié)合，而直接與啟動(dòng)子序列結(jié)合域結(jié)合等情況。由于2個(gè)報(bào)告基因的啟動(dòng)子不同，出現(xiàn)上述假陽性的幾率就大大減少了。5-4.將藍(lán)色陽性克隆進(jìn)行1次以上的劃種，盡可能分離克隆中的多種文庫(kù)質(zhì)粒。6.陽性克隆的篩選6-1.隨機(jī)選取50個(gè)陽性克隆，擴(kuò)增、抽提酵母質(zhì)粒，電轉(zhuǎn)化E.coliKC8宿主菌，抽提大腸桿菌中的質(zhì)粒，酶切鑒定是否具有插入片段及排除相同的文庫(kù)質(zhì)粒。6-2.如果重復(fù)的插入序列較多，可另取50個(gè)陽性克隆來分析。Z后得到數(shù)種片段大小不同的插入序列，再轉(zhuǎn)化新的宿主細(xì)胞，檢測(cè)是否仍為陽性克隆。7.用質(zhì)粒自然分選法（NaturalSegregation）篩除只含有AD-文庫(kù)雜合子的克隆7-1.將初步得到的陽性克隆接種SD/-Trp/-Ura液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)1-2天，含有HIS3編碼序列的BD-靶質(zhì)粒在含有外源His培養(yǎng)基中，將以10%-20%左右的頻率隨機(jī)丟失。C孵育2-3天?！?-2.將上述克隆，轉(zhuǎn)鋪固體培養(yǎng)基SD/-Trp/-Ura，307-3.再挑取生長(zhǎng)的單克隆，轉(zhuǎn)入SD/-Trp/-Ura和SD/-His/-Trp/-Ura培養(yǎng)基中，篩選His表型缺陷的克隆，即得到只含有AD-文庫(kù)雜合子的重組子。7-4.將His表型缺陷的克隆轉(zhuǎn)化固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基SD/Gal/Raf/-Trp/-Ura，以驗(yàn)證AD-文庫(kù)能否直接激活報(bào)告基因的表達(dá)，棄去陽性克隆，保留陰性克隆。8.酵母雜合試驗(yàn)（YeastMating）確定真陽性克隆如下表所示，在酵母EGY48及其對(duì)應(yīng)的YM4271宿主細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)入相應(yīng)的質(zhì)?；蛭膸?kù)DNA，通過雜合實(shí)驗(yàn)確篩選pLexA-靶DNA與pB42AD-文庫(kù)確實(shí)具有相互作用的真陽性克隆。質(zhì)粒1（inYM4271）質(zhì)粒2（inEGY48）LacZ表型Leu表型pLexApB42AD白不能生長(zhǎng)pLexA-靶DNApB42AD白不能生長(zhǎng)pLexApB42AD-文庫(kù)白不能生長(zhǎng)pLexA-靶DNApB42AD-文庫(kù)藍(lán)真陽性pLexA-LampB42AD-文庫(kù)白不能生長(zhǎng)9.陽性克隆的進(jìn)一步篩選和確證9-1.擴(kuò)增初步確定的陽性克隆，抽提酵母DNA。該DNA為混合成份，既含有酵母基因組DNA，也含有3種轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA。9-2.將上述DNA電轉(zhuǎn)化E.coliKC8宿主菌。由于在大腸桿菌中，具有不同復(fù)制起始調(diào)控序列的質(zhì)粒不相容;同時(shí)利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型篩選。因此，在M9/SD/-Trp培養(yǎng)基上，只有含有AD-文庫(kù)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌才能生長(zhǎng)，將其擴(kuò)增、并抽提質(zhì)粒DNA，酶切鑒定。9-3.用pLexA-靶DNA與pB42AD-庫(kù)DNA一一對(duì)應(yīng)、共轉(zhuǎn)化只含有報(bào)告基因的酵母菌EGY48中，先到SD/-His/-Trp/-Ura板擴(kuò)增，并與后面的誘導(dǎo)板形成對(duì)照，說明報(bào)告基因的表達(dá)與誘導(dǎo)AD融合蛋白的表達(dá)有關(guān)，再確證LacZ、Leu報(bào)告基因的表達(dá)。9-4.擴(kuò)增與靶DNA相互作用的文庫(kù)DNA，進(jìn)行序列分析及進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)、功能研究。10.對(duì)雙雜交系統(tǒng)陽性結(jié)果的進(jìn)一步研究10-1.用不同的雙雜交系統(tǒng)驗(yàn)證10-1-1.將載體pLexA與pB42AD互換后進(jìn)行雙雜交實(shí)驗(yàn)。10-1-2.選擇不同的雙雜交系統(tǒng)，如：以GAL4轉(zhuǎn)錄激活子為基礎(chǔ)的雙雜交系統(tǒng)。10-1-3.將文庫(kù)質(zhì)粒移碼突變后，再與靶質(zhì)粒作用，報(bào)告基因是否仍能被激活。-半乳糖苷酶水平，比較作用強(qiáng)度變化。b10-1-4.去除或突變特定結(jié)合位點(diǎn)，定量檢測(cè)10-2.用試劑盒提供的引物測(cè)定插入片段的DNA序列，證明其編碼區(qū)域。10-3.用其它的檢測(cè)方法，如：親和色譜法或免疫共沉淀法來證明雙雜交系統(tǒng)篩選的蛋白之間的具有相互作用。10-4.進(jìn)一步研究靶蛋白與篩選蛋白之間的功能關(guān)系構(gòu)建于AD載體的cDNA文庫(kù)的擴(kuò)增1.自-80℃冰箱取出含有cDNA文庫(kù)的甘油菌，置于冰浴中緩慢化凍。2.用新鮮的LB培養(yǎng)液在1.5ml離心管中將上述甘油菌1:106和1:108稀釋。lml加入90m3.取稀釋菌液各1090mm）;37℃倒置培養(yǎng)過夜或30℃培養(yǎng)24-36hr，計(jì)數(shù)平板上單克隆菌落數(shù)。fLB培養(yǎng)液在1.5ml離心管中振蕩混勻，涂布LB/Amp平板（4.確定待擴(kuò)增的cDNA文庫(kù)滴度（cfu/ml）=克隆數(shù)×108（1:106稀釋）或克隆數(shù)×1010（1:108稀釋）。5.按照>150mm），共100塊;37℃倒置培養(yǎng)過夜。f2-4×104cfu/平板的濃度，涂布LB/Amp平板（6.在超凈工作臺(tái)上，在所有生長(zhǎng)菌落的平板上加適量LB培養(yǎng)液，將菌落刮下，轉(zhuǎn)入2000mlLB/Amp培養(yǎng)液中，37℃振蕩培養(yǎng)2-4hr。7.留取適量培養(yǎng)菌液以50%無菌甘油稀釋至25%終濃度，分裝，保存于-80℃。8.其余培養(yǎng)菌液離心8000xg×10min，4℃收集細(xì)菌;用質(zhì)粒DNA純化試劑盒大量抽提質(zhì)粒DNA。LB液體培養(yǎng)基，121℃，15lb/in2滅菌15minA.bacto-Tryptone10.0gB.bacto-YeastExtract5.0gC.NaCl10.0gD.ddH2O→1000ml*LB固體培養(yǎng)平板為含有1.5%瓊脂（Agar）LB培養(yǎng)基。**LB/Amp培養(yǎng)基為含有Ampg/ml的LB培養(yǎng)基。m50-100構(gòu)建于AD載體的cDNA文庫(kù)的純化1.質(zhì)粒DNA提取緩沖液名稱緩沖液配方g/mlRNasemP1懸浮緩沖液50mMTris-HCl（pH8.0）;10mMEDTA;100AP2裂解緩沖液200mMNaOH;1%SDSP3中和緩沖液3.0MKac（pH5.5）QBT平衡緩沖液750mMNaCl;50mMMOPS（pH7.0）;15%異丙醇;0.15%TritonX-100QC洗滌緩沖液1.0MNaCl;50mMMOPS（pH7.0）;15%異丙醇QF洗脫緩沖液1.25MNaCl;50mMTris-HCl（pH8.5）;15%異丙醇2.培養(yǎng)菌液離心6000xg×10min，4℃，每500ml培養(yǎng)物（下同）的沉淀重懸于50mlP1緩沖液。3.加入50mlP2緩沖液，倒置4-6次混勻，室溫孵育5min。4.加入4℃預(yù)冷的50mlP3緩沖液，快速倒置4-6次混勻，冰浴30min（其間再倒置混勻4-6次）。5.將上述混合液再倒置混勻，離心12000xg×30min，4℃，保留上清。6.上清再離心12000xg×15min，4℃，留上清。7.將上清液上樣于經(jīng)35mlQBT緩沖液平衡的QIAGEN-tip層析柱。8.以100mlQC緩沖液洗滌層析柱2次。9.以35mlQF緩沖液洗脫吸附于層析柱上的DNA。10.以0.7倍體積異丙醇沉淀DNA，離心12500xg×30min，4℃，小心去除上清。11.以7ml70%乙醇洗滌沉淀DNA，離心12500xg×10min，4℃，小心去除上清。12.將沉淀的質(zhì)粒DNA溶于5mlTE（pH8.0）緩沖液，轉(zhuǎn)移至新的無菌離心管中，用2.5倍體積無水乙醇;1/10體積3.0MNaAc（pH5.2），于-20℃靜置過夜。13.離心12500xg×20min，4℃，去除上清，沉淀用70%乙醇洗滌，超凈臺(tái)風(fēng)干。l），保存于-20℃。mg/管（用于1次轉(zhuǎn)化反應(yīng)，約40m14.干燥的DNA溶于適量體積TE，定量，分裝100-200構(gòu)建于DNA-BD載體的目的DNA轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞1.將酵母菌EGY48（p8op-lacZ）接種于5.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，緩振打散菌落，然后轉(zhuǎn)入95.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Trp5.0mlG.ddH2O→100.0ml2.將上述新鮮培養(yǎng)菌液接種于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（約50ml），30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.4-0.5（約3hr）。YPD液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml3.室溫離心5000xg×5min，棄上清;加入15-25mlddH2O重懸洗滌沉淀酵母細(xì)胞，離心棄上清，沉淀用1×TE/LiAc重懸后，即為酵母感受態(tài)細(xì)胞。4.準(zhǔn)備下列試劑2×轉(zhuǎn)化反應(yīng)10×TE10×LiAc50%PEGddH2Olml/120ml15mA.1×TE/LiAc0.15ml15l/ml960ml120mB.PEG/LiAc1.20ml120lml//900mC.1×TE1.00ml1005.分裝待轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA，振蕩混勻。lmg）3-5mA.pLexA-X（0.1B.10mg/mllmSpermDNA*（0.1mg）10*新配制時(shí)水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。l用1×TE/LiAc重懸的酵母感受態(tài)細(xì)胞，振蕩混勻。m6.每管加入100lm7.各加入600PEG/LiAc，振蕩混勻，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)30min。lm8.各加入70DMSO緩和倒置混勻。42℃熱休克15min，迅速插入冰浴。9.室溫離心13000xg×10sec，盡量棄上清;以0.3ml1×TE重懸沉淀細(xì)胞，涂布SD/-Ura，-His固體培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。SD/-Ura，-His固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15min稍冷卻后鋪板A.DifcoNitrogen1.34gB.葡萄糖4.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）20.0mlD.20×Leu10.0mlE.20×Trp10.0mlF.Agar4.00gG.ddH2O90-100mm）f→200.0ml鋪8-10塊平板（附表1.不同規(guī)模轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞SmallScale*LargeScaleLibraryScale轉(zhuǎn)化反應(yīng)2011（1）SD液體培養(yǎng)基擴(kuò)增酵母菌100ml100ml300ml（2）YPD液體培養(yǎng)基擴(kuò)增酵母菌300mla300mla1000mla（3）TE或ddH2O洗滌酵母細(xì)胞15mlc25-50mlb500mla（4）準(zhǔn)備A.1×TE/LiAc緩沖液1.5mld1.0mld8.0mlcB.PEG/LiAc緩沖液12.0mlc6.0mlc100.0mlbC.1×TE緩沖液6.0mlc10.0mlc10.0mlc（5）分裝A.DNA-BDvectorgd×20/0.2-1.0mgcm0.1gd0.1-0.5mgmg×2010-50mB.ADvector0.1C.l2.0mlml×20200mSpermDNA（10mg/ml）101×TE/LiAc重懸感受態(tài)細(xì)胞1.5mlc1.0mlc8.0mlbl×201.0ml8.0mlm酵母感受態(tài)細(xì)胞100（7）PEG/LiAc緩沖液0.6ml×206.0ml60.0mll7.0mlml×20700mDMSO70（9）室溫離心后棄上清13000xg×10sec2000xg×5min2000xg×5min（10）1×TE重懸感受態(tài)細(xì)胞0.3ml×206.0ml10.0ml150mm×50f150mm×30f90mm×20f鋪固體選擇培養(yǎng)基平板注:*即為“構(gòu)建于DNA-BD載體的目的DNA轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞”**在不同容積的無菌離心管中進(jìn)行，a:300或500ml;b:50ml;c:15ml;d:1.5ml文庫(kù)cDNA轉(zhuǎn)化含有DNA-BD載體的酵母感受態(tài)細(xì)胞1.以生長(zhǎng)于SD/-Ura，-His固體培養(yǎng)板上的含有構(gòu)建于DNA-BD載體的目的DNA及報(bào)告基因（p8op-lacZ）的酵母菌EGY48作為宿主菌，制備酵母感受態(tài)細(xì)胞。2.將酵母宿主菌接種于5.0mlSD/-Ura，-His液體培養(yǎng)基中，緩振打散菌落，然后轉(zhuǎn)入95.0mlSD/-Ura，-His液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura，-His液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×Leu5.0mlE.20×Trp5.0mlF.ddH2O→100.0ml3.將上述新鮮培養(yǎng)菌液接種于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（約50ml），30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.4-0.5（約3hr）。YPD液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml4.室溫離心5000xg×5min，棄上清;加入15-25mlddH2O重懸洗滌沉淀酵母細(xì)胞，離心棄上清，沉淀用1×TE/LiAc重懸后，即為酵母感受態(tài)細(xì)胞。5.準(zhǔn)備下列試劑1×轉(zhuǎn)化反應(yīng)10×TE10×LiAc50%PEGddH2Olml/800ml100mA.1×TE/LiAc1.0ml100l4.8ml/ml600mB.PEG/LiAc6.0ml600C.1×TE10.0ml1.0ml//9.0ml6.取1.0ml用1×TE/LiAc重懸的酵母感受態(tài)細(xì)胞，加入下列成份，振蕩混勻。lmg）40mA.pB42AD-Library（50-100B.10mg/mllmHerringDNA*（2.0mg）200*新配制時(shí)水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。7.加入6.0mlPEG/LiAc，振蕩混勻，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)30min。lm8.加入700DMSO緩和倒置混勻。42℃熱休克15min，迅速插入冰浴。9.室溫離心2000xg×5min，盡量棄上清。10.以6.0ml100mm，每稀釋度各×2），30℃倒置培養(yǎng)3-5天，確定轉(zhuǎn)化效率在2×106cfu以上有效。fl稀釋不同倍數(shù)，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板（m1×TE重懸沉淀細(xì)胞，取10150mm×30），30℃倒置培養(yǎng)3-5天。fl涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板（m11.按每板200SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15min稍冷卻后鋪板A.DifcoNitrogen13.40gB.葡萄糖40.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）200.0mlD.20×Leu100.0mlE.Agar40.00gF.ddH2O150mm）f→2000.0ml鋪30塊平板（12.在超凈工作臺(tái)上，在所有生長(zhǎng)菌落的平板上各加5mlTE（pH7.0）緩沖液，將菌落刮下。13.離心棄上清，加入10-20mlTE緩沖液重懸沉淀菌，加入等體積的無菌65%甘油-MgSO4緩沖液，混勻，分裝1.0ml/管，保存于4℃1周或-80℃1年以上。65%甘油-MgSO4緩沖液:65%甘油;100mMMgSO4;25mMTris-HCl（pH8.0）A.甘油65.00mlB.MgSO47H2O2.465gC.2.0MTris-HCl（pH8.0）1.25mlD.ddH2O→100.00ml酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的篩選1.經(jīng)過選擇培養(yǎng)基篩選的含有DNA-BD載體、文庫(kù)DNA及報(bào)告基因的酵母感受態(tài)細(xì)胞，用無菌TE稀釋至1:104、1:106和1:108等不同濃度。90mm），30℃倒置培養(yǎng)3-5天，計(jì)數(shù)平板上單克隆菌落數(shù)。fl，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板（m2.取上述稀釋菌液各1003.確定待進(jìn)一步鑒定的酵母菌滴度（cfu/ml）=克隆數(shù)×105（1:104稀釋）、克隆數(shù)×107（1:106稀釋）或克隆數(shù)×109（1:108稀釋）。4.按照以前實(shí)驗(yàn)確定的文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率的5-10倍的總量、0.5-2×106cfu/平板的菌量，涂布SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導(dǎo)培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。5.挑取顯藍(lán)色的菌落，再接種于SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)基以及SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以進(jìn)一步確證。SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基A.SD/Gal/Raf3.79gB.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlC.Agar2.00gD.ddH2O→85.0ml滅菌（115℃，10lb/in2）15min，冷卻至50℃，加入下列成份后鋪板E.10×BU10.0mlF.20mg/mlX-gal0.4ml90-100mm）f鋪5-6塊平板（10×BU緩沖液，121℃，15lb/in2滅菌15minA.Na2HPO412H2O9.30gB.NaH2PO42H2O3.90gC.ddH2O→100.0ml20mg/mlX-GalA.X-Gal40mgB.DMF2ml酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的鑒定-酵母質(zhì)粒DNA的提取1.挑取經(jīng)過酵母選擇/誘導(dǎo)培養(yǎng)基初步鑒定的酵母單菌落，接種于5.0-10.0mlSD/-Trp液體培養(yǎng)基，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)20hr。SD/-Trp液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Ura5.0mlG.ddH2O→100.0ml2.室溫離心5000xg×1min，棄上清，收菌。l酵母裂解液，振蕩重懸沉淀酵母菌。m3.加入200酵母裂解液:2%TritonX-100;1%SDS;100mMNaCl;10mMTris-HCl（pH8.0）;1mMEDTAA.10%TritonX-10020.0mlB.10%SDS10.0mlC.NaCl0.58gD.Tris0.12gE.EDTANa22H2O0.04gF.1.0MHCl調(diào)pH8.0G.ddH2O→100.0ml4.加入下列試劑，充分振蕩5min;液氮凍存10min，室溫復(fù)融;再充分振蕩5min。A.經(jīng)酸處理的玻璃珠（Sigma）0.20gB.苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）0.2ml5.室溫離心12000xg×10min，將上清轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管中，加入下列試劑，于-70℃凍存30-60min。A.3MNaAc（1/10lmV）20lmB.無水乙醇（2.5V）5006.離心12500xg×10min，4℃，棄上清;70%乙醇洗滌沉淀，于37℃烘箱或超凈臺(tái)干燥DNA;將干燥的沉淀DNA重溶于l無菌ddH2O中，保存于-20℃。m20-30酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的鑒定-酵母質(zhì)粒DNA電轉(zhuǎn)化大腸桿菌1.在冰浴條件下，取待轉(zhuǎn)化DNAl感受態(tài)細(xì)胞中，混勻。mg），加入100ml（5pg-0.5m1.0WF，200m2.將上述混合液加入間距0.1cm的樣品杯中，電轉(zhuǎn)化（1.8kV，25。3.迅速加入1ml新鮮的LB培養(yǎng)液，混勻，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中，37℃恒溫，150rpm振蕩孵育30-60min。4.將上述轉(zhuǎn)化反應(yīng)液涂布M9/DO（-Trp）固體培養(yǎng)板，37℃倒置培養(yǎng)至單菌落出現(xiàn)（16-22hr）。5.按常規(guī)方法擴(kuò)增上述陽性轉(zhuǎn)化菌，堿裂解法少量抽提質(zhì)粒DNA，酶切篩選AD載體上含有插入片段的陽性克隆，保存其于25%甘油，待進(jìn)一步驗(yàn)證。M9/DO-Trp固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.葡萄糖1.2gB.Agar6.0gC.5×M9緩沖液60mlD.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）30mlE.20×His15mlF.20×Leu15mlG.20×Ura15mlH.ddH2O165ml冷卻至50℃左右，加入下列成份，混勻鋪板I.1.0MThiamine-HCl（Vit.B1）0.3mlJ.100mg/mlAmp0.3ml90-100mm）f鋪10-15塊平板（大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備（電轉(zhuǎn)化）1.挑取LB固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的E.coliKC8單菌落，接種于5mlLB液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)過夜（約12-14hr）。2.將2.5ml新鮮菌液接種于500mlSOB培養(yǎng)液中，37℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.5-0.6（約2.5-3hr）。SOB液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.bacto-Tryptone10.00gB.bacto-YeastExtract2.50gC.NaCl0.25gD.KCl0.09gE.MgCl26H2O1.02gF.ddH2O→500.0ml3.將培養(yǎng)菌液收集于離心管中，冰水浴15-20min。4.離心6000xg×10min，4℃，棄盡上清;以5ml預(yù)冷的無菌ddH2O重懸沉淀菌;再加入500ml預(yù)冷的無菌ddH2O洗滌細(xì)菌。5.重復(fù)上述步驟1次，以充分去除培養(yǎng)基中殘余的鹽離子成份。6.用40-50ml預(yù)冷的無菌10%甘油重懸沉淀細(xì)菌，轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中;離心6000xg×10min，4℃，棄盡上清;重復(fù)此步驟1次。7.以等體積（約1.5-2.0ml）預(yù)冷的無菌10%甘油重懸上述沉淀的感受態(tài)細(xì)胞，分裝0.5ml/管（5-6次轉(zhuǎn)化反應(yīng)），保存于-80℃?zhèn)溆?。酵母雙雜合系統(tǒng)陽性克隆的確證1.以含有報(bào)告基因（p8op-lacZ）的酵母菌EGY48作為轉(zhuǎn)化宿主菌。2.將酵母宿主菌接種于5.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，緩振打散菌落，然后轉(zhuǎn)入95.0mlSD/-Ura液體培養(yǎng)基中，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)16-18hr，至OD600>1.0。SD/-Ura液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.DifcoNitrogen0.67gB.葡萄糖2.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlD.20×His5.0mlE.20×Leu5.0mlF.20×Trp5.0mlG.ddH2O→100.0ml3.將上述新鮮培養(yǎng)菌液接種于300mlYPD，至OD600=0.2-0.3（約50ml），30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.4-0.5（約3hr）。YPD液體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15minA.Polypepton6.0gB.bacto-YeastExtract3.0gC.葡萄糖6.0gD.ddH2O→300ml4.室溫離心5000xg×5min，棄上清;加入15-25mlddH2O重懸洗滌沉淀酵母細(xì)胞，離心棄上清，沉淀用1×TE/LiAc重懸后，即為酵母感受態(tài)細(xì)胞。5.準(zhǔn)備下列試劑20×轉(zhuǎn)化反應(yīng)10×TE10×LiAc50%PEGddH2Ol/1.2mlml150mA.1×TE/LiAc1.5ml150B.PEG/LiAc12.0ml1.2ml1.2ml9.6ml/C.1×TE10.0ml1.0ml//9.0ml6.分裝待轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA。A.pLexAlmg）3-5morpLexA-X（0.1lmg）3-5mB.pB42AD-Y（0.1C.10mg/mlSpermlmDNA*（0.1mg）10*新配制時(shí)水浴煮沸20min后，插入冰浴，保存于-20℃。l用1×TE/LiAc重懸的酵母感受態(tài)細(xì)胞，振蕩混勻。m7.每管加入100lm8.各加入600PEG/LiAc，振蕩混勻，30℃恒溫，250rpm振蕩培養(yǎng)30min。lm9.各加入70DMSO緩和倒置混勻。42℃熱休克15min，迅速插入冰浴。10.室溫離心13000xg×10sec，盡量棄上清;以0.3ml1×TE重懸沉淀細(xì)胞，涂布SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。SD/-Ura，-His，-Trp固體培養(yǎng)基，115℃，10lb/in2滅菌15min稍冷卻后鋪板A.DifcoNitrogen3.35gB.葡萄糖10.00gC.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）50.0mlD.20×Leu25.0mlE.Agar10.00gF.ddH2O→500.0ml90-100mm）f鋪20-25塊平板（11.挑取上述固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的含有目的DNA（X）的pLexA-X（+）或空載pLexA（-）單菌落，分別接種SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導(dǎo)培養(yǎng)板，30℃倒置培養(yǎng)3-5天。SD/Gal/Raf/-Ura，-His，-Trp，-Leu固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基A.SD/Gal/Raf3.79gB.10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）10.0mlC.Agar2.00gD.ddH2O→85.0ml滅菌（115℃，10lb/in2）15min，冷卻至50℃，加入下列成份后鋪板E.10×BU10.0mlF.20mg/mlX-gal0.4ml90-100mm）f鋪5-6塊平板（12.選擇含有pLexA-X顯藍(lán)色，而相應(yīng)的不含有插入DNA的空載pLexA顯白色的克隆，擴(kuò)增其在E.coliKC8中的甘油菌，按常規(guī)抽提質(zhì)粒DNA，進(jìn)行序列分析。10×DO（-His，-Trp，-Leu，-Ura）為不含His，Trp，Leu，Ura等成份的10×Dropout溶液。每1000ml溶液中含有下列成份，用ddH2O配制后保存于4℃。（1）L-IsoleucineL-異亮氨酸300mg（2）L-ValineL-纈氨酸1500mg（3）Adenine腺嘌呤200mg（4）L-ArginineHClL-精氨酸200mg（5）L-LysineHClL-賴氨酸鹽酸鹽300mgL-MethionineL-甲硫氨酸200mg（7）L-PhenylalanineL-苯丙氨酸500mgL-ThreonineL-蘇氨酸2000mg（9）L-TyrosineL-酪氨酸300mg20×氨基酸儲(chǔ)存液每100ml溶液中分別含有下列成份，配制后保存于4℃。20×HisL-HistidineL-組氨酸40mg20×TrpL-TryptophanL-色氨酸40mg20×LeuL-LeucineL-白氨酸200mg20×UraUracil尿嘧啶40mg酵母轉(zhuǎn)化緩沖液:緩沖液體積緩沖液配制10×TE100mlTris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O80ml;鹽酸調(diào)pH7.5;ddH2O定容10×LiAc100mlLiAc2H2O10.20g;ddH2O50ml，冰醋酸調(diào)pH7.5;ddH2O定容50%PEG100mlPEG335050.0g;ddH2O定容其它緩沖液:緩沖液體積緩沖液配制TE1000mlTris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O800ml;鹽酸調(diào)pH;ddH2O定容STE1000mlNaCl5.84g;Tris1.21g;EDTANa22H2O0.37g;ddH2O800ml;鹽酸調(diào)pH8.0;ddH2O定容[詳細(xì)]

  2018-10-12 10:00

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• 特殊組織DNA的提取及鑒定

  特殊組織DNA的提取及鑒定[詳細(xì)]

  2015-08-27 00:00

  其它

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• HEIDENHAIN海德漢長(zhǎng)度計(jì)在度量行業(yè)有廣泛的應(yīng)用

  HEIDENHAIN海德漢長(zhǎng)度計(jì)長(zhǎng)度計(jì)海德漢的增量式長(zhǎng)度計(jì)能在一個(gè)長(zhǎng)的測(cè)量范圍內(nèi)提供很高的精度。這些堅(jiān)固耐用的長(zhǎng)度計(jì)根據(jù)不同的應(yīng)用有不同的產(chǎn)品類型。他們?cè)诙攘啃袠I(yè)有廣泛的應(yīng)用，多點(diǎn)測(cè)量站、測(cè)試設(shè)備檢測(cè)和位置測(cè)量裝置。選擇海德漢公司的長(zhǎng)度計(jì)的理由。測(cè)量范圍大海德漢公司的長(zhǎng)度計(jì)測(cè)量范圍有12mm、25mm、30mm、60mm或100mm多種選擇，因此其一臺(tái)測(cè)量設(shè)備可以測(cè)量非常不同的零件，避免頻繁地更換價(jià)格昂貴的量塊或模板。高精度海德漢公司的長(zhǎng)度計(jì)所具有的高精度還體現(xiàn)它的全量程上。無論是測(cè)量10mm還是100mm的零件，其實(shí)際尺寸的測(cè)量精度是完全一樣的。海德漢公司的長(zhǎng)度計(jì)具有高重復(fù)性特點(diǎn)，可用于比較測(cè)量，例如用于大批量生產(chǎn)。堅(jiān)固耐用海德漢公司的長(zhǎng)度計(jì)是為工業(yè)環(huán)境而制造的。它具有長(zhǎng)期始終如一的高精度和出色的溫度穩(wěn)定性。所以，可以廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)設(shè)備和機(jī)床中。[詳細(xì)]

  2018-11-07 14:16

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 海德漢編程原理及技巧

  德國(guó)海德漢編碼器概述：海德漢是在49個(gè)國(guó)家都有分支機(jī)構(gòu)、公司，可以說是高質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)，海德漢是記錄通過認(rèn)證，在ISO9001品質(zhì)系統(tǒng)模型和授權(quán)作為德國(guó)校準(zhǔn)服務(wù)（dkd）檢查站為單位的長(zhǎng)度和角度。只要產(chǎn)品的使用壽命和可循環(huán)再造的設(shè)計(jì)上，一方面謹(jǐn)慎使用資源和優(yōu)化能源消費(fèi)對(duì)其他先決條件的環(huán)境宣言，在遵守ISO14001系列標(biāo)準(zhǔn)。海德漢研制生產(chǎn)光柵尺、角度編碼器、旋轉(zhuǎn)編碼器、數(shù)顯裝置和數(shù)控系統(tǒng)。海德漢公司的產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于機(jī)床、自動(dòng)化機(jī)器，尤其是半導(dǎo)體和電子制造業(yè)等領(lǐng)域。德國(guó)海德漢編碼器型號(hào)系列：610系列632系列674系列,675系列,684系列,685系列，510系列312系列,560系列,562系列，540系列,541系列525系列，310系列,320系列ERN1381.001-2048ID:313453-06,313453-02ERN1381.020-2048ID:385489-06ERN1381-2048ID:385489-56ERN1381.040-2048ID:608290-01ERN1381.062-2048ID:385489-08,385489-07ERN1387.001-2048ID:312215-14ERN1387.001-2048ID:312215-02,312215-66ERN1387-2048ID:373787-N6ERN1387.02-2048ID:385487-01ERN1387.020-2048ID:385487-03ERN1185.003-2048ID:316278-58ROD320.020-1000ID:538723-05ROD320.005-1000ID:291843-04ROD320.020-2000ID:291843-06R0D320.005-2500ID:291843-01ROD320.001ROD320.002ID:254847-05ROD320.005ROD320.007ROD323ROD436ROD323.001-1024ID:237974-01ROD323.031-1024ID:377101-5RRON350-2048ID:254426-04ROD431.001-2048ID:317393-03ROD431-1024,ID:317393-52ROD431.001-1024ID:309288-01,ROD431.020-1024ID:538727-02ROD431-1024317393-02,317393-52,538727-52ROD320.005-2500ID:291843-01ROD320-2500,ID:538723-01ERN1381.020-2048ID:385489-06EQN1125.030EQN1325.020-2048ID:538234-01EQN1325ID:312214-53EQN1325.001-2048ID:312214-16EQN1325-2048ID:538234-51EQN1325-2048ID:515385-01EQN1325.048-2048ID:655251-01EQN425ID:312214-16ERN1331-1024ID:538727-55ERN1331-1024ID:538727-53,538727-52ERN1331-2048ID:538727-56ERN1331.051-1024ID:317393-05ERN1331.051-1024ID:317393-55ERN1331.061-1024ID:538727-05ERN1331.052-1024ERN1331.062-2048ID538727-56ERN1331.051-1024ID:375272-02ERN1381-2048ERN1387-2048ROD431-1024ROD320-2500/5000/2000ROD430-5000376834-3SERN1331-1024ID:538727-55ERN1331-2048ERN1331.051-1024,ID:317393-05ERN1331.051-1024,ID:317393-55ERN1331.061-1024,ID:538727-05ERN1331.052-1024ERN1331.062-2048ID538727-56ERN1331-1024,ID:538727-52ERN1331.051-1024ID:375272-02ROD431.001-2048ID:317393-03ROD431-1024ID:317393-52ROD431.001-1024ID:309288-01,ROD431.020-1024ID:538727-02ROD430ROD430.030威斯特（上海）傳感器儀表有限公司本公司以“優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，優(yōu)質(zhì)服務(wù)，以客為先"的宗旨，為客戶提供原裝正廠的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，以合理的性價(jià)比，快捷的交貨期，熱情周到的服務(wù)，為客戶提供高品質(zhì)、經(jīng)濟(jì)耐用、品種齊全的產(chǎn)品，從而贏得客戶的一致贊賞我們將不負(fù)客戶對(duì)本公司的期望和厚愛，努力為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的售后服務(wù)，努力成為Zyou秀的自動(dòng)化設(shè)備供應(yīng)商。本公司所有產(chǎn)品空運(yùn)到達(dá)ZG！貨期穩(wěn)定！假一賠十!歡迎廣大客戶咨詢！我們竭誠(chéng)為您服務(wù)！[詳細(xì)]

  2018-11-05 10:00

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• 節(jié)能馬弗爐的來源

  節(jié)能馬弗爐的來源馬弗爐是英文Mufflefurnace翻譯過來的。Muffle是包裹的意思，furnace是爐子，熔爐的意思。節(jié)能馬弗爐在生活中的范圍越來越廣泛，在ZG的通用叫法有以下幾種：電爐、電阻爐、茂福爐、馬福爐。馬弗爐是一種通用的加熱設(shè)備.依據(jù)外觀形狀可分為箱式爐管式爐坩堝爐。馬弗爐按國(guó)籍分有國(guó)產(chǎn)馬弗爐和進(jìn)口馬弗爐。應(yīng)用范圍：（1）醫(yī)藥行業(yè)：用于藥品的檢驗(yàn)、醫(yī)學(xué)樣品的預(yù)處理等。（2）熱加工、水泥、建材行業(yè),進(jìn)行小型工件的熱加工或處理。（3）煤質(zhì)分析：用于測(cè)定水分、灰份、揮發(fā)份、灰熔點(diǎn)分析、灰成分分析、元素分析。也可以作為通用灰化爐使用。（4）分析化學(xué)行業(yè)：作為水質(zhì)分析、環(huán)境分析等領(lǐng)域的樣品處理。也可以用來進(jìn)行石油及其分析。設(shè)備特點(diǎn)由于采用新型陶瓷纖維爐膛，保溫效果好，產(chǎn)品特點(diǎn)：爐體、智能控制器分體設(shè)計(jì)，美觀、大方，爐門采用側(cè)開門設(shè)計(jì)。采用兩側(cè)襯板式加熱元件，便于更換爐絲，采用進(jìn)口超高溫發(fā)熱體，抗氧化性能更加優(yōu)異，大大增加使用壽命。采用陶瓷纖維絕熱，大幅度的提高了升溫速度，并減少了熱能消耗，升溫快:1000C°爐型由100C°升溫至1000C°，小于30分鐘，1700C°爐型由100C°升溫至1700C°，小于90分鐘與傳統(tǒng)的馬弗爐相比重量減輕1/2,升溫速度提高1倍，重量輕:6升爐型僅重50公斤9升爐型僅重65公斤（總體重量）大大節(jié)約能源，壽命提高3.5倍；保溫效果好，爐外表溫度低，升溫至1000C°，并保持1小時(shí)后外殼表面不燙手，避免燙傷。（約45-55C°根據(jù)使用環(huán)境定）采用進(jìn)口溫控儀表，全新數(shù)字顯示，數(shù)字設(shè)定溫度，智能控制輸出，可減少視讀和人為操作誤差，大大提高工作效率。設(shè)有多種保護(hù)裝置，提高了安全性及可靠性獨(dú)立控制系統(tǒng)，方便維修更換爐體上開有排氣孔（可根據(jù)用戶要求增設(shè)氣體保護(hù)進(jìn)、排氣空）效率高:作實(shí)驗(yàn)爐用時(shí)，可開進(jìn)出風(fēng)孔，加煙筒，有利于補(bǔ)進(jìn)新鮮氧氣，加速試驗(yàn)?？筛鶕?jù)用戶需要定做其他規(guī)格產(chǎn)品.各種非標(biāo)管式爐、井式爐、箱式爐。上海凱朗儀器設(shè)備廠專業(yè)生產(chǎn)鼓風(fēng)干燥箱、真空干燥箱、馬弗爐、生化培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、試驗(yàn)箱、恒溫?fù)u床、水槽、水浴鍋等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。咨詢電話：021-57180039[詳細(xì)]

  2018-10-01 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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