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細胞因子注意事項

本文由 上??婆d商貿(mào)有限公司 整理匯編

2018-10-03 10:00 1163閱讀次數(shù)

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上海科興生物科技有限公司原始創(chuàng)新,自主創(chuàng)新,揮重金購置Zxin、Zxian極n的儀器設(shè)備,支持研發(fā),支持服務(wù)。目前檢測單個細胞特定細胞因子的表達手段包括:ELIspot、原位雜交、免疫細胞化學(xué)、限制性稀釋分析(limitingdilutionanalysis,LDA)和單細胞PCR,應(yīng)用原位雜交技術(shù)和免疫組化方法觀察細胞因子蛋白表達及mRNA表達可以識別Th1和Th2細胞,此方法可獲得較強的細胞內(nèi)信號,但此方法工作量大、主觀性強,難以進行大樣本檢測,且人肉眼識別能力有很大的局限性,而ELISPOT及單細胞PCR技術(shù),技術(shù)性強、勞動強度大,難以進行廣泛推廣。隨著多標記及胞內(nèi)細胞因子標記流式細胞技術(shù)的出現(xiàn),使對細胞內(nèi)細胞因子的研究推向了一個新的階段。下面主要對胞內(nèi)細胞因子流式細胞技術(shù)作以介紹。早期細胞因子表達與細胞功能相關(guān)性研究是基于特定克隆")克隆細胞的激活。盡管研究應(yīng)用T淋巴細胞克隆"))與TH2(IL-4,IL-5,IL-10),但這些研究很難外推,因為T細胞克隆"g克隆證明了不同細胞因子的合成,如TH1(IL-2,IFN-)克隆與體內(nèi)T細胞功能相關(guān)性還未被揭示??焖伲毫魇蕉繖z測細胞內(nèi)細胞因子可在一天內(nèi)完成,實驗流程需6-8小時,實際操作時間為1-2小時,快速簡便;簡便:無需組織培養(yǎng),可以全血分析,無需分離PBMCs;靈敏度高:高度靈敏的熒光標記與檢測系統(tǒng);GX:可以在同一個細胞內(nèi)同時檢測兩種或更多種細胞因子,也可根據(jù)細胞免疫表型區(qū)分分泌細胞因子的細胞的亞型,進行多參數(shù)相關(guān)分析;安全:減少樣本處理與生物源性污染接近生物體的分析條件:全血檢測保留細胞及生化微環(huán)境更準確反映了體內(nèi)狀況。二、所需儀器1、流式上樣管及細胞培養(yǎng)皿或板2、25%CO2,37℃孵箱3、混勻振蕩器4、離心機5、加樣器、Tips6、流式細胞儀三、常用的標本類型和處理方法全血:使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血,不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑,血樣在8小時內(nèi)分析,超過8小時會導(dǎo)致活性的損失,一般細胞因子陽性細胞會減少5%。如不能在8小時之內(nèi)檢測,應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。

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