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大鼠LBP檢測試劑盒說明
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本文由 上海恒遠ELISA試劑盒供應商 整理匯編
2018-11-16 10:02 224閱讀次數(shù)
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大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒檢測原理說明檢測范圍:96T0.6ng/ml-16ng/ml使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)水平。用純化的大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖結(jié)合蛋白(LBP),再與HRP標記的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(32ng/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。16ng/ml5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液8ng/ml4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液4ng/ml3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液2ng/ml2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液1ng/ml1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月
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大鼠LBP檢測試劑盒說明
- 大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒檢測原理說明檢測范圍:96T0.6ng/ml-16ng/ml使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)水平。用純化的大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖結(jié)合蛋白(LBP),再與HRP標記的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(32ng/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。16ng/ml5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液8ng/ml4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液4ng/ml3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液2ng/ml2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液1ng/ml1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒
- 大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-09 00:00
安裝說明
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大鼠去甲腎上腺素檢測試劑盒注意事項說明
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2018-12-30 10:00
產(chǎn)品樣冊
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脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測試劑盒
- 脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測試劑盒[詳細]
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2015-07-10 00:00
選購指南
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脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測試劑盒
- 脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測試劑盒[詳細]
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2015-07-10 00:00
實驗操作
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大鼠ELISA試劑盒脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)說明書
- 大鼠ELISA試劑盒大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒HumanAspartateaminotransferase,GOT/GPTELISAKitY3376096T/48T人纖維連接素相關抗原(FRA)ELISA試劑盒Humanfibronectionrelatedantigen,FRAELISAKitY3376196T/48T大鼠ELISA試劑盒公司研發(fā)生產(chǎn)的細胞因子ELISA試劑盒系列產(chǎn)品,生產(chǎn)原料均來自國外廠家,并經(jīng)過公司嚴格的篩選和質(zhì)量檢測。大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒采用嚴格的體外診斷試劑生產(chǎn)技術專業(yè)制造,品質(zhì)zhuo越,性能穩(wěn)定,可與ELISA試劑盒開發(fā)行業(yè)內(nèi)國際知名品牌品質(zhì)相媲美。公司成立了品牌ELISA試劑盒研發(fā)團隊,是由具有十幾年行業(yè)內(nèi)研發(fā)生產(chǎn)經(jīng)驗的ZS專家?guī)ь^組建,團隊核心研發(fā)人員生產(chǎn)經(jīng)驗豐富,技術研發(fā)科學嚴謹、不斷創(chuàng)新開發(fā)新產(chǎn)品。并致力于打造行業(yè)的高技術標準。公司的每一個ELISA試劑盒,在出廠前均經(jīng)質(zhì)檢部對其進行嚴格的品質(zhì)鑒定,嚴把質(zhì)量關。公司系列ELISA試劑盒產(chǎn)品豐富,并將不斷推出新產(chǎn)品,滿足廣大科研工作者的需要。人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒Humangastrincellantibody,GCAELISAKitY3376296T/48T大鼠ELISA試劑盒人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒HumanheparincofactorⅡ,HCⅡELISAKitY3376396T/48T人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒HumanHya]uronatebindingprotein,HABPELISAKitY3376496T/48T人細胞毒素相關蛋白A(CagA)ELISA試劑盒HumanCytotoxin-associatedprotein,CagAELISAKitY3376596T/48T人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒Humangastrin-reliasingpeptide,GRPELISAKitY3376696T/48T人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)ELISA試劑盒Humanpro-gastrin-releasingpeptide,ProGRPELISAKitY3376796T/48T人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA試劑盒HumanSecretinELISAKitY3376896T/48T人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA試劑盒Humantrypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKitY3376996T/48T人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒Humanα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKitY3377096T/48T人胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒HumanAmylinELISAKitY3377196T/48TELISA酶結(jié)合物的制備:免疫酶技術(immunoenzymatictechnique)又稱酶免疫測定法(enzymeimmunoassay,EIA),是繼免疫熒光技術和放射免疫技術之后發(fā)展起來的又一種免疫標記技術。它是把抗原抗體的特異性反應和酶的GX催化作用相結(jié)合而建立的。該技術通過化學方法將酶與抗體或抗抗體結(jié)合,形成酶標記物,這些酶標記物仍保持免疫學活性和酶的活性,然后將它與相應的抗體或抗原起反應,形成酶標記復合物,結(jié)合在免疫復合物上的酶,在遇到相應的底物時,則催化底物產(chǎn)生水解、氧化或還原等反應,而生成可溶性或不溶性有色物質(zhì)。然后根據(jù)顯色的深淺來反映待測樣品中抗原或抗體的含量,如生成的有色物質(zhì)為可溶性,則可用肉眼比色或酶標測定儀測定光密度值(OD)定性或定量;如生成的有色物質(zhì)為不溶性沉淀物,同時又是電子致密物質(zhì),則可用光學顯微鏡或電子顯微鏡識別和定位。因此,免疫酶技術是一項定位、定性和定量(敏感度可達每毫升ng~pg水平)的綜合技術。常用的酶是辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)和堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)。[詳細]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測試劑盒
- 人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-28 21:39
安裝說明
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人多糖結(jié)合蛋白(LBP)試劑盒使用方法
- 檢測范圍:96T20pg/ml-480pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中多糖結(jié)合蛋白(LBP)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人多糖結(jié)合蛋白(LBP)水平。用純化的人多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入多糖結(jié)合蛋白(LBP),再與HRP標記的多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的多糖結(jié)合蛋白(LBP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人多糖結(jié)合蛋白(LBP)濃度。[詳細]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊
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內(nèi)毒素檢測試劑盒說明
- 顯色基質(zhì)鱟試劑盒使用說明書(終點顯色法,含偶氮化試劑)【用途】顯色基質(zhì)鱟試劑(ChromogenicEnd-pointTachypleusAmebocyteLysate,CETAL)用于體外細菌內(nèi)毒素的定量檢測,禁止以任何途徑進入機體?!驹怼亏c試劑為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下(溫度,pH值及無干擾物質(zhì)),細菌內(nèi)毒素激活C因子,引起一系列酶促反應,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì),使其分解為多肽和黃色的對硝基苯胺(pNA,λmax=405nm)。在一定時間內(nèi),pNA的生成量與細菌內(nèi)毒素濃度成正相關,據(jù)此,可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。同時,對硝基苯胺(pNA)也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色(λmax=545nm),避免了供試品本身的顏色對405nm處吸收峰的干擾?!緳z測限】按反應時間不同可檢測0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml兩個區(qū)間(反應時間T1和T2見出廠檢驗報告)?!驹噭┖薪M成】細菌內(nèi)毒素工作品,2支鱟試劑,1.7ml/支,2支顯色基質(zhì),1.7ml/支,2支偶氮化試劑1,10ml/支,2支偶氮化試劑2,10ml/支,2支偶氮化試劑3,10ml/支,2支HCl(反應終止劑),50ml/瓶,1瓶細菌內(nèi)毒素檢查用水,50ml/瓶,2瓶【貯存】陰涼處,**2-8℃,避光貯存?!居梅ā?.材料和設備1.1試劑鱟試劑、細菌內(nèi)毒素工作品、顯色基質(zhì)、偶氮化試劑1、偶氮化試劑2、偶氮化試劑3、HCl(反應終止劑)、細菌內(nèi)毒素檢查用水。1.2器材旋渦混合儀、移液器、多道移液器、封口膜、試管架。恒溫水浴箱(37±1℃)、分光光度計。注意:接觸試劑及供試品的所有器皿必須是無熱原的(我公司提供無熱原耗材)。玻璃器皿可經(jīng)250℃干烤至少60分鐘去除熱原。2.供試品的貯存與預處理備注:若供試品為血液類,請參照配套血液相關處理試劑使用說明書。2.1供試品的pH值應在6-8之間,若超出此范圍,需用無熱原緩沖液、0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸調(diào)節(jié)。2.2若供試品中可能存在鱟實驗的干擾物質(zhì),處理參見【供試品的干擾試驗】。2.3若供試品中可能含有β-葡聚糖(β-葡聚糖會產(chǎn)生G因子旁路反應,干擾內(nèi)毒素檢測),需選用特異性鱟試劑(我公司提供)。2.4若供試品為一些KJ素如頭孢類KJ素和磺胺制劑會對偶氮染色劑產(chǎn)生偶聯(lián)反應而干擾偶氮化顯色,需要選用不含偶氮化試劑的試劑盒(我公司提供)。2.5若供試品的本底吸光度值大于0.5,必須對供試品進行稀釋后再檢測。2.6若供試品顏色較深(例如溶血),或在酸性條件下顏色加深(例如一些組織培養(yǎng)介質(zhì)),必須設置供試品空白管以扣除供試品自身的顏色本底。供試品空白管不加入鱟試劑,以等體積鱟試劑的溶劑(該處為細菌內(nèi)毒素檢查用水)代替。其余操作同供試品管。3.實驗操作3.1細菌內(nèi)毒素標準溶液配制標準曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀釋方法如下(以0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml為例):取細菌內(nèi)毒素工作品1支,按細菌內(nèi)毒素工作品使用說明書稀釋為10EU/ml的內(nèi)毒素溶液,再稀釋為1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液,以1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液為母液按下表稀釋成0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml的濃度梯度。配制好的內(nèi)毒素標準溶液應在4小時內(nèi)用完。表1內(nèi)毒素標準溶液配制內(nèi)毒素濃度(EU/ml)10.50.250.1加細菌內(nèi)毒素檢查用水(ml)00.50.750.9加1EU/ml內(nèi)毒素溶液(ml)10.50.250.1鱟試劑:按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中,輕輕振搖使鱟試劑完全溶解,注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應在10分鐘內(nèi)用完。顯色基質(zhì):按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于顯色基質(zhì)中,輕輕振搖使顯色基質(zhì)完全溶解。顯色基質(zhì)溶液可在無污染的條件下于4C貯存8小時以內(nèi)。偶氮化試劑1:按標示量加反應終止劑鹽酸于偶氮化試劑1中,偶氮化試劑2:按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑2中,偶氮化試劑3:按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑3中,偶氮化試劑溶液可于4C貯存1周。3.4實驗操作取無熱原試管,加入100ml細菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標準溶液,或供試品。再加入100ml鱟試劑溶液,混勻,37C溫育T1分鐘。溫育結(jié)束,加入100ml顯色基質(zhì)溶液,混勻,37C溫育T2分鐘。溫育結(jié)束,加入500ml偶氮化試劑1溶液,混勻,加入500ml偶氮化試劑2溶液,混勻加入500ml偶氮化試劑3溶液,混勻,靜置5分鐘,于545nm波長處讀取吸光度值。(見表2)表2實驗操作陰性對照內(nèi)毒素標準供試品加細菌內(nèi)毒素檢查用水(ml)100加內(nèi)毒素標準溶液(ml)100加供試品(ml)100加鱟試劑(ml)100100100混勻,37C溫育T1分鐘加顯色基質(zhì)溶液(ml)100100100混勻,37C溫育T2分鐘加偶氮化試劑1溶液(ml)5005005004.數(shù)據(jù)處理建立標準曲線:Y=bX+a,其中Y為545nm處吸光度值,X為內(nèi)毒素的濃度,b為直線斜率,a為Y軸截距。當實驗數(shù)據(jù)同時滿足如下三個條件時實驗才有效:1.標準曲線的相關系數(shù)r≥0.980,2.標準曲線Zdi點的Y值大于陰性對照的Y值,3.供試品平行管的平均值在標準曲線的區(qū)間內(nèi)?!竟┰嚻返母蓴_試驗】供試品的干擾試驗詳見《中華人民共和國藥典》2005版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的“光度測定法干擾試驗”。當鱟試劑、供試品的來源、配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時,須進行干擾試驗,步驟如下:1選擇標準曲線中點或一個靠近中點的內(nèi)毒素濃度(設為λm),作為供試品干擾試驗中添加的內(nèi)毒素濃度,配制含λm內(nèi)毒素的供試品陽性對照,測量出該溶液的內(nèi)毒素濃度,稱為Cs;2測量出未添加外源內(nèi)毒素的供試品溶液內(nèi)毒素濃度,稱為Ct;3計算該試驗條件下的回收率R=(CsCt)/λm×1**%4當R在50%~200%之間,則認為在此試驗條件下供試品溶液不存在干擾作用。5當R在50%~200%之外,需對供試品進行系列稀釋(稀釋倍數(shù)不得超過Zda有效稀釋倍數(shù)MVD)或進行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復步驟1-3,直到內(nèi)毒素的回收率R在50%~200%之間。選擇回收率RZ接近1**%的稀釋倍數(shù)進行內(nèi)毒素檢測。[詳細]
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2018-09-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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弓形蟲試劑盒檢測說明
- 弓形蟲試劑盒檢測說明試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清樣本中弓形蟲(Tox)表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠弓形蟲(Tox)表達。用純化的小鼠弓形蟲(Tox)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中弓形蟲(Tox)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的弓形蟲(Tox)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中小鼠弓形蟲(Tox)的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算和結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為弓形蟲(Tox)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為弓形蟲(Tox)陽性。注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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上海大鼠堿性磷酸酶(ALP)定量檢測試劑盒(ELISA)注意事項說明
- 上海大鼠堿性磷酸酶(ALP)定量檢測試劑盒(ELISA)注意事項1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。5、本試劑盒定量范圍為1.25-40IU/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(1.25-40IU/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本Z終濃度。6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。上海大鼠堿性磷酸酶(ALP)定量檢測試劑盒(ELISA)組成1酶標包被板12孔×8條7顯色劑A液6mL2標準品0.3mL×6管8顯色劑B液6mL320倍濃縮洗滌液25mL9終止液6mL4樣本稀釋液6mL10說明書1份5特殊稀釋液6mL11封板膜2張6酶標試劑6mL12密封袋1個備注:標準品(1號→6號)濃度依次為:40、20、10、5、2.5、1.25IU/L.[詳細]
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2024-09-28 07:01
產(chǎn)品樣冊
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大鼠胰島素樣生長因子試劑盒說明
- 大鼠胰島素樣生長因子試劑盒說明[詳細]
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2016-08-16 00:00
專利
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大鼠白細胞介素-6(IL-6)試劑盒說明
- 大鼠白細胞介素-6試劑盒注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。大鼠白細胞介素-6試劑盒保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠P16檢測試劑盒
- 大鼠P16檢測試劑盒[詳細]
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2015-09-07 00:00
專利
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大鼠一氧化氮(NO)檢測試劑盒
- 大鼠一氧化氮(NO)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-28 14:01
標準
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大鼠5-HT1A酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作說明
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T6ng/L-220ng/L使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中5-HT1A含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠5-HT1A水平。用純化的大鼠5-HT1A抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-HT1A,再與HRP標記的5-HT1A抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-HT1A呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠5-HT1A濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(400ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。[詳細]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠CD35酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作說明
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T5μg/L-160μg/L使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中CD35含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠CD35水平。用純化的大鼠CD35抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入CD35,再與HRP標記的CD35抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CD35呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠CD35濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(320μg/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。160μg/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液80μg/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液40μg/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液20μg/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液10μg/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7、溫育:操作同3。8、洗滌:操作同5。9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠ZP3酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作說明
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T4pg/ml-180pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中ZP3含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠ZP3水平。用純化的大鼠ZP3抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入ZP3,再與HRP標記的ZP3抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ZP3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠ZP3濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(320pg/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。[詳細]
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2018-11-30 10:00
產(chǎn)品樣冊
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兔 ELISA 檢測試劑盒說明
- 用途:兔EstradiolELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的Estradiol。本試劑盒可以檢測天然和重組的Estradiol。本試劑盒專用于科研、而非用于臨床診斷。試驗原理:兔Estradiol試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知Estradiol濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將Estradiol和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Estradiol的濃度呈比例關系。自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500u、1000lul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。7.底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:2.洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果分析以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Estradiol標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Estradiol含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。局限6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與人其它細胞因子反應。3.重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。[詳細]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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半胱氨酸蛋白酶試劑盒檢測說明
- 半胱氨酸蛋白酶試劑盒檢測說明該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)為基礎,可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性caspase-3抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的caspase-3一抗與相應靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物,顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑:試劑A通透液:0.1%Triton-X10010mL(選用)試劑B封閉緩沖液(封閉用)20mL試劑C(原裝進口分裝)已稀釋的即用型caspase-3一抗(2.5ml)試劑D(原裝進口分裝)生物素化羊抗兔IgG1支(濃度1.5mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支(濃度1μM,稀釋比1:50~1:200)100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL,濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%體積比)2.抗原修復液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復液)10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL,濃鹽酸調(diào)pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修復液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL,用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟(建議方案):石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片:將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr;2.脫蠟:切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修復:根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗滌(2×2min)(具體修法見附1)*注:有些抗原勿需修復,直接進入第5步封閉。5.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育30min;6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2hr或4℃;7.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);8.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30min;10.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);11.封閉:滴加試劑Tween20,37℃濕盒孵育封閉20min;12.加HRP-SA:滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20nM),37℃濕盒中孵育30min;13.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min),TBS洗滌(2×5min);14.顯色:應用DAB溶液(試劑F)顯色;15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;16.封片:待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;17.觀察成像:顯微鏡下觀察成像。注意事項:1.修復后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液,用前應低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween20,否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復染細胞核,則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附附11:抗原修法常用抗原修復液:檸檬酸緩沖液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修復液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修復法切片脫蠟水化處理,TBS沖洗,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波10~15min,取出微波盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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