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氯霉素檢測試劑盒哪家好?

本文由 潤裕試劑(上海)有限公司 整理匯編

2018-11-23 10:00 325閱讀次數(shù)

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氯霉素檢測試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)1原理及用途本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)組織、畜禽組織、肝臟、蛋類、蜂蜜、牛奶及飼料等樣本中的氯霉素藥物(Chloramphenicol,CAP),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的氯霉素藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含氯霉素藥物含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中氯霉素藥物的殘留量。2技術(shù)指標(biāo)2.1試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)2.2反應(yīng)模式:25℃,30min~30min~15min2.3檢測下限:組織、肝臟、蜂蜜、牛奶……………0.025ppb蛋類……………………………………0.1ppb尿液、血清、腸衣、飼料、奶粉……0.05ppb2.4交叉反應(yīng)率:氯霉素…………………………………1**%甲砜霉素、氟甲砜霉素………………<0.1%2.5樣本回收率:組織、肝臟……………………………85%±20%蜂蜜、腸衣……………………………85%±25%牛奶、飼料……………………………75%±25%尿液、血清……………………………70%±20%3試劑盒組成酶標(biāo)板……………………………96孔標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):100ppb………1ml酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml底物液A(白蓋)……………………6ml底物液B(黑蓋)……………………6ml終止液(黃蓋)………………………6ml20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml2X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml說明書………………………………1份4需要的器材和試劑4.1儀器:酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)4.2微量移液器:單道20l-200l,100l-1000l、多道300l4.3試劑:乙酸乙酯、正己烷、乙腈、醋酸鈉、醋酸、亞硝基鐵(K2Fe(CN)5(NO)2H2O)、葡萄糖苷酸酶、硫酸鋅(ZnSO47H2O)5樣本前處理5.1樣本處理前須知:實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。5.2配液:配液1:0.36M亞硝基鐵溶液(牛奶、奶粉樣本)11.9g亞硝基鐵加去離子水至100ml溶解。配液2:1.04M硫酸鋅溶液(牛奶、奶粉樣本)29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。配液3:0.1MpH4.8醋酸鈉緩沖液(尿液樣本)2.4g醋酸鈉加去離子水500ml溶解,加1.2ml醋酸混勻。配液4:乙腈-水溶液V乙腈:V水=84:16配液5:復(fù)溶液將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。5.3樣本前處理步驟:5.3.1組織、魚、蝦、肝臟樣本處理方法1)稱取均質(zhì)后的樣本3±0.05g于50ml離心管中,先加入3ml去離子水振蕩混勻,再加入6ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體2ml在50-60℃下氮氣吹干;3)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入0.5ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):0.5檢測下限:0.025ppb5.3.2血清、血漿樣本處理方法1)取1ml血清或血漿至離心管中,加入2ml乙酸乙酯振蕩1分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,或靜置使水相與有機相分離;2)取全部上層液體在50-60℃下氮氣吹干;3)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入1ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb5.3.3尿液樣本處理方法1)取2ml尿液至離心管中,加入0.1MpH4.8醋酸鈉緩沖液0.5ml混合,加40ul葡萄糖苷酸酶,混勻,37℃水解2小時以上(或過夜);2)將上述溶液恢復(fù)至室溫后加入8ml乙酸乙酯振蕩1分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取4ml上層液體在50-60℃下氮氣吹干;3)用1ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;4)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb5.3.4蜂蜜樣本處理方法1)取2±0.05g蜂蜜于離心管中,用4ml去離子水溶解,加入4ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體2ml在50-60℃下氮氣吹干;3)用0.5ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;4)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):0.5檢測下限:0.025ppb(檢測下限0.025ppb,定量下限0.1ppb,因某些樣本有干擾建議以0.1ppb作為陽性判定值)5.3.5腸衣樣本處理方法1)腸衣經(jīng)清洗后均質(zhì),稱取均質(zhì)后的樣本1±0.05g于50ml離心管中,加入10ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體5ml在50-60℃下氮氣吹干;3)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入0.5ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb5.3.6牛奶樣本處理方法1)將牛奶樣本15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,去除上層脂肪,取5ml去脂肪奶樣于50ml離心管中,加250ul亞硝基鐵溶液(配液1)振蕩混合30秒,加250ul硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合30秒,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體2.2ml(相當(dāng)于2ml鮮奶)于另一離心管中,加入4ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;3)取上層液體2ml在50-60℃下氮氣吹干;4)用0.5ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;5)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):0.5檢測下限:0.025ppb(檢測下限0.025ppb,定量下限0.05ppb,因某些樣本有干擾建議以0.15ppb作為陽性判定值)5.3.7奶粉樣本處理方法1)取2±0.05g奶粉于50ml離心管中,用10ml去離子水溶解,加入1ml亞硝基鐵溶液(配液1)和1ml硫酸鋅溶液(配液2)振蕩混合,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體3.6ml(相當(dāng)于0.6g奶粉)于另一離心管中,加入6ml乙酸乙酯振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;3)取上層液體4ml在50-60℃下氮氣吹干;4)用0.4ml復(fù)溶液溶解干燥的殘渣,混勻;5)取50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb(檢測下限0.05ppb,定量下限0.15ppb,因某些樣本有干擾建議以0.15ppb作為陽性判定值)5.3.8蛋類樣本處理方法1)取3±0.05g均質(zhì)的蛋類樣本于50ml離心管中,加9ml乙腈-水溶液振蕩混合2分鐘,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體3ml于另一離心管中,加入3ml去離子水,再加4.5ml乙酸乙酯振蕩1分鐘,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;3)取全部上層液體在50-60℃下氮氣吹干;4)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入2ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):2檢測下限:0.1ppb(檢測下限0.1ppb,定量下限0.3ppb)5.3.9飼料樣本處理方法1)取2±0.05g均質(zhì)的飼料于50ml離心管中,用2ml去離子水溶解,再加入6ml乙酸乙酯振蕩2分鐘,15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;2)取上層液體3ml載50-60℃下氮氣吹干;3)用1ml正己烷溶解干燥的殘渣,再加入1ml復(fù)溶液,混合30秒,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;4)去除上層有機相,取下層水相50μl進(jìn)行分析。樣本稀釋倍數(shù):1檢測下限:0.05ppb6酶聯(lián)免疫試驗步驟將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。實驗開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。6.1編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。6.2加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50l/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50l/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光反應(yīng)30分鐘。6.3洗滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250l/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,Z后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。6.4加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100l/孔,25℃避光反應(yīng)30分鐘。6.5洗滌:同上6.6顯色:加底物液A50l/孔,再加底物液B50l/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。6.7終止:每孔加入終止液50l,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。6.8測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。7結(jié)果分析7.1百分吸光率的計算標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以**個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以1**%,即百分吸光度值(%)=A×1**%A0A標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值A(chǔ)00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值7.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索?。?注意事項8.1室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。8.2在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。8.3混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。8.4在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。8.5不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。8.6顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。8.7反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。9貯藏及保存期儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。保質(zhì)期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

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