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細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法(HPLC)
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2018-11-08 10:00 1038閱讀次數(shù)
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主要用途細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量GX液相色譜法(HPLC)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)高氯酸酸性處理,堿性中和后,在GX液相色譜儀和紫外光度儀下(254nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出ATP、ADP或AMP波峰,以定量測(cè)定樣品中腺嘌呤核苷酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌樣品中ATP、ADP、AMP的含量檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景腺嘌呤核苷酸(adeninenucleotides),簡(jiǎn)稱腺苷,包括單磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷,是一種單體單位,為核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)的組成成分,并提供化學(xué)能量,在能量代謝通路中維護(hù)諸如肌肉、胞膜等組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生化和生理功能,調(diào)節(jié)細(xì)胞糖酵解、三羧酸循環(huán)、電子傳遞系統(tǒng)、氧化磷酸化活動(dòng)。腺嘌呤核苷酸在細(xì)胞中濃度低,且不穩(wěn)定,通常通過(guò)其類型不同、濃度差異、分布狀況,來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的代謝情況和能量狀態(tài)。單磷酸腺苷(Adenosinemonophosphate;AMP),又稱為5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸(5'-adenylicacid),是一種在(脫氧)核糖核酸中發(fā)現(xiàn)的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯,并由磷酸基團(tuán)、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。分子式為C10H14N5O7P,分子量347。AMP可以通過(guò)腺苷酸激酶(adenylatekinase)催化2分子ADP生成,或通過(guò)ATP以及ADP水解產(chǎn)生。AMP常以腺苷-3',5'-環(huán)化一磷酸(cAMP)形式存在于細(xì)胞中。AMP與ATP之比反映細(xì)胞ATP生成狀況以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷(adenosinediphosphate;ADP),參與ADP-ATP循環(huán),提供熱能轉(zhuǎn)換和動(dòng)態(tài)平衡。三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate;ATP)存在于所有代謝活躍的細(xì)胞內(nèi),是細(xì)胞活力的標(biāo)志。一旦細(xì)胞凋亡或壞死,ATP濃度急遽下降。通過(guò)高氯酸酸性處理,排除蛋白質(zhì)干擾,堿性中和后,在GX液相色譜儀和紫外光度儀下(254nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出ATP、ADP、AMP波峰,以定量其含量。產(chǎn)品內(nèi)容酸性液(ReagentA)毫升中和液(ReagentB)毫升流相液A(ReagentC)毫升流相液B(ReagentD)毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;GENMED酸性液(ReagentA)和GENMED中和液(ReagentB)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月
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細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法(HPLC)
- 主要用途細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量GX液相色譜法(HPLC)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)高氯酸酸性處理,堿性中和后,在GX液相色譜儀和紫外光度儀下(254nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出ATP、ADP或AMP波峰,以定量測(cè)定樣品中腺嘌呤核苷酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌樣品中ATP、ADP、AMP的含量檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景腺嘌呤核苷酸(adeninenucleotides),簡(jiǎn)稱腺苷,包括單磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷,是一種單體單位,為核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)的組成成分,并提供化學(xué)能量,在能量代謝通路中維護(hù)諸如肌肉、胞膜等組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生化和生理功能,調(diào)節(jié)細(xì)胞糖酵解、三羧酸循環(huán)、電子傳遞系統(tǒng)、氧化磷酸化活動(dòng)。腺嘌呤核苷酸在細(xì)胞中濃度低,且不穩(wěn)定,通常通過(guò)其類型不同、濃度差異、分布狀況,來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的代謝情況和能量狀態(tài)。單磷酸腺苷(Adenosinemonophosphate;AMP),又稱為5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸(5'-adenylicacid),是一種在(脫氧)核糖核酸中發(fā)現(xiàn)的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯,并由磷酸基團(tuán)、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。分子式為C10H14N5O7P,分子量347。AMP可以通過(guò)腺苷酸激酶(adenylatekinase)催化2分子ADP生成,或通過(guò)ATP以及ADP水解產(chǎn)生。AMP常以腺苷-3',5'-環(huán)化一磷酸(cAMP)形式存在于細(xì)胞中。AMP與ATP之比反映細(xì)胞ATP生成狀況以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷(adenosinediphosphate;ADP),參與ADP-ATP循環(huán),提供熱能轉(zhuǎn)換和動(dòng)態(tài)平衡。三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate;ATP)存在于所有代謝活躍的細(xì)胞內(nèi),是細(xì)胞活力的標(biāo)志。一旦細(xì)胞凋亡或壞死,ATP濃度急遽下降。通過(guò)高氯酸酸性處理,排除蛋白質(zhì)干擾,堿性中和后,在GX液相色譜儀和紫外光度儀下(254nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出ATP、ADP、AMP波峰,以定量其含量。產(chǎn)品內(nèi)容酸性液(ReagentA)毫升中和液(ReagentB)毫升流相液A(ReagentC)毫升流相液B(ReagentD)毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存GENMED標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;GENMED酸性液(ReagentA)和GENMED中和液(ReagentB)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量高效液相色譜法試劑盒說(shuō)明書(shū)
- 細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量GX液相色譜法(HPLC)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)主要用途細(xì)菌ATP/ADP/AMP含量GX液相色譜法(HPLC)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)高氯酸酸性處理,堿性中和后,在GX液相色譜儀和紫外光度儀下(254nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出ATP、ADP或AMP波峰,以定量測(cè)定樣品中腺嘌呤核苷酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌樣品中ATP、ADP、AMP的含量檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景腺嘌呤核苷酸(adeninenucleotides),簡(jiǎn)稱腺苷,包括單磷酸腺苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷,是一種單體單位,為核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)的組成成分,并提供化學(xué)能量,在能量代謝通路中維護(hù)諸如肌肉、胞膜等組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生化和生理功能,調(diào)節(jié)細(xì)胞糖酵解、三羧酸循環(huán)、電子傳遞系統(tǒng)、氧化磷酸化活動(dòng)。腺嘌呤核苷酸在細(xì)胞中濃度低,且不穩(wěn)定,通常通過(guò)其類型不同、濃度差異、分布狀況,來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的代謝情況和能量狀態(tài)。單磷酸腺苷(Adenosinemonophosphate;AMP),又稱為5'-腺嘌呤核苷酸或腺苷酸(5'-adenylicacid),是一種在(脫氧)核糖核酸中發(fā)現(xiàn)的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯,并由磷酸基團(tuán)、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。分子式為C10H14N5O7P,分子量347。AMP可以通過(guò)腺苷酸激酶(adenylatekinase)催化2分子ADP生成,或通過(guò)ATP以及ADP水解產(chǎn)生。AMP常以腺苷-3',5'-環(huán)化一磷酸(cAMP)形式存在于細(xì)胞中。AMP與ATP之比反映細(xì)胞ATP生成狀況以及脂肪酸氧化程度。二磷酸腺苷(adenosinediphosphate;ADP),參與ADP-ATP循環(huán),提供熱能轉(zhuǎn)換和動(dòng)態(tài)平衡。三磷酸腺苷(Adenosinetriphosphate;ATP)存在于所有代謝活躍的細(xì)胞內(nèi),是細(xì)胞活力的標(biāo)志。一旦細(xì)胞凋亡或壞死,ATP濃度急遽下降。通過(guò)高氯酸酸性處理,排除蛋白質(zhì)干擾,堿性中和后,在GX液相色譜儀和紫外光度儀下(254nm波長(zhǎng))檢測(cè)分析,分離出ATP、ADP、AMP波峰,以定量其含量。產(chǎn)品內(nèi)容酸性液(ReagentA)毫升中和液(ReagentB)毫升流相液A(ReagentC)毫升流相液B(ReagentD)毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;酸性液(ReagentA)和中和液(ReagentB)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器4℃(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作GX液相色譜儀(HPLC):用于定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)細(xì)菌樣品進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù):在分光光度儀上測(cè)定OD600或直接計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為10000g(或10000RPM,例如eppendorf5415)小心抽去上清液,保留沉淀顆粒加入XX微升預(yù)冷的酸性液(ReagentA)渦旋震蕩1分鐘轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)再次離心10分鐘,速度為6000g小心移取上清液到新的1.5毫升離心管加入XX微升中和液(ReagentB),充分混勻置于冰槽里靜置30分鐘即刻移入上清液到新的1.5毫升離心管(注意:避免移取沉淀顆粒)放進(jìn)-70℃冰箱里保存或置于冰槽里待測(cè)二、測(cè)定準(zhǔn)備開(kāi)啟儀器預(yù)熱15分鐘根據(jù)下表設(shè)置GX液相色譜儀(HPLC)參數(shù)參數(shù)推薦補(bǔ)充說(shuō)明色譜柱長(zhǎng)度:25cm直徑:4.6mmWaters儀器或Agilent儀器固定相ODS流動(dòng)相流相液A(ReagentC)和流相液B(ReagentD)參見(jiàn)運(yùn)行程序流速1.3毫升/分鐘注射容量50微升10微升至100微升檢測(cè)紫外波長(zhǎng)254nm柱溫25℃出峰時(shí)間(retention)5.6分鐘(ATP);6.5分鐘(ADP);10分鐘(AMP)參考運(yùn)行時(shí)間15分鐘參考運(yùn)行程序運(yùn)行時(shí)段程序時(shí)間開(kāi)機(jī)后預(yù)運(yùn)行XX流相液A(ReagentC)總10分鐘檢測(cè)運(yùn)行時(shí)段XX流相液A(ReagentC)XX流相液B(ReagentD)0至9分鐘XX流相液A(ReagentC)至XX流相液A(ReagentC)XX流相液B(ReagentD)至XX流相液B(ReagentD)9至15分鐘關(guān)機(jī)前運(yùn)行XX流相液A(ReagentC)XX流相液B(ReagentD)總10分鐘標(biāo)準(zhǔn)樣品配制準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號(hào)管分別加入XX微升流相液A(ReagentC)到1至5號(hào)管移取XX微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到1號(hào)管,混勻小心移取XX微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到2號(hào)管,混勻小心移取XX微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到3號(hào)管,混勻小心移取XX微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到4號(hào)管,混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表管號(hào)流相液A(ReagentC)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)標(biāo)準(zhǔn)ATP/ADP/AMP濃度1XX微升XX微升XX微摩爾/升2XX微升XX微升1號(hào)管XX微摩爾/升3XX微升XX微升2號(hào)管XX微摩爾/升4XX微升XX微升3號(hào)管XX微摩爾/升5XX微升00四、色譜分析將上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)和待測(cè)樣品放進(jìn)冰槽里等待每次(每個(gè)樣品)注射50微升按照檢測(cè)運(yùn)行程序每次(每個(gè)樣品)運(yùn)行15分鐘獲得色譜波峰圖:波峰面積(peakarea)或峰值,保存記錄注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作,包括標(biāo)準(zhǔn)液操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作過(guò)程中,標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定只需1次試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋或使用封口膜酸性液(ReagentA)和中和液(ReagentB)具有腐蝕性,注意操作安全建議使用流相液A(ReagentC)作為陰性對(duì)照或作為基準(zhǔn)線色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達(dá)均衡等將導(dǎo)致異常波峰、時(shí)間偏移等用戶可以使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)加入到樣品中,然后進(jìn)行萃取,檢測(cè)回收率(recovery)腺嘌呤核苷酸的出峰時(shí)間(retention)以用戶操作時(shí),使用的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)實(shí)際出峰為準(zhǔn)用戶可以根據(jù)要求,計(jì)算實(shí)際濃度為:納摩爾/毫升、納摩爾/毫克蛋白等如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低,可以調(diào)整樣品濃度腺嘌呤核苷酸HPLC的參考圖譜如下:[詳細(xì)]
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