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一種快速、高通量的病毒中和抗體檢測方法
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本文由 美谷分子儀器（上海）有限公司 整理匯編
2024-09-29 08:21 490閱讀次數(shù)
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一種快速、高通量的病毒中和抗體檢測方法
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一種快速、高通量的病毒中和抗體檢測方法- 新冠病毒的出現(xiàn)導(dǎo)致了世界范圍內(nèi)的新冠大流行，為了理解病毒的發(fā)病機(jī)理并開發(fā)疫苗，亟需快速開發(fā)多種研究工具。檢測病毒感染和疫苗接種后的免疫反應(yīng)對新冠病毒的研究十分重要。由于中和抗體是免疫反應(yīng)和疫苗效價(jià)的關(guān)鍵生物標(biāo)志物，患者血清樣本中的中和性抗體水平是用于監(jiān)測有效性的重要參數(shù)。
人體血清中和抗體的鑒定常使用傳統(tǒng)方法例如蝕斑減少中和試驗(yàn) (PRNT) 來檢測。然而，該方法使用活的、具備感染性的病毒加入到靶細(xì)胞中，所以需要生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室以及耗時(shí)費(fèi)力的細(xì)胞培養(yǎng)。數(shù)據(jù)結(jié)果的分析耗費(fèi)時(shí)間并且不能自動(dòng)化。此外，假病毒中和試驗(yàn) (pVNT) 方法使用改良型的病毒，可以在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室完成，但此方法需要細(xì)胞培養(yǎng)和熒光成像來測得中和抗體活性，因此，也不適用于樣品的高通量篩選。[詳細(xì)]
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2022-03-23 16:41
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2024-09-11 17:48
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2016-07-26 00:00
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2024-09-28 01:07
期刊論文
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豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書- 豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書1符合率試驗(yàn)PCV2ELISA與間接免疫熒光檢測方法（IIF）的比較由上表結(jié)果顯示ELISA方法陽性檢出率為63.3%,陰性檢出率為36.7%；而用豬2型圓環(huán)病毒間接免疫熒光試驗(yàn)陽性檢出率為59.2%,陰性檢出率為40.8%。其中兩種方法檢測陽性符合率為90.3%,陰性符合率為94.4%，總符合率為91.8%。表明ELISA在測定抗體效價(jià)時(shí)較為敏感。注：間接免疫熒光檢測方法（IIF）是實(shí)驗(yàn)室檢測圓環(huán)病毒經(jīng)典方法。PCV2ELISA與荷蘭塞迪的捕獲ELISA試劑盒（商品化）的比較用PCV2ELISA試劑盒檢測117份豬血清，結(jié)果陽性率為72.65%，陰性率為28.35%。對比國外試劑盒檢測結(jié)果，陽性率為70.94%，陰性率為29.06%。陽性符合率為64.96%，陰性復(fù)核率為21.37%，總符合率為86.32%。注；荷蘭塞迪的捕獲ELISA試劑盒（商品化）在國內(nèi)使用的比較少，其效果還有待驗(yàn)證。豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書使用說明書【簡介】試劑盒由抗原包被的微孔板，酶標(biāo)羊抗豬IgG及其它試劑制成，應(yīng)用間接ELISA原理檢測豬血清中抗Ⅱ型圓環(huán)病毒ORF2蛋白的抗體?！居猛尽控i圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測診斷試劑盒用于檢測豬血清中抗Ⅱ型圓環(huán)病毒ORF2蛋白的抗體。評估豬場圓環(huán)病疫苗免疫狀況。感染豬的血清學(xué)診斷。【原理】本試劑盒是采用豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的工程表達(dá)產(chǎn)物包被微孔板，在試驗(yàn)中，加入稀釋的對照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有抗豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白特異性抗體，則將與檢測板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與檢測板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長測定各反應(yīng)孔中的OD值?！驹噭┖兄饕煞帧?包被抗原的微孔板2塊（96孔/塊）2陰、陽性對照血清各1管（1ml/管）3羊抗豬酶標(biāo)二抗1瓶（30ml/瓶）420倍濃縮洗滌液1瓶（50ml/瓶）5底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6終止液1瓶（10ml/瓶）7樣品稀釋液1瓶（50ml/瓶）8血清稀釋板2塊（96孔/板）9說明書1張【樣品制備】取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血?！鞠礈煲号渲啤渴褂们?，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解（**在37℃水中加熱5-10min），然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋（例如：每板用20ml濃縮液加上380ml水），稀釋好的洗滌液在4℃可以存放7天?！緲悠废♂尅吭谘逑♂尠逯邪?：40的體積稀釋待檢血清（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清）。注意：陽性和陰性對照1：4稀釋，（180μl樣品稀釋液中加60μl對照血清，吹打均勻）?！咀⒁馐马?xiàng)】1試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用后放回2-8℃。2不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。3不要用口移液。4TMB（底物液B）不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。5檢測板拆封后避免受潮或沾水（未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，應(yīng)盡快置于2-8℃）。6待檢血清樣品數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)先使用血清稀釋板稀釋完所有要檢測血清，再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到檢測板，使反應(yīng)時(shí)間一致。7濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。8嚴(yán)格按照操作說明書可以獲得**的結(jié)果，操作過程中移液，定時(shí)和洗滌等的全過程必須極ng確。豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒說明書【操作步驟】1取檢測板（根據(jù)樣品多少可拆開分次使用），用稀釋好的洗滌液洗板2次（200l/孔）每次靜置2分鐘后倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。2取稀釋好的待檢樣品100μl加入到檢測板中；陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔，每孔100μl；輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。3甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，200μl/孔，每次靜置3分鐘倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。4每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl，置37℃溫育30分鐘。5洗滌5次,方法同3。切記每次在干凈吸水紙上拍干。6每孔先加底物液A一滴（50l）、再加底物液B一滴（50l），混勻，室溫（18℃-25℃）避光顯色10分鐘。7每孔加終止液1滴（50μl），10分鐘內(nèi)測定結(jié)果（檢測前在震蕩器上輕輕震動(dòng)一下）?！窘Y(jié)果判定】在酶標(biāo)儀上測各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對照孔平均OD630值大于或等于1.0，陰性對照孔平均OD630值必須小于0.3。樣品OD630值大于0.42，判為陽性；樣品OD630值在0.38到0.42之間，判為可疑；樣品OD630值小于0.38，判為陰性。注意：用620~650納米波長測定結(jié)果均有效。【貯存】2-8℃避光保存【有效期】6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
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2015-07-10 00:00
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- 離心機(jī)是利用離心力，分離液體與固體顆?；蛞后w與液體的混合物中各組分的機(jī)械。計(jì)量工作中需要對檢驗(yàn)檢疫、食品、醫(yī)藥、生化等行業(yè)使用的低速離心機(jī)進(jìn)行校準(zhǔn)。常規(guī)方法有利用加速度計(jì)和利用頻率計(jì)，文章討論了利用低速離心機(jī)“樣品容量不平衡容忍度”進(jìn)行校準(zhǔn)的方法，進(jìn)行了原理分析。[詳細(xì)]
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2018-07-30 11:35
標(biāo)準(zhǔn)
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- 基因組時(shí)代的高通量篩選方法
- 有多少miRNA功能性參與了腫瘤的發(fā)生，尤其是腫瘤轉(zhuǎn)移，文中系統(tǒng)的評價(jià)了所有的已知人類miRNA，那些能夠調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)細(xì)胞。開發(fā)了一種自組裝的細(xì)胞芯片，可通過高通量的檢測儀器-高內(nèi)涵，檢測miRNA對細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果表明，有超過20%的miRNA對多種細(xì)胞有調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移的功能。MiR-23b可YZ人結(jié)腸癌，有利調(diào)節(jié)體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移中的多種時(shí)期，包括腫瘤生長、入侵及血管生成。[詳細(xì)]
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2021-02-19 13:51
應(yīng)用文章
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- 【CEM MARS 6】快速、高效、高通量的土壤全氟化合物提取方法[詳細(xì)]
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2024-09-23 00:01
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2015-03-31 00:00
應(yīng)用文章
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2024-09-29 06:25
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2025-10-31 15:10
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2024-09-19 12:45
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2024-09-15 19:19
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2024-09-12 23:48
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- 一種更好地檢測電氣安全測試儀的方法
- 一種更好地檢測電氣安全測試儀的方法[詳細(xì)]
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