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多肽受體蛋白相互作用和機(jī)制
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2018-09-28 10:00 590閱讀次數(shù)
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多肽受體蛋白相互作用和機(jī)制高等植物多肽激素CLAVATA3(CLV3)對(duì)于植物莖端分生組織干細(xì)胞數(shù)目的維持起著極其重要的作用。過(guò)去幾十年來(lái),CLAVATA1/CLAVATA2(CLV1/CLV2)復(fù)合體被認(rèn)為是CLV3多肽在細(xì)胞膜上的**受體。然而,新的假設(shè)僅僅停留在遺傳學(xué)上的預(yù)測(cè),仍然缺乏進(jìn)一步的生物化學(xué)和細(xì)胞學(xué)的證據(jù)。為了更好地理解這三個(gè)可能的受體蛋白之間的相互關(guān)系,林金星研究組利用新型的活體下檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)螢火蟲熒光素酶互補(bǔ)技術(shù)(Fireflyluciferasecomplementationimagingassay,LCI)在擬南芥葉肉原生質(zhì)體(Arabidopsismesophyllprotoplasts)和煙草葉片(Nicotianabenthamianaleaves)兩個(gè)體系中分析了CLV1,CLV2和CRN三個(gè)受體蛋白之間的相互作用?!∪欢鳽近的遺傳學(xué)分析篩選到了一個(gè)新的受體蛋白激酶成員CORYNE(CRN),并且發(fā)現(xiàn)它在CLV3信號(hào)途徑中起著非常重要的作用。在一系列遺傳學(xué)分析的基礎(chǔ)上,新的CLV3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路假設(shè)被提出:即CLV1同源二聚體與CLV2/CRN異源復(fù)合體可能平行獨(dú)立地介導(dǎo)CLV3信號(hào)?!?shí)驗(yàn)結(jié)果表明:LCI技術(shù)和免疫共沉淀技術(shù)(Co-immunoprecipitationassay)都證實(shí)了CLV2在沒(méi)有CLV3多肽刺激的情況下可以直接地與CRN發(fā)生相互作用;外源的CLV3多肽處理,并不會(huì)明顯地影響CLV2-CRN之間的互作強(qiáng)度;進(jìn)一步的LCI實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CLV1不能夠與CLV2發(fā)生直接的相互作用,但能夠與CRN有微弱的相互作用;除此之外,實(shí)驗(yàn)人員還發(fā)現(xiàn)CRN自身可以形成同源二聚體,而CLV1或CLV2自身不能形成同源二聚體。這些生化和細(xì)胞學(xué)結(jié)果對(duì)于新提出的CLV3平行雙通路假設(shè)提供了直接的證據(jù)。Anti-ATP2c1鈣離子ATP酶通道蛋白抗體規(guī)格:0.2mlAnti-phospho-ATM(Ser1981)磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATF6活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP4B氫鉀ATP酶通道蛋白抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP5JATP5J抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP7A銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)α鏈抗體規(guī)格:0.2mlAnti-ATRN吸引素抗體規(guī)格:0.2mlAnti-phospho-ATR/ACTR(Ser428)磷酸化ATR抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP7B銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP1b2/Na+K+ATPase鈉鉀ATP酶通道蛋白抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Phospho-Na,K-ATPasealpha-1(Tyr10)磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體規(guī)格:0.1mlAnti-Phospho-ATP1A1(Ser16)磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Phospho-ATP1A1(Ser23)磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATXN1失調(diào)癥蛋白1抗體規(guī)格:0.2mlAnti-phospho-ATPcitratelyase(Ser455)磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體規(guī)格:0.1mlAnti-phospho-Ataxin-1(Ser775)磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體規(guī)格:0.1mlAnti-AVEN凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活YZ劑抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Kir6.2ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AVPR2精氨酸加壓素受體2抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Bdkrb2/B2R緩激肽B2受體抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Axin1軸蛋白1抗體規(guī)格:0.2mlAnei-ATX自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AuroraA有絲分裂激酶A抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AuroraB有絲分裂激酶B抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AuroraC有絲分裂激酶B抗體規(guī)格:0.2ml
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多肽受體蛋白相互作用和機(jī)制
- 多肽受體蛋白相互作用和機(jī)制高等植物多肽激素CLAVATA3(CLV3)對(duì)于植物莖端分生組織干細(xì)胞數(shù)目的維持起著極其重要的作用。過(guò)去幾十年來(lái),CLAVATA1/CLAVATA2(CLV1/CLV2)復(fù)合體被認(rèn)為是CLV3多肽在細(xì)胞膜上的**受體。然而,新的假設(shè)僅僅停留在遺傳學(xué)上的預(yù)測(cè),仍然缺乏進(jìn)一步的生物化學(xué)和細(xì)胞學(xué)的證據(jù)。為了更好地理解這三個(gè)可能的受體蛋白之間的相互關(guān)系,林金星研究組利用新型的活體下檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)螢火蟲熒光素酶互補(bǔ)技術(shù)(Fireflyluciferasecomplementationimagingassay,LCI)在擬南芥葉肉原生質(zhì)體(Arabidopsismesophyllprotoplasts)和煙草葉片(Nicotianabenthamianaleaves)兩個(gè)體系中分析了CLV1,CLV2和CRN三個(gè)受體蛋白之間的相互作用?!∪欢鳽近的遺傳學(xué)分析篩選到了一個(gè)新的受體蛋白激酶成員CORYNE(CRN),并且發(fā)現(xiàn)它在CLV3信號(hào)途徑中起著非常重要的作用。在一系列遺傳學(xué)分析的基礎(chǔ)上,新的CLV3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路假設(shè)被提出:即CLV1同源二聚體與CLV2/CRN異源復(fù)合體可能平行獨(dú)立地介導(dǎo)CLV3信號(hào)?!?shí)驗(yàn)結(jié)果表明:LCI技術(shù)和免疫共沉淀技術(shù)(Co-immunoprecipitationassay)都證實(shí)了CLV2在沒(méi)有CLV3多肽刺激的情況下可以直接地與CRN發(fā)生相互作用;外源的CLV3多肽處理,并不會(huì)明顯地影響CLV2-CRN之間的互作強(qiáng)度;進(jìn)一步的LCI實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CLV1不能夠與CLV2發(fā)生直接的相互作用,但能夠與CRN有微弱的相互作用;除此之外,實(shí)驗(yàn)人員還發(fā)現(xiàn)CRN自身可以形成同源二聚體,而CLV1或CLV2自身不能形成同源二聚體。這些生化和細(xì)胞學(xué)結(jié)果對(duì)于新提出的CLV3平行雙通路假設(shè)提供了直接的證據(jù)。Anti-ATP2c1鈣離子ATP酶通道蛋白抗體規(guī)格:0.2mlAnti-phospho-ATM(Ser1981)磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATF6活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP4B氫鉀ATP酶通道蛋白抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP5JATP5J抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP7A銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)α鏈抗體規(guī)格:0.2mlAnti-ATRN吸引素抗體規(guī)格:0.2mlAnti-phospho-ATR/ACTR(Ser428)磷酸化ATR抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP7B銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATP1b2/Na+K+ATPase鈉鉀ATP酶通道蛋白抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Phospho-Na,K-ATPasealpha-1(Tyr10)磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體規(guī)格:0.1mlAnti-Phospho-ATP1A1(Ser16)磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Phospho-ATP1A1(Ser23)磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體規(guī)格:0.1mlAnti-ATXN1失調(diào)癥蛋白1抗體規(guī)格:0.2mlAnti-phospho-ATPcitratelyase(Ser455)磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體規(guī)格:0.1mlAnti-phospho-Ataxin-1(Ser775)磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體規(guī)格:0.1mlAnti-AVEN凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活YZ劑抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Kir6.2ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AVPR2精氨酸加壓素受體2抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Bdkrb2/B2R緩激肽B2受體抗體規(guī)格:0.2mlAnti-Axin1軸蛋白1抗體規(guī)格:0.2mlAnei-ATX自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AuroraA有絲分裂激酶A抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AuroraB有絲分裂激酶B抗體規(guī)格:0.2mlAnti-AuroraC有絲分裂激酶B抗體規(guī)格:0.2ml[詳細(xì)]
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2018-09-28 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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GFC方法分析蛋白和多肽
- GFC方法分析蛋白和多肽[詳細(xì)]
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2024-09-29 07:56
安裝說(shuō)明
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Sigma-Aldrich氨基酸、多肽和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品
- Sigma-Aldrich氨基酸、多肽和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品[詳細(xì)]
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2014-06-04 00:00
報(bào)價(jià)單
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采用FLIM研究細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用
- 采用FLIM研究細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用[詳細(xì)]
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2012-01-04 00:00
專利
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人Hedgehog相互作用蛋白elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T50ng/L-1600ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)水平。用純化的人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Hedgehog相互作用蛋白(HHIP),再與HRP標(biāo)記的Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)濃度。[詳細(xì)]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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利用 NanoBRET 技術(shù)檢測(cè) p53-MDM2 蛋白相互作用
- 利用 NanoBRET 技術(shù)檢測(cè) p53-MDM2 蛋白相互作用[詳細(xì)]
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2022-03-29 13:47
應(yīng)用文章
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人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)檢測(cè)試劑盒
- 人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 13:20
實(shí)驗(yàn)操作
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天然和重組蛋白受體結(jié)合動(dòng)力學(xué)的區(qū)別
- 在藥物開發(fā)漫長(zhǎng)而艱巨的過(guò)程中,涉及通過(guò)確定候選藥物對(duì)細(xì)胞靶標(biāo)的親和力和相互作用的動(dòng)力學(xué)來(lái)篩選候選藥物的多種方法,其中包括標(biāo)記和無(wú)標(biāo)記,如表面等離子體共振 (SPR)、生物層干涉測(cè)量法 (BLI),石英晶體微量天平(QCM)和表面聲波 (SAW)用于從細(xì)胞中提取或重組表達(dá)的分離蛋白的動(dòng)力學(xué)研究。這些技術(shù)需要將分離的蛋白質(zhì)固定在傳感器表面上,以便其與待測(cè)溶液中的分析物相互作用。 但是這可能會(huì)引入不確定性,例如天然構(gòu)象的變化,這可能會(huì)改變表達(dá)蛋白的結(jié)構(gòu)和行為。此外,由于各種基于細(xì)胞的異質(zhì)因素,例如細(xì)胞表型和生長(zhǎng)周期、膜剛性以及鄰近的蛋白質(zhì)影響,分離受體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)可能與其天然細(xì)胞內(nèi)對(duì)應(yīng)物的結(jié)合動(dòng)力學(xué)大不相同。天然和分離受體之間的這些生理差異及其對(duì)受體功能的潛在影響,使得基于細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)相互作用分析方法更具藥理學(xué)相關(guān)性和生物學(xué)意義??梢允褂枚喾N方法來(lái)測(cè)量與天然細(xì)胞內(nèi)受體的結(jié)合動(dòng)力學(xué),例如表面等離子體共振顯微鏡(SPRM), 配體示蹤劑 (LT)和石英晶體微量天平(QCM)。然而,SPRM是目前僅有的單細(xì)胞分辨率的技術(shù),因此使其能夠直接解決細(xì)胞異質(zhì)性問(wèn)題。
[詳細(xì)]
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2024-09-21 14:20
其它
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雙棲小泡蛋白和N-WASP調(diào)節(jié)肌蛋白組裝的相互作用動(dòng)力學(xué)
- 雙棲小泡蛋白和N-WASP調(diào)節(jié)肌蛋白組裝的相互作用動(dòng)力學(xué)[詳細(xì)]
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2024-09-28 00:04
操作手冊(cè)
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使用生物分子相互作用儀MP-SPR測(cè)量小分子量藥物與蛋白之間的相互作用
- 使用生物分子相互作用儀MP-SPR測(cè)量小分子量藥物與蛋白之間的相互作用[詳細(xì)]
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2016-09-13 00:00
其它
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電磁場(chǎng)和物質(zhì)的共振相互作用
- 激光器的理論基礎(chǔ)是光頻電磁場(chǎng)與物質(zhì)的相互作用(特別是共振相互作用)。[詳細(xì)]
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2018-10-13 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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Sepax 納米毛細(xì)管柱在蛋白組學(xué)、多肽和生物分離(細(xì)胞溶菌液蛋白和蛋白消化液等)上的應(yīng)用
- GPC?凝膠色譜柱的應(yīng)用和相關(guān)介紹。賽分公司致力于研究開發(fā)化學(xué)與生物分離 科學(xué)、生物表面科學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究(Proteomix)領(lǐng)域的產(chǎn)品,包括高分離效率的GX液相色譜儀、色譜柱與配件,以及用于DNA?測(cè)序和蛋白質(zhì)分 離的新型毛細(xì)管涂布材料,為微芯片分離和DNA、蛋白質(zhì)微序列提供**的表面技術(shù)與分離技術(shù)。 創(chuàng)新的系列液相色譜柱在2005/2006年匹茲堡會(huì)議得到廣泛的認(rèn)可與推薦。[詳細(xì)]
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2020-04-26 17:54
操作手冊(cè)
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生物大分子分析系統(tǒng)MP-SPR測(cè)量藥物和蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和再現(xiàn)性
- 生物大分子分析系統(tǒng)MP-SPR測(cè)量藥物和蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和再現(xiàn)性[詳細(xì)]
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2016-09-13 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人受體相互作用絲氨酸蘇氨酸激酶1(RIPK1)檢測(cè)試劑盒
- 人受體相互作用絲氨酸蘇氨酸激酶1(RIPK1)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 05:06
其它
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大鼠硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書
- 南京森貝伽現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量保證,價(jià)格優(yōu)惠,試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)水平。用純化的大鼠硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP),再與HRP標(biāo)記的硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)含量。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:360pg/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為240pg/mL,160pg/mL,80pg/mL,40pg/mL,20pg/mL)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書有異,以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%檢測(cè)范圍:15pg/mL-320pg/mL保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊(cè)
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2021-02-26 12:37
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2024-09-29 03:28
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2024-09-28 05:15
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2020-10-10 09:21
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2009-03-16 00:00
期刊論文
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