本文由 研域（上海）化學(xué)試劑有限公司 整理匯編

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• ELISA技術(shù)測(cè)定單克隆抗體效價(jià)方法

  1.深入了解ELISA法測(cè)定抗體效價(jià)的原理?！　?.掌握ELISA法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)的方法?！　《?、實(shí)驗(yàn)原理　　ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的GX催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無(wú)和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA試劑盒是免疫酶技術(shù)的一種，其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板（或球）吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗滌，這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中.酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次，而抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次，即可用二抗（抗抗體）、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)?！　∧壳俺Ｓ玫膸追NELISA方法有：測(cè)定抗體的間接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量?！　∪x器、原料和試劑　　儀器　　聚苯乙烯96孔酶標(biāo)板、微量移液管、酶聯(lián)免疫閱讀儀、水浴鍋?！　≡稀　慰寺】贵w　　試劑　　1.抗原及酶標(biāo)記抗體　?、倏乖和每谷薎gG（RabbitAanti-humanIgG，CodeNo.A0423）;　　②酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP（RabbitAnti-mouseIgG-HRP，CodeNo.P0260）;均為　　DAKO公司產(chǎn)品，使用時(shí)按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋?！　?.洗滌液（含0.05%Tween20的PBS）：1LPBS中加入Tween-20500μL。　　5.ELISA試劑盒封閉液（含1%牛血清白蛋白，0.1%Tween20的PBS）：10mLPBS中加入100mgBSA，10μLTween-20。6.底物溶液　?、倭姿徕c鹽緩沖液（0.1mol/LpH6.0）：稱Na2HPO412H2O2.2g，NaH2PO42H2O6.84g，用蒸餾水溶解，定容至500mL?！　、赥MB貯液：稱60mgTMB溶于10mL二甲基亞砜中，4℃避光保存?！　、鄣孜飸?yīng)用液：現(xiàn)用現(xiàn)配，磷酸鈉緩沖液10mL，TNB貯液10μL。30%H2O215μL，混勻?！　?.終止液：2mol/LH2SO4　　四、操作步驟　　①抗原包被：兔抗人IgG作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板　　中。4℃放置?！　、谙礈欤捍稳諆A去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次?！　、鄯忾]：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h?！　、芟礈欤河孟礈煲合?次。　?、菁哟郎y(cè)樣品（一抗）：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另塊板上用PBS連續(xù)稀釋（按照1：2或1：10），100μL/孔加到已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育1~2h?！　、尴礈欤河孟礈煲合?次?！　、呒用笜?biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l：8000稀釋，100μL/孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h?！　、嘞礈欤河孟礈煲合?次，蒸餾水洗2次。　?、犸@色：ELISA試劑盒加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色?！、饨K止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處各孔的吸光值，陽(yáng)性反應(yīng)的Zda稀釋度為待測(cè)樣品的效價(jià)。[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:01

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 抗生素效價(jià)測(cè)定教學(xué)片

  抗生素效價(jià)測(cè)定教學(xué)片[詳細(xì)]

  2012-09-14 00:00

  專利

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• 教你兩步完成肝素效價(jià)的測(cè)定

  教你兩步完成肝素效價(jià)的測(cè)定[詳細(xì)]

  2024-09-13 23:04

  應(yīng)用文章

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• 采用 Agilent 1220 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行da麻素效價(jià)測(cè)定

  采用 Agilent 1220 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行da麻素效價(jià)測(cè)定[詳細(xì)]

  2024-09-27 23:58

  應(yīng)用文章

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• Z8YJ圈(抗生素效價(jià))測(cè)量?jī)x用于抗生素微生物檢定

  Z8YJ圈(抗生素效價(jià))測(cè)量?jī)x用于抗生素微生物檢定[詳細(xì)]

  2024-09-23 19:43

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 辣椒油中酸價(jià)測(cè)定方法的探討分析

  辣椒油中酸價(jià)測(cè)定方法的探討分析[詳細(xì)]

  2024-09-11 18:04

  應(yīng)用文章

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• B 細(xì)胞來(lái)源腫瘤的靶向免疫療法功能性效價(jià)評(píng)估

  B 細(xì)胞來(lái)源腫瘤的靶向免疫療法功能性效價(jià)評(píng)估[詳細(xì)]

  2024-09-29 12:06

  應(yīng)用文章

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• 人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA試劑盒

  人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2014-08-21 00:00

  應(yīng)用文章

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• 人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA試劑盒

  人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-28 01:07

  操作手冊(cè)

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• 人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA試劑盒

  人多效生長(zhǎng)因子(PTN)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-20 13:35

  報(bào)價(jià)單

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• 使用Skyline 創(chuàng)建單克隆抗體的 MRM 方法

  本文向您介紹使用Skyline軟件和島津LCMS-8050/8060創(chuàng)建MRM方法，對(duì)生物樣品中的單克隆抗體進(jìn)行特異性檢測(cè)的分析示例。島津LCMS-8050/8060和Skyline軟件的組合使用，縮短定量分析方法的創(chuàng)建時(shí)間。[詳細(xì)]

  2018-08-26 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 使用 Skyline 創(chuàng)建單克隆抗體的 MRM 方法

  使用 Skyline 創(chuàng)建單克隆抗體的 MRM 方法[詳細(xì)]

  2024-09-30 17:32

  期刊論文

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• 食品中酸價(jià)和過(guò)氧化值測(cè)定方法的改進(jìn).

  食品中酸價(jià)和過(guò)氧化值測(cè)定方法的改進(jìn).[詳細(xì)]

  2024-09-20 03:51

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• BT產(chǎn)品應(yīng)用（11）單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞篩選技術(shù)

  1986年，美國(guó)FDA批準(zhǔn)了DY個(gè)單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過(guò)40個(gè)ZL用抗體藥物被批準(zhǔn)上市，每年實(shí)現(xiàn)超過(guò)600億美元的銷(xiāo)售額。在國(guó)際及國(guó)內(nèi)形成了抗體藥物開(kāi)發(fā)熱潮。巨大的市場(chǎng)前景和現(xiàn)存的技術(shù)問(wèn)題及壁壘并存的現(xiàn)實(shí)不可避免地引發(fā)抗體藥物新一輪技術(shù)革命。而其結(jié)果又將毫無(wú)疑問(wèn)地改變抗體藥物的市場(chǎng)格局。 但是，抗體不管是作為檢測(cè)試劑，還是作為具有巨大市場(chǎng)前景的ZL藥物。首先，我們都需要通過(guò)篩選找到單克隆抗體。傳統(tǒng)的單克隆抗體制備方法主要是雜交瘤技術(shù)。這是目前比較成熟，技術(shù)難度比較低，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍然在使用的方法。 在單克隆抗體制備過(guò)程中，有兩次篩選過(guò)程，DY次是使用選擇性培養(yǎng)基選出雜交瘤細(xì)胞；第二次就是進(jìn)一步選出能產(chǎn)生我們需要的抗原特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。[詳細(xì)]

  2021-02-18 16:59

  應(yīng)用文章

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• 牛奶中弎價(jià)鎘六價(jià)鎘的測(cè)定研究

  牛奶中弎價(jià)鎘六價(jià)鎘的測(cè)定研究[詳細(xì)]

  2011-03-14 00:00

  安裝說(shuō)明

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• 苯類產(chǎn)品溴價(jià)的測(cè)定

  苯類產(chǎn)品溴價(jià)的測(cè)定[詳細(xì)]

  2024-10-05 14:44

  選購(gòu)指南

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• CT-1PLUS電位滴定儀測(cè)定花生油酸價(jià)

  酸價(jià)指中和1克油脂中游離脂肪酸所需的氫氧化鉀毫克數(shù)，酸價(jià)可以反應(yīng)油脂酸敗的程度，是檢驗(yàn)油脂質(zhì)量的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)CT-1Plus自動(dòng)滴定儀測(cè)定花生油的酸價(jià)。[詳細(xì)]

  2025-01-13 18:19

  應(yīng)用文章

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• 人多效生長(zhǎng)因子（PTN）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

  1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，人多效生長(zhǎng)因子（PTN）洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請(qǐng)避光保存。7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。4.局限性：6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到極ng確的結(jié)果。人多效生長(zhǎng)因子（PTN）保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人多效生長(zhǎng)因子(PTN)試劑盒elisa說(shuō)明書(shū)

  人多效生長(zhǎng)因子(PTN)試劑盒elisa說(shuō)明書(shū)[詳細(xì)]

  2024-09-14 01:50

  其它

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• ELISA試劑盒測(cè)定技術(shù)的發(fā)展

  臨床診斷的ELISA試劑盒培養(yǎng)方法。因此，這些難于采用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法檢測(cè)的病原體感染診斷ZL的要求，迫使人們必須去尋找其他的檢測(cè)途徑，直接的或是間接的。此外，即使是可以用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法培養(yǎng)的病原體，僅進(jìn)行形態(tài)及生物化學(xué)鑒定，有時(shí)并不足以完全準(zhǔn)確地鑒定病原體，仍具有一定程度的盲目性。于是，隨著人們對(duì)病原體感染與機(jī)體免疫應(yīng)答的逐步認(rèn)識(shí)，以抗原抗體特異反應(yīng)為基礎(chǔ)的，更為快速簡(jiǎn)便的免疫檢驗(yàn)方法就應(yīng)運(yùn)而生了。人們就希望能盡快盡早地知道機(jī)體所感染的是何種病原體，傳統(tǒng)的病原體感染診斷一般要經(jīng)過(guò)這樣一個(gè)過(guò)程，ELISA試劑盒即首先對(duì)可能存在有病原體的體液或分泌物標(biāo)本進(jìn)行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)后，再通過(guò)分析其形態(tài)學(xué)、生物學(xué)和生物化學(xué)特性，以確定其到底是哪一類及哪一種病原體。ELISA試劑盒法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)?，F(xiàn)代免疫學(xué)ELISA試劑盒的發(fā)展與微生物學(xué)尤其是細(xì)菌學(xué)是密不可分的，臨床免疫測(cè)定技術(shù)的發(fā)展亦是如此。當(dāng)機(jī)體感染病原微生物時(shí)，要想使臨床醫(yī)師盡早采取適當(dāng)?shù)拇胧┻M(jìn)行ZL。E-(Hu)（01）-00154人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒，英文名：cholecystokininoctapeptide，CCK-8ELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00155人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒，英文名：α1-Acidglycoprotein，α1-AGPELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00156人丙二醛(MDA)ELISA試劑盒，英文名：malondialchehyche，MDAELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00157人膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒，英文名：cholecystokinin，CCKELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00158人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒，英文名：N-terminalprocollagenⅢpropeptide，PⅢNPELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00159人Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒，英文名：CollagenTypeⅡ，ColⅡELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00160人Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒，英文名：CollagenTypeⅠ，ColⅠELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00161人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒，英文名：procollagenⅢN-terminalpeptide，PⅢNTELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00162人透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒，英文名：Hyaluronicacid，HAELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00163人Ⅳ型膠原(ColⅣ)ELISA試劑盒，英文名：CollagenTypeⅣ，ColⅣELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00164人Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒，英文名：CollagenTypeⅢ，ColⅢELISAKit，規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00165人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒，英文名：Laminin，LNELISAKit，ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48TE-(Hu)（01）-00166人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒，英文名：Fibronectin，F(xiàn)NELISAKit，規(guī)格：96T/48T[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:00

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