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昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)說明書活性
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本文由 上海瓦蘭生物科技有限公司 整理匯編
2018-09-22 10:00 489閱讀次數(shù)
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www.biokanu.com昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定昆蟲血清,血漿及相關(guān)液體樣本中脂肪酸合成酶(FAS)的活性。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)水平。用純化的昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂肪酸合成酶(FAS),再與HRP標(biāo)記的FAS抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂肪酸合成酶(FAS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:72IU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為48IU/L,32IU/L,16IU/L,8IU/L,4IU/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%檢測(cè)范圍:2IU/L-50IU/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月
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昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)說明書活性
- www.biokanu.com昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定昆蟲血清,血漿及相關(guān)液體樣本中脂肪酸合成酶(FAS)的活性。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)水平。用純化的昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂肪酸合成酶(FAS),再與HRP標(biāo)記的FAS抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂肪酸合成酶(FAS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中昆蟲脂肪酸合成酶(FAS)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:72IU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為48IU/L,32IU/L,16IU/L,8IU/L,4IU/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%檢測(cè)范圍:2IU/L-50IU/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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FAS,BIM大鼠脂肪酸合成酶elisa試劑盒說明書
- l本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠脂肪酸合成酶(FAS)的含量。l有效期:6個(gè)月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實(shí)驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠脂肪酸合成酶(FAS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠脂肪酸合成酶(FAS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會(huì)影響Z后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本處理1.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。7.建議使用新鮮樣本,保存時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標(biāo)儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個(gè)1個(gè)無備注:1.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:16、8、4、2、1、0nmol/L2.經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過Zda標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測(cè)范圍:0.5nmol/L16nmol/L。2.靈敏度:Zdi檢測(cè)濃度小于0.1nmol/L。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。2.Z終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到**的檢測(cè)結(jié)果。問題解答若實(shí)驗(yàn)效果不好,請(qǐng)及時(shí)對(duì)顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時(shí)您也可以參考以下資料:?jiǎn)栴}可能原因解決方案標(biāo)準(zhǔn)曲線差吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌移液不極ng確檢查和校正移液器精密度低洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不極ng確檢查和校正移液器O.D值低每孔加的試劑量不極ng確校正移液器,極ng確加入試劑溫育時(shí)間不正確保證充足的溫育時(shí)間溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度酶標(biāo)記物或底物失效通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查沒有加入終止液按照說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)在說明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù)樣本值不正確的樣本儲(chǔ)存方式正確儲(chǔ)存樣本,使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)不正確的樣本收集和處理方法采取正確的樣本收集和處理方法待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低使用新鮮樣本,重復(fù)實(shí)驗(yàn)[詳細(xì)]
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2024-09-29 00:35
產(chǎn)品樣冊(cè)
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魚脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
- 魚脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T0.1nmol/L-8nmol/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中脂肪酸合成酶(FAS)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中魚脂肪酸合成酶(FAS)水平。用純化的魚脂肪酸合成酶(FAS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂肪酸合成酶(FAS),再與HRP標(biāo)記的脂肪酸合成酶(FAS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂肪酸合成酶(FAS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中魚脂肪酸合成酶(FAS)濃度。魚脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(12nmol/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。6nmol/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3nmol/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5nmol/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.75nmol/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.375nmol/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。魚脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。魚脂肪酸合成酶(FAS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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昆蟲酶聯(lián)免疫分析說明書
- 昆蟲5羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定昆蟲樣本中5羥色胺(5-HT)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中昆蟲5羥色胺(5-HT)水平。用純化的昆蟲5羥色胺(5-HT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5羥色胺(5-HT),再與HRP標(biāo)記的5羥色胺(5-HT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5羥色胺(5-HT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中昆蟲5羥色胺(5-HT)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:90ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為60ng/L,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5.0ng/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測(cè)范圍:3.0ng/L-70ng/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-10-23 10:31
產(chǎn)品樣冊(cè)
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2024-09-29 08:01
安裝說明
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2015-04-16 00:00
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊(cè)
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MDA,昆蟲丙二醛elisa試劑盒檢測(cè)說明書
- l本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中昆蟲丙二醛(MDA)的含量。l有效期:6個(gè)月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實(shí)驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被昆蟲丙二醛(MDA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的昆蟲丙二醛(MDA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會(huì)影響Z后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本處理1.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。7.建議使用新鮮樣本,保存時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標(biāo)儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測(cè)范圍:0.25nmol/mL8nmol/mL。2.靈敏度:Zdi檢測(cè)濃度小于0.1nmol/mL。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。2.Z終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到**的檢測(cè)結(jié)果。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)elisa試劑盒產(chǎn)品說明書
- 昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)elisa試劑盒產(chǎn)品說明書本試劑盒僅供研究使用。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)水平。用純化的昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入蛻皮激素(Ecdysone),再與HRP標(biāo)記的蛻皮激素(Ecdysone)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛻皮激素(Ecdysone)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)濃度。昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)elisa試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(60ng/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)elisa試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。30ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3.75ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.875ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測(cè)樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)elisa試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照昆蟲蛻皮激素(Ecdysone)elisa試劑盒說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-22 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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昆蟲谷胱甘肽(GSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書
- 昆蟲谷胱甘肽(GSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中昆蟲谷胱甘肽(GSH)水平。用純化的昆蟲谷胱甘肽(GSH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入谷胱甘肽(GSH),再與HRP標(biāo)記的谷胱甘肽(GSH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的谷胱甘肽(GSH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中昆蟲谷胱甘肽(GSH)濃度。昆蟲谷胱甘肽(GSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(960ng/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。昆蟲谷胱甘肽(GSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。480ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液240ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液120ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測(cè)樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。昆蟲谷胱甘肽(GSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照昆蟲谷胱甘肽(GSH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-23 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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真菌酵母β1,3 D葡聚糖合成酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 真菌/酵母細(xì)胞β1,3-D-葡聚糖合成酶活性定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途真菌/酵母細(xì)胞β1,3-D-葡聚糖合成酶活性定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過β1,3-D-葡聚糖合成酶反應(yīng)系統(tǒng)中尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖底物聚合成葡聚糖,與熒光染料結(jié)合產(chǎn)生熒光峰值的變化,來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種真菌或酵母細(xì)胞株裂解懸液中β1,3-D-葡聚糖合成酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,具有高通量特點(diǎn)。技術(shù)背景真菌/酵母細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)具有豐富的糖蛋白外層和碳水化合物內(nèi)層,包括(1,3)-β-D,(1,6)-β-D和(1,3)-α-D-葡聚糖(glucan)。其中(1,3)-β-D為主要元素。1,3-β-D-葡聚糖合成酶(1,3-β-D-glucansynthase;GS;EC.2.4.1.34),又稱為尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖:1,3-β-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucose:1,3-β-glucosyltransferase),催化以尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖(UDP-glucose)為底物,通過1,3-β鏈接聚合為葡聚糖的反應(yīng),構(gòu)成真菌/酵母細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中主要碳水化合物成分1,3-β-D-葡聚糖,為細(xì)胞生長(zhǎng)所必需。1,3-β-D-葡聚糖合成酶具有兩種結(jié)構(gòu)體:1個(gè)調(diào)節(jié)亞體,GTPaseRho1p和4個(gè)催化亞體,Bgs1p-4p或Fksp。(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶成為抗真菌藥物,例如卡泊芬凈(caspofungi)等的靶標(biāo)?;诘孜颱DP-glucose在葡聚糖合成酶的催化下,聚合成(1,3)-β-D-葡聚糖產(chǎn)物,與苯胺藍(lán)(Anilineblue;4,4-(carbonyl-bis(benzene-4,1-diyl)-bis-(imino)-bis-benzenesulfonicacid)反應(yīng)產(chǎn)生復(fù)合物,呈現(xiàn)熒光峰值的變化(激發(fā)波長(zhǎng)400nm,散發(fā)波長(zhǎng)460nm),由此定量測(cè)定β1,3-D-葡聚糖合成酶的活性。產(chǎn)品內(nèi)容裂解液(ReagentA)毫升強(qiáng)化液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升底物液(ReagentD)微升終止液(ReagentE)微升反應(yīng)液(ReagentF)毫升稀釋液(ReagentG)微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentF)避免光照;終止液(ReagentE)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月1[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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真菌/酵母細(xì)胞β1,3- D-葡聚糖合成酶活性定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途真菌/酵母細(xì)胞β1,3-D-葡聚糖合成酶活性定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過β1,3-D-葡聚糖合成酶反應(yīng)系統(tǒng)中尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖底物聚合成葡聚糖,與熒光染料結(jié)合產(chǎn)生熒光峰值的變化,來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種真菌或酵母細(xì)胞株裂解懸液中β1,3-D-葡聚糖合成酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,具有高通量特點(diǎn)。技術(shù)背景真菌/酵母細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)具有豐富的糖蛋白外層和碳水化合物內(nèi)層,包括(1,3)-β-D,(1,6)-β-D和(1,3)-α-D-葡聚糖(glucan)。其中(1,3)-β-D為主要元素。1,3-β-D-葡聚糖合成酶(1,3-β-D-glucansynthase;GS;EC.2.4.1.34),又稱為尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖:1,3-β-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucose:1,3-β-glucosyltransferase),催化以尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖(UDP-glucose)為底物,通過1,3-β鏈接聚合為葡聚糖的反應(yīng),構(gòu)成真菌/酵母細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中主要碳水化合物成分1,3-β-D-葡聚糖,為細(xì)胞生長(zhǎng)所必需。1,3-β-D-葡聚糖合成酶具有兩種結(jié)構(gòu)體:1個(gè)調(diào)節(jié)亞體,GTPaseRho1p和4個(gè)催化亞體,Bgs1p-4p或Fksp。(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶成為抗真菌藥物,例如卡泊芬凈(caspofungi)等的靶標(biāo)。基于底物UDP-glucose在葡聚糖合成酶的催化下,聚合成(1,3)-β-D-葡聚糖產(chǎn)物,與苯胺藍(lán)(Anilineblue;4,4-(carbonyl-bis(benzene-4,1-diyl)-bis-(imino)-bis-benzenesulfonicacid)反應(yīng)產(chǎn)生復(fù)合物,呈現(xiàn)熒光峰值的變化(激發(fā)波長(zhǎng)400nm,散發(fā)波長(zhǎng)460nm),由此定量測(cè)定β1,3-D-葡聚糖合成酶的活性。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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昆蟲針選購(gòu)指南
- 昆蟲針選購(gòu)指南[詳細(xì)]
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2015-04-25 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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昆蟲的采集
- 昆蟲的采集[詳細(xì)]
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2014-04-02 00:00
其它
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昆蟲蛋白提取試劑盒
- 昆蟲蛋白提取試劑盒產(chǎn)品組成:產(chǎn)品組成HL-3126-1HL-3126-2規(guī)格50T100T昆蟲蛋白提取液25ml50ml蛋白穩(wěn)定劑200ul400ul蛋白酶YZ劑混合物100ul200ul注:1、蛋白提取液:含多種有效成分,可以充分蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。提取液中已含磷酸酶YZ劑混合物。2、蛋白酶YZ劑混合物:包含7種獨(dú)立的蛋白酶YZ劑,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64、EDTA。注意:1、蛋白酶YZ劑混合物避免反復(fù)凍融。2、如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,蛋白酶YZ劑混合物不可以一次全部加入提取液。儲(chǔ)存條件:蛋白酶YZ劑-20℃保存;蛋白穩(wěn)定劑、蛋白提取液室溫保存。有效期:一年。注意事項(xiàng):1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或ZL。2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。4、**使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。5、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。產(chǎn)品簡(jiǎn)介:昆蟲組織蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲類細(xì)胞、組織中提取總蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便,可在1小時(shí)內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶YZ劑混合物,阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。產(chǎn)品特點(diǎn):1、使用方便,從昆蟲類細(xì)胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。2、將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。3、含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。4、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。5、蛋白酶YZ劑YZ了蛋白的降解,蛋白酶YZ劑配方優(yōu)化。蛋白酶YZ劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶YZ劑;每一種YZ劑可特異性YZ某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以YZ幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。試劑盒以外自備試劑和儀器1、移液器、吸頭2、離心機(jī)及離心管3、渦旋振蕩器4、冰箱,冰盒使用方法:使用注意事項(xiàng):旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。蛋白酶YZ劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶YZ劑單品。Western實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubulin。更多蛋白提取常見問題分析等資料可以聯(lián)系本公司索取。提取液制備:每500ul冷的昆蟲蛋白提取液中加入2ul蛋白酶YZ劑混合物,4ul蛋白穩(wěn)定劑,混勻后置冰上備用。取100mg昆蟲組織樣本剪碎①,加入昆蟲蛋白提取液?;靹蚝?,在4℃條件下振蕩15-20分鐘。在4℃,14000rpm條件下離心15分鐘??焖賹⑸锨逦肓硪活A(yù)冷的干凈離心管,即可得到昆蟲總蛋白。將上述蛋白提取物定量②后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)③。注:①用液氮研磨的方法更佳,具體方法可以聯(lián)系本公司索取詳細(xì)資料。②建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。③蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被細(xì)菌污染。[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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昆蟲的飼養(yǎng)
- 昆蟲的飼養(yǎng)[詳細(xì)]
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2024-09-28 01:25
其它
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大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)說明書定性
- www.biokanu.com大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血液,血清及相關(guān)液體樣本中膽固醇合成酶(HMG-COA)水平。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)。用純化的大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中膽固醇合成酶(HMG-COA)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的膽固醇合成酶(HMG-COA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)存在與否。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存陰性對(duì)照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存陽性對(duì)照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。結(jié)果判定:試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為膽固醇合成酶(HMG-COA)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為膽固醇合成酶(HMG-COA)陽性注意事項(xiàng)1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請(qǐng)避光保存。6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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昆蟲羧酸酯酶(CES)ELISA試劑盒說明書
- 昆蟲羧酸酯酶(CES)ELISA試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中昆蟲羧酸酯酶(CES)水平。用純化的昆蟲羧酸酯酶(CES)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入羧酸酯酶(CES),再與HRP標(biāo)記的羧酸酯酶(CES)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的羧酸酯酶(CES)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中昆蟲羧酸酯酶(CES)活性濃度。昆蟲羧酸酯酶(CES)ELISA試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(200U/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。昆蟲羧酸酯酶(CES)ELISA試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。100U/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50U/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25U/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12.5U/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6.25U/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測(cè)樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。昆蟲羧酸酯酶(CES)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照昆蟲羧酸酯酶(CES)ELISA試劑盒說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-22 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶活性酶連續(xù)循環(huán)光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶活性酶連續(xù)循環(huán)光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)胞長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶(LONG-CHAINACYLCOASYNTHETASE;LACS)活性酶連續(xù)循環(huán)光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用光度法來測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體等)長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景脂肪酸β氧化過程(β-oxidation)在動(dòng)物組織的線粒體發(fā)生的脂肪酸代謝通路,可概括為活化、轉(zhuǎn)移、β氧化及Z后經(jīng)三羧酸循環(huán)被徹底氧化生成CO2和H2O,并釋放能量等四個(gè)階段。脂酰輔酶A合成酶(acylcoAsynthetase;EC.6.2.1.3),又稱為脂肪酸硫激酶(fattyacidthiokinase)或脂酰輔酶A連接酶(acylcoAligase),是脂肪酸進(jìn)入β-氧化前的活化所必需:在ATP、CoA-SH、Mg2+存在下,催化飽和或不飽和直鏈脂肪酸分子(C4)連接輔酶A合成相應(yīng)的脂酰輔酶A。其為一高能化合物,水溶性增強(qiáng),提高代謝活性。當(dāng)脂肪酸進(jìn)入細(xì)胞后,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體外膜上先被活化,形成脂酰輔酶A衍生物,然后再進(jìn)入線粒體內(nèi)氧化。脂酰輔酶A合成酶分成三種底物特異性的種類:小于4個(gè)碳(C4)的短鏈脂酰輔酶A合成酶(acetyl-CoAsynthetase),介于4至12個(gè)碳(C4-C12)的中鏈脂酰輔酶A合成酶(butyryl-CoAsynthetase),和大于12個(gè)碳(C12)的長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶(palmitoylCoAsynthetase)?;陂L(zhǎng)鏈脂肪酸棕櫚酸(palmitate)和輔酶A在長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶的作用下,產(chǎn)生棕櫚酰輔酶A(palmitoyl-CoA)后,通過肌激酶(myokinase)、丙酮酸激酶(pyruvatekinase)和乳酸脫氫酶(lacticdehydrogenase)系統(tǒng),測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)的變化(340nm波長(zhǎng)),來定量分析長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶的活性。長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)為:Long-chainacylcoAsynthetasepalmitate+CoA+ATP→palmitoyl-CoA+AMP+PPimyokinaseAMP+ATP→2ADPpyruvatekinase2ADP+2phosphoenolpyruvate→2ATP+2pyruvatelacticdehydrogenase2pyruvate+2β-NADH→2lactate+2β-NAD+產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)120毫升裂解液(ReagentB)10毫升緩沖液(ReagentC)5毫升反應(yīng)液(ReagentD)500微升酶促液(ReagentE)250微升底色液(ReagentF)250微升陰性液(ReagentG)250微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentD)、酶促液(ReagentE)和底色液(ReagentF)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底色液(ReagentF)避免光照;有效保證6月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器細(xì)胞刮脫棒:用于脫離貼壁細(xì)胞(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備200微升1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于光度分析實(shí)驗(yàn)步驟樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞(1至5X106細(xì)胞)小心加入3毫升清理液(ReagentA),覆蓋生長(zhǎng)表面小心抽去清理液使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞(注意:可以使用胰酶消化)加入3毫升清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開始)放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入500微升裂解液(ReagentB),充分混勻轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里孵育30分鐘放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作測(cè)定準(zhǔn)備開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長(zhǎng)340nm,間隔5分鐘,讀數(shù)3次(共15分鐘),并置零從-20℃冰箱里取出試劑,置于冰槽里融化;反應(yīng)液(ReagentD)和底色液(ReagentF)避免光照緩沖液(ReagentC)室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取195微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入25微升反應(yīng)液(ReagentD)加入12.5微升酶促液(ReagentE)加入12.5微升底色液(ReagentF)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入5微升陰性液(ReagentG)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照(0分鐘讀數(shù)-15分鐘讀數(shù))樣品測(cè)定移取195微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入25微升反應(yīng)液(ReagentD)加入12.5微升酶促液(ReagentE)加入12.5微升底色液(ReagentF)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入5微升待測(cè)樣品(20微克蛋白)(注意:樣品須清澈)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)(0分鐘讀數(shù)-15分鐘讀數(shù))五、計(jì)算樣品活性[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X0.25(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷[0.005(樣品容量;毫升)X6.22(毫摩爾吸光系數(shù))X15(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)X2]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾棕櫚酰輔酶A/分鐘酶標(biāo)儀測(cè)定在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品分別移取195微升緩沖液(ReagentC)到96孔板里分別加入25微升反應(yīng)液(ReagentD)分別加入12.5微升酶促液(ReagentE)分別加入12.5微升底色液(ReagentF)輕輕搖動(dòng)96孔板在25℃溫度下孵育3分鐘分別加入5微升陰性液(ReagentG)或待測(cè)樣品(20微克蛋白)到相應(yīng)孔里(注意:樣品須清澈)輕輕搖動(dòng)96孔板即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):0分鐘讀數(shù)和15分鐘讀數(shù)活性計(jì)算:[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)X0.25(體系容量;毫升)]÷[0.005(樣品容量;毫升)X6.22(毫摩爾吸光系數(shù))X0.6(光徑距離;厘米)X15(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)X2]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾棕櫚酰輔酶A/分鐘注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作過程中,背景測(cè)定只需1次建議使用比色皿測(cè)定樣品須澄清,至關(guān)重要加樣后3秒內(nèi)光度測(cè)定測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定可持續(xù)15分鐘光度測(cè)定后,比色皿須清洗徹底樣本測(cè)定0分鐘讀數(shù)高于15分鐘讀數(shù)表明具有酶活性建議待測(cè)樣本蛋白濃度為20微克/5微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶單位活性定義為:在25℃,pH8.1條件下,每分鐘內(nèi)能夠合成1微摩爾棕櫚酰輔酶A所需的酶量作為一個(gè)活性單位本公司提供系列脂肪酸代謝檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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