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激素六項(xiàng)之黃體生成素(LH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
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本文由 深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司 整理匯編
2018-11-14 10:00 568閱讀次數(shù)
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Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4黃體生成素(LH)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA-1289)1、應(yīng)用范圍DRG公司的LH酶聯(lián)免疫吸附試劑盒可用于血清中黃體生成素(LH)的定量檢測(cè)。此檢測(cè)試劑盒僅供體外診斷用。2、前言說(shuō)明在受到下丘腦釋放的黃體生成素釋放激素(LH-RH或者Gn-RH)的影響下,男性和女性的垂體前葉都可以產(chǎn)生LH(黃體生成素)。在男性中,LH也叫做促間質(zhì)細(xì)胞激素(ICSH),它是一種分子量大約為30000道爾頓的糖蛋白。它是由兩條不同的氨基酸鏈通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合形成的復(fù)合物,一條α鏈,一條β鏈。α鏈與在人促甲狀腺激素(TSH)、卵泡刺激素(FSH)和人絨毛膜促性腺激素中找到的α鏈糖蛋白類似。這些激素的不同主要是由于他們?chǔ)骆湹陌被峤M成不同所造成的,這也使它們產(chǎn)生了不同的免疫學(xué)功能。男性中LH的分泌是間歇性的,它的基本功能是刺激間質(zhì)細(xì)胞(萊迪希細(xì)胞)分泌睪酮。婦女體內(nèi)LH濃度的變化會(huì)受到正常月經(jīng)復(fù)雜排卵循環(huán)的影響,這也依賴于沿性腺-下丘腦-垂體軸的一系列激素活動(dòng)。排卵前孕酮和雌二醇水平的降低啟動(dòng)了每一個(gè)月經(jīng)周期。隨著激素水平的降低,下丘腦就增加促性腺激素釋放激素(GnRF)的分泌,它可依次刺激垂體增加FSH的生產(chǎn)和分泌。增加的FSH水平在卵泡階段可刺激一些卵泡的成熟,其中的一個(gè)卵泡就會(huì)成熟為含卵子的卵泡。隨著卵泡的發(fā)育,雌二醇就開(kāi)始分泌,剛開(kāi)始時(shí)很慢,但經(jīng)過(guò)12或13天的正常循環(huán)后它就開(kāi)始迅速增加。因?yàn)榇贵w的直接刺激和增加的GnRF和FSH水平,雌二醇的就開(kāi)始迅速增加,隨之LH就開(kāi)始釋放了。而這些事件正好組成了排卵前期。在LH達(dá)到Z高水平后,排卵作用大約會(huì)持續(xù)12到18個(gè)小時(shí)。排卵后就會(huì)形成可分泌孕酮和雌激素(這兩種激素是LH的兩個(gè)反饋調(diào)節(jié)物)的黃體。黃體期迅速的緊隨排卵期而來(lái),黃體期明顯表現(xiàn)為高孕酮水平,雌二醇第二增加,低LH和FSH水平。低LH和FSH水平是沿下丘腦-垂體軸雌二醇和孕酮負(fù)反饋反應(yīng)的結(jié)果。受孕后,胚胎的發(fā)育可產(chǎn)生hCG,hCG使得黃體繼續(xù)產(chǎn)生孕酮和雌二醇。如果沒(méi)有受孕,黃體就會(huì)退化,相應(yīng)的孕酮和雌二醇水平就會(huì)降低,從而導(dǎo)致了月經(jīng)的形成。隨著這些激素低激素水平的形成,下丘腦就又再次開(kāi)始一月經(jīng)周期患性腺機(jī)能退減的病人,其血清LH的濃度會(huì)增加。由于卵巢的發(fā)育不成熟、原發(fā)性的卵巢功能衰竭、多囊卵巢疾病或絕經(jīng)等原因,女性體內(nèi)類固醇激素的分泌會(huì)減少,而且在這些情況下,LH的分泌沒(méi)有受到調(diào)節(jié)。在男性中,但睪丸發(fā)育不正?;虼嬖跓o(wú)睪畸形時(shí),也同樣會(huì)失去調(diào)節(jié)激素。在原發(fā)性睪丸衰竭和克氏綜合征患者中,盡管在雄性激素持續(xù)分泌的情況下LH濃度沒(méi)有必要提高,但我們也可發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)存在著高濃度的LH。在腎衰竭、肝硬化、甲狀腺功能亢進(jìn)和嚴(yán)重饑餓的情況下,LH的濃度也可出現(xiàn)提高。垂體前葉激素的分泌不足也可能導(dǎo)致低LH水平。正如人們所預(yù)測(cè)的,低LH水平可能導(dǎo)致男性和女性不育。雖然LH的低水平在垂體前葉對(duì)GnTH刺激反應(yīng)失效的情況下也會(huì)出現(xiàn),但由于下丘腦GnRH分泌的降低,LH的水平就有可能降低。因此低LH水平可表明垂體或下丘腦存在功能障礙,但具體的問(wèn)題根源必須通過(guò)其它實(shí)驗(yàn)確定。在下丘腦、垂體或性腺功能障礙的鑒別診斷中,LH濃度的檢測(cè)常與FSH一起進(jìn)行檢測(cè)(以為兩者的功能緊密相連)。此外,激素的水平也可用來(lái)確定是否絕經(jīng)、計(jì)算排卵時(shí)間和監(jiān)測(cè)內(nèi)分泌治LX果。3、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的LH酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合LH分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性LH的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過(guò)氧化物酶的抗LH抗血清。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。辣根過(guò)氧化物酶符合物的總量與樣本中LH的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后,顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中LH的濃度成正比。4、試劑盒組成:1)微量反應(yīng)板,1塊(96孔),包被了抗LH的單克隆抗體。2)標(biāo)準(zhǔn)系列:6支,凍干,1ml,濃度:0,10,20,40,100,200mIU/ml3)酶聯(lián)物,1支,11ml,辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗LH抗血清,0.3%的Proclin作為防腐劑。4)底物液,14ml(TMB)5)終止液:1支,0.5MH2SO4,14ml,避免接觸終止液,以免刺激或著燒皮膚。用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)視需要而定。5、實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀2)極ng確移液器,25;50;100μl.3)蒸餾水4)吸水紙5)計(jì)時(shí)器6)半對(duì)數(shù)紙6、儲(chǔ)存條件未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過(guò)期試劑,酶聯(lián)物、底物溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和零標(biāo)準(zhǔn)品必須在28℃下貯存。微孔反應(yīng)板必須在28℃下貯存。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。如果包被板的包裝被打開(kāi),其免疫活性在6周內(nèi)穩(wěn)定,但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。7、試劑準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將所有試劑和所需數(shù)目的板條都平衡至室溫。標(biāo)準(zhǔn)品:在每支凍干粉的標(biāo)準(zhǔn)品中加入1.0ml蒸餾水重新配置標(biāo)準(zhǔn)品。注意:配制好的標(biāo)準(zhǔn)品在2-8℃的環(huán)境下可穩(wěn)定存放2個(gè)月,要想存放更長(zhǎng)的時(shí)間則應(yīng)凍存于-20℃的環(huán)境下。8、樣品此實(shí)驗(yàn)將用到血清,請(qǐng)不要使用易溶血、黃疸血和脂血樣品,注意:含疊氮鈉的樣品不可用于此實(shí)驗(yàn)。8.1樣品的采集血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝固,室溫離心分離血清。未完全凝血前請(qǐng)勿離心,接受了抗凝劑ZL的病人可能需要更長(zhǎng)的凝血時(shí)間。8.2樣品儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前應(yīng)用蓋子將樣品密封好,2-8℃下可存放48小時(shí)。如果將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下則可將其存放更長(zhǎng)時(shí)間(只可凍融1次)。解凍的樣本在實(shí)驗(yàn)之前必須要上下倒置幾次。8.3樣品的稀釋:在**次實(shí)驗(yàn)中,樣本濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的樣品應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)前用零緩沖液進(jìn)行稀釋。在計(jì)算濃度時(shí),應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進(jìn)去。例子:a)按1:10稀釋:10μL的血清+90μL的零緩沖液(充分混合)。b)按1:100稀釋:10ul稀釋好的a)+90μL的零緩沖液(充分混合)。9、實(shí)驗(yàn)步驟所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和質(zhì)控品都必須做雙份檢測(cè)以保證它們的檢測(cè)條件都一樣。每次檢測(cè)都必須有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。2)將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控和血清樣本分別25μl加入到相應(yīng)的微孔中,每次都得使用新的取樣吸頭。3)加100μl的抗LH酶聯(lián)物于各孔中。4)混勻10秒,此步驟中完全混勻很重要。5)室溫溫育(22℃)30分鐘。6)棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。用蒸餾水洗板5次(每孔400ul),在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精密度。7)依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。8)室溫(22℃)溫育10分鐘。9)按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。10)加終止液后10分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)讀吸光度。10、結(jié)果計(jì)算1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值(mIU/ml)進(jìn)行標(biāo)繪,作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動(dòng)計(jì)算方法:說(shuō)明書(shū)上的結(jié)果是用四參數(shù)計(jì)算得到的,其它的歸納方法可能會(huì)給出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中LH濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋,任何稀釋了的樣品在計(jì)算時(shí)都必須將相應(yīng)的稀釋因子考慮進(jìn)去。11、正常值強(qiáng)烈建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都確定自己的正常值范圍和不正常值范圍。用DRG公司的LHELISA試劑盒對(duì)明顯健康人群進(jìn)行一研究,得到如下結(jié)果:人群LH(mIU/ml)成年女性卵泡和黃體期≤20黃體生成素峰20-200女性絕經(jīng)后20-100男性3-12本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431
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激素六項(xiàng)之黃體生成素(LH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4黃體生成素(LH)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA-1289)1、應(yīng)用范圍DRG公司的LH酶聯(lián)免疫吸附試劑盒可用于血清中黃體生成素(LH)的定量檢測(cè)。此檢測(cè)試劑盒僅供體外診斷用。2、前言說(shuō)明在受到下丘腦釋放的黃體生成素釋放激素(LH-RH或者Gn-RH)的影響下,男性和女性的垂體前葉都可以產(chǎn)生LH(黃體生成素)。在男性中,LH也叫做促間質(zhì)細(xì)胞激素(ICSH),它是一種分子量大約為30000道爾頓的糖蛋白。它是由兩條不同的氨基酸鏈通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合形成的復(fù)合物,一條α鏈,一條β鏈。α鏈與在人促甲狀腺激素(TSH)、卵泡刺激素(FSH)和人絨毛膜促性腺激素中找到的α鏈糖蛋白類似。這些激素的不同主要是由于他們?chǔ)骆湹陌被峤M成不同所造成的,這也使它們產(chǎn)生了不同的免疫學(xué)功能。男性中LH的分泌是間歇性的,它的基本功能是刺激間質(zhì)細(xì)胞(萊迪希細(xì)胞)分泌睪酮。婦女體內(nèi)LH濃度的變化會(huì)受到正常月經(jīng)復(fù)雜排卵循環(huán)的影響,這也依賴于沿性腺-下丘腦-垂體軸的一系列激素活動(dòng)。排卵前孕酮和雌二醇水平的降低啟動(dòng)了每一個(gè)月經(jīng)周期。隨著激素水平的降低,下丘腦就增加促性腺激素釋放激素(GnRF)的分泌,它可依次刺激垂體增加FSH的生產(chǎn)和分泌。增加的FSH水平在卵泡階段可刺激一些卵泡的成熟,其中的一個(gè)卵泡就會(huì)成熟為含卵子的卵泡。隨著卵泡的發(fā)育,雌二醇就開(kāi)始分泌,剛開(kāi)始時(shí)很慢,但經(jīng)過(guò)12或13天的正常循環(huán)后它就開(kāi)始迅速增加。因?yàn)榇贵w的直接刺激和增加的GnRF和FSH水平,雌二醇的就開(kāi)始迅速增加,隨之LH就開(kāi)始釋放了。而這些事件正好組成了排卵前期。在LH達(dá)到Z高水平后,排卵作用大約會(huì)持續(xù)12到18個(gè)小時(shí)。排卵后就會(huì)形成可分泌孕酮和雌激素(這兩種激素是LH的兩個(gè)反饋調(diào)節(jié)物)的黃體。黃體期迅速的緊隨排卵期而來(lái),黃體期明顯表現(xiàn)為高孕酮水平,雌二醇第二增加,低LH和FSH水平。低LH和FSH水平是沿下丘腦-垂體軸雌二醇和孕酮負(fù)反饋反應(yīng)的結(jié)果。受孕后,胚胎的發(fā)育可產(chǎn)生hCG,hCG使得黃體繼續(xù)產(chǎn)生孕酮和雌二醇。如果沒(méi)有受孕,黃體就會(huì)退化,相應(yīng)的孕酮和雌二醇水平就會(huì)降低,從而導(dǎo)致了月經(jīng)的形成。隨著這些激素低激素水平的形成,下丘腦就又再次開(kāi)始一月經(jīng)周期患性腺機(jī)能退減的病人,其血清LH的濃度會(huì)增加。由于卵巢的發(fā)育不成熟、原發(fā)性的卵巢功能衰竭、多囊卵巢疾病或絕經(jīng)等原因,女性體內(nèi)類固醇激素的分泌會(huì)減少,而且在這些情況下,LH的分泌沒(méi)有受到調(diào)節(jié)。在男性中,但睪丸發(fā)育不正常或存在無(wú)睪畸形時(shí),也同樣會(huì)失去調(diào)節(jié)激素。在原發(fā)性睪丸衰竭和克氏綜合征患者中,盡管在雄性激素持續(xù)分泌的情況下LH濃度沒(méi)有必要提高,但我們也可發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)存在著高濃度的LH。在腎衰竭、肝硬化、甲狀腺功能亢進(jìn)和嚴(yán)重饑餓的情況下,LH的濃度也可出現(xiàn)提高。垂體前葉激素的分泌不足也可能導(dǎo)致低LH水平。正如人們所預(yù)測(cè)的,低LH水平可能導(dǎo)致男性和女性不育。雖然LH的低水平在垂體前葉對(duì)GnTH刺激反應(yīng)失效的情況下也會(huì)出現(xiàn),但由于下丘腦GnRH分泌的降低,LH的水平就有可能降低。因此低LH水平可表明垂體或下丘腦存在功能障礙,但具體的問(wèn)題根源必須通過(guò)其它實(shí)驗(yàn)確定。在下丘腦、垂體或性腺功能障礙的鑒別診斷中,LH濃度的檢測(cè)常與FSH一起進(jìn)行檢測(cè)(以為兩者的功能緊密相連)。此外,激素的水平也可用來(lái)確定是否絕經(jīng)、計(jì)算排卵時(shí)間和監(jiān)測(cè)內(nèi)分泌治LX果。3、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的LH酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合LH分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性LH的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過(guò)氧化物酶的抗LH抗血清。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。辣根過(guò)氧化物酶符合物的總量與樣本中LH的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后,顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中LH的濃度成正比。4、試劑盒組成:1)微量反應(yīng)板,1塊(96孔),包被了抗LH的單克隆抗體。2)標(biāo)準(zhǔn)系列:6支,凍干,1ml,濃度:0,10,20,40,100,200mIU/ml3)酶聯(lián)物,1支,11ml,辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗LH抗血清,0.3%的Proclin作為防腐劑。4)底物液,14ml(TMB)5)終止液:1支,0.5MH2SO4,14ml,避免接觸終止液,以免刺激或著燒皮膚。用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)視需要而定。5、實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀2)極ng確移液器,25;50;100μl.3)蒸餾水4)吸水紙5)計(jì)時(shí)器6)半對(duì)數(shù)紙6、儲(chǔ)存條件未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過(guò)期試劑,酶聯(lián)物、底物溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和零標(biāo)準(zhǔn)品必須在28℃下貯存。微孔反應(yīng)板必須在28℃下貯存。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。如果包被板的包裝被打開(kāi),其免疫活性在6周內(nèi)穩(wěn)定,但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。7、試劑準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將所有試劑和所需數(shù)目的板條都平衡至室溫。標(biāo)準(zhǔn)品:在每支凍干粉的標(biāo)準(zhǔn)品中加入1.0ml蒸餾水重新配置標(biāo)準(zhǔn)品。注意:配制好的標(biāo)準(zhǔn)品在2-8℃的環(huán)境下可穩(wěn)定存放2個(gè)月,要想存放更長(zhǎng)的時(shí)間則應(yīng)凍存于-20℃的環(huán)境下。8、樣品此實(shí)驗(yàn)將用到血清,請(qǐng)不要使用易溶血、黃疸血和脂血樣品,注意:含疊氮鈉的樣品不可用于此實(shí)驗(yàn)。8.1樣品的采集血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝固,室溫離心分離血清。未完全凝血前請(qǐng)勿離心,接受了抗凝劑ZL的病人可能需要更長(zhǎng)的凝血時(shí)間。8.2樣品儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前應(yīng)用蓋子將樣品密封好,2-8℃下可存放48小時(shí)。如果將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下則可將其存放更長(zhǎng)時(shí)間(只可凍融1次)。解凍的樣本在實(shí)驗(yàn)之前必須要上下倒置幾次。8.3樣品的稀釋:在**次實(shí)驗(yàn)中,樣本濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的樣品應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)前用零緩沖液進(jìn)行稀釋。在計(jì)算濃度時(shí),應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進(jìn)去。例子:a)按1:10稀釋:10μL的血清+90μL的零緩沖液(充分混合)。b)按1:100稀釋:10ul稀釋好的a)+90μL的零緩沖液(充分混合)。9、實(shí)驗(yàn)步驟所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和質(zhì)控品都必須做雙份檢測(cè)以保證它們的檢測(cè)條件都一樣。每次檢測(cè)都必須有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。2)將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控和血清樣本分別25μl加入到相應(yīng)的微孔中,每次都得使用新的取樣吸頭。3)加100μl的抗LH酶聯(lián)物于各孔中。4)混勻10秒,此步驟中完全混勻很重要。5)室溫溫育(22℃)30分鐘。6)棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。用蒸餾水洗板5次(每孔400ul),在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精密度。7)依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。8)室溫(22℃)溫育10分鐘。9)按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。10)加終止液后10分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)讀吸光度。10、結(jié)果計(jì)算1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值(mIU/ml)進(jìn)行標(biāo)繪,作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動(dòng)計(jì)算方法:說(shuō)明書(shū)上的結(jié)果是用四參數(shù)計(jì)算得到的,其它的歸納方法可能會(huì)給出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中LH濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋,任何稀釋了的樣品在計(jì)算時(shí)都必須將相應(yīng)的稀釋因子考慮進(jìn)去。11、正常值強(qiáng)烈建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都確定自己的正常值范圍和不正常值范圍。用DRG公司的LHELISA試劑盒對(duì)明顯健康人群進(jìn)行一研究,得到如下結(jié)果:人群LH(mIU/ml)成年女性卵泡和黃體期≤20黃體生成素峰20-200女性絕經(jīng)后20-100男性3-12本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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小鼠黃體生成素(LH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 本試劑盒僅供研究使用。ELISA試劑盒檢測(cè)范圍:96T70pg/ml-2400pg/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中黃體生成素(LH)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠黃體生成素(LH)水平。用純化的小鼠黃體生成素(LH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入黃體生成素(LH),再與HRP標(biāo)記的黃體生成素(LH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的黃體生成素(LH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠黃體生成素(LH)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(4800pg/ml)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。ELISA試劑盒操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2400pg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1200pg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液600pg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液300pg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150pg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。ELISA試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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鴨促黃體生成素(LH)elisa試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 鴨促黃體生成素(LH)elisa試劑盒使用說(shuō)明書(shū)[詳細(xì)]
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2024-09-28 01:21
課件
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激素六項(xiàng)之孕酮(PRG)ELISA 試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4孕酮(PRG)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA-1561)1、前言孕酮是一種類固醇激素,含21個(gè)碳原子,在C-3上連有酮基,在C-4與在C-5之間為雙鍵連接。該類固醇激素是一種女性性激素,與雌激素共同在月經(jīng)周期中調(diào)節(jié)附屬的器官,它對(duì)于胚細(xì)胞著床前的子宮內(nèi)膜增生狀態(tài)和維持孕期是特別重要的。在非孕期婦女懷孕的胎盤成為主要來(lái)源。極少數(shù)來(lái)源于兩性的腎上腺皮質(zhì)。孕酮在循環(huán)血中主要與皮質(zhì)類固醇結(jié)合蛋白(CBG),性激素結(jié)合蛋白(SHBG)和白蛋白結(jié)合,僅有循環(huán)總濃度的2-10%是游離激素。根據(jù)月經(jīng)循環(huán)周期血孕酮濃度范圍很寬,在卵泡期可以低于1ng/ml(3.2nmol/L),在黃體期達(dá)到10-20ng/ml(32-64nmol/L)。在排卵后4-7天達(dá)到Z高水平保持4-6天,在月經(jīng)開(kāi)始前24小時(shí)降至排卵前的水平,因?yàn)樵型纳吆徒档团c卵巢卵泡和黃體的活動(dòng)相對(duì)應(yīng),因此血漿孕酮的測(cè)定在臨床上常用來(lái)證明排卵和非孕婦女的黃體功能正常。假如排卵沒(méi)有發(fā)生,黃體則沒(méi)有生成進(jìn)而孕酮升高的循環(huán)也不能見(jiàn)到,異常的孕酮分泌與經(jīng)前期緊張子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)和黃體不全有關(guān)。孕酮濃度不僅個(gè)體之間有差異,而且同一個(gè)人每天甚至每個(gè)小時(shí)都會(huì)不同,一般的在婦科內(nèi)分泌紊亂或異常妊娠為了恰當(dāng)?shù)慕忉尣∫蜻B續(xù)測(cè)定比單個(gè)測(cè)定更有意義。在孕期孕酮更多的由胎盤產(chǎn)生,血漿水平在這個(gè)時(shí)期穩(wěn)定在200ng/ml的水平。2、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的孕酮酶免試劑盒是一種基于競(jìng)爭(zhēng)法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合孕酮分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性孕酮的病人樣本與辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的孕酮競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合包被板上的抗體。溫育之后,未結(jié)合的酶聯(lián)物用洗滌液洗去。過(guò)氧酶與包被抗體的結(jié)合量與樣品中孕酮的濃度成反比。加入底物液后,所顯示的顏色強(qiáng)度與病人樣品中孕酮的濃度成反比。3、試劑盒成分1)預(yù)包被反應(yīng)板,12條X8孔,96孔,微孔中包被了單克隆的抗孕酮抗體。2)標(biāo)準(zhǔn)品系列,7支,1ml,濃度:0;0.3;1.25;2.5;5;15;40ng/ml,轉(zhuǎn)換系數(shù):1ng/ml=3.18nmol/ml,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑,3)酶聯(lián)結(jié)物,1支,25ml,辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的孕酮,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑。4)底物液,1支,25ml,TMB5)終止液,1支,14ml,內(nèi)含0.5M的H2SO46)濃縮洗滌液(40X),1支,30ml.注:用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)視需要而定。4、實(shí)驗(yàn)需要器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀(450±10nm)。2)移液器3)吸水紙4)蒸餾水5、試劑貯存:未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存時(shí),其活性在有效期內(nèi)穩(wěn)定,不要使用過(guò)期試劑。所有開(kāi)封了的試劑都必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下,微孔反應(yīng)板也必須貯存于28℃的環(huán)境下。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。6、試劑準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將所有的試劑和所需數(shù)目的板條都平衡至室溫。洗滌液:在30ml的濃縮洗滌液中加入1170ml去離子水進(jìn)行稀釋,稀釋好的洗滌液室溫下可穩(wěn)定存放2周。7、樣本采集和準(zhǔn)備此實(shí)驗(yàn)中要使用到血清或血漿(EDTA-,肝素血漿),不要使用溶血、黃疸血或脂血樣品。請(qǐng)注意:含疊氮鈉的樣品不能用于此實(shí)驗(yàn)中。7.1樣品的采集血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下用離心機(jī)分離血清。未完全凝血前請(qǐng)勿離心,接受了抗凝劑ZL的病人樣品可能需要更長(zhǎng)的凝血時(shí)間。血漿:將全血收集到含抗凝劑的離心試管中,采集后立即離心。7.2樣品的儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,應(yīng)當(dāng)將樣品用蓋子蓋好,2-8℃環(huán)境下可穩(wěn)定存放24個(gè)小時(shí)。如果實(shí)驗(yàn)前想要將樣品存放更長(zhǎng)的時(shí)間,則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣品在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)反復(fù)倒置幾次。7.3樣品的稀釋在S次實(shí)驗(yàn)時(shí),如果血清樣品中睪酮的濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品中睪酮的濃度,則應(yīng)將此樣品用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋10或100倍,并按實(shí)驗(yàn)步驟重新檢測(cè)。在計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)當(dāng)將此稀釋因子考慮進(jìn)去。例如:a)按1:10的比例稀釋:10μl的血清+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品(充分混合)b)按1:100的比例稀釋:10μl已稀釋好的a)+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品(充分混合)8、實(shí)驗(yàn)步驟:1)將所需數(shù)量的板條固定到板架上。2)將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和已稀釋好的樣品分別用新的取樣吸頭取25μL加入到相應(yīng)的微孔中。3)室溫溫育5分鐘。4)在每一微孔中加入200μL酶聯(lián)物。5)充分混勻10秒,在這個(gè)步驟完全混勻很重要。6)室溫孵育60分種。7)快速棄去孔內(nèi)反應(yīng)物,每孔用400μL蒸餾水洗板3次,在吸水紙上拍干。注意:洗板步驟是否正確操作會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和極ng確度。8)在每一微孔中加入200μl底物液。9)室溫孵育15分種。10)加100μl終止液到每個(gè)檢測(cè)孔中終止酶反應(yīng)。11)加終止液后10分鐘之內(nèi),用酶標(biāo)儀在450±10nm處測(cè)定OD值。9、結(jié)果計(jì)算1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值進(jìn)行標(biāo)繪,作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動(dòng)計(jì)算方法:在IFU上,它用四參數(shù)曲線已自動(dòng)計(jì)算出結(jié)果。其它的歸納方法可能會(huì)得出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中孕酮濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。在計(jì)算樣品濃度時(shí)就應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進(jìn)去。10、參考值我們強(qiáng)烈建議各個(gè)實(shí)驗(yàn)市都建立自己的正常值和異常值。在一明顯正常人群的研究中,我們使用DRG公司的孕酮ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)得到如下結(jié)果:正常女性:卵泡期0.2-1.4ng/ml黃體期425ng/ml絕經(jīng)期0.11ng/ml正常男性:0.11ng/ml本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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激素六項(xiàng)之 泌乳素(PRL) ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4泌乳素(PRL)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA1291)1、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的泌乳素酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合泌乳素分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性泌乳素的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過(guò)氧化物酶的抗泌乳素抗血清。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過(guò)氧化物酶的總量與樣本中泌乳素的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后,顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中泌乳素的濃度成正比。2、試劑盒成分1)微量反應(yīng)板,1塊(96孔),微孔中包被了抗泌乳素的單克隆抗體。2)酶聯(lián)物,11ml,辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的泌乳素抗血清。3)底物液,11ml(TMB)4)標(biāo)準(zhǔn)系列,6支(凍干粉),濃度:0;5;20;50;100;200ng/ml轉(zhuǎn)換系數(shù)(1ng/ml=21.1mUI/mL)5)終止液,0.5M的H2SO4,6ml3、實(shí)驗(yàn)需要器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀(450±10nm)。2)移液器3)吸水紙4)標(biāo)準(zhǔn)水箱5)蒸餾水6)計(jì)時(shí)器4、試劑貯存:未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過(guò)期試劑,酶聯(lián)物、底物溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和零標(biāo)準(zhǔn)品必須在28℃下貯存。微孔反應(yīng)板必須在28℃下貯存。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。如果包被板的包裝被打開(kāi),其免疫活性在2個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定,但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。5、樣品的采集1)靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下用離心機(jī)分離血清,避免溶血。注意:此試劑盒只能使用沒(méi)用任何添加劑的樣品。2)必須蓋住樣本并在實(shí)驗(yàn)之前于2-8℃下可貯存48小時(shí)。樣品需要更長(zhǎng)的貯存時(shí)間,則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣本在檢測(cè)之前必須上下倒置幾次。注意:用于此試劑盒的樣品不能含有任何添加劑。6、試劑的準(zhǔn)備參考標(biāo)準(zhǔn):在凍干的標(biāo)準(zhǔn)品中加入1.0ml雙蒸水。注:配制好了的標(biāo)準(zhǔn)品可在2-8℃下穩(wěn)定存放2個(gè)月。想要存放更長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)當(dāng)將其凍存于-20℃的環(huán)境下。7、一般注意事項(xiàng)1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將所有試劑和樣本都平衡至室溫,試劑混合時(shí)避免起泡。2)實(shí)驗(yàn)一旦開(kāi)始,所有的步驟應(yīng)完整地進(jìn)行下去。3)每一樣品的取樣都得使用新的取樣吸頭。4)吸光度與溫育時(shí)間和溫度有關(guān),在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后所有的試劑都應(yīng)準(zhǔn)備好,以保證加液時(shí)間的一致。5)本試劑盒Zda吸光度(OD)在1.200-2.000之間(室溫22℃,顯色10分鐘以內(nèi))。如果ZdaOD值高于您酶標(biāo)儀的上限或低于1.000,則相應(yīng)的減少或延長(zhǎng)顯色反應(yīng)的溫育時(shí)間。一般情況下,酶免反應(yīng)的強(qiáng)度與時(shí)間和溫度成線性,這使得操作者應(yīng)當(dāng)適當(dāng)?shù)恼{(diào)整物理化學(xué)環(huán)境。8、實(shí)驗(yàn)步驟1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。2)將黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)系列(0;5;20;50;100;200ng/ml)、質(zhì)控和血清樣本分別25μl加入到相應(yīng)的微孔中,每一樣品都得使用新的取樣吸頭。3)加100μl的抗泌乳素酶聯(lián)物于各孔中。4)混勻10秒,此步驟中完全混勻很重要。5)室溫溫育(22℃)30分鐘。6)棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。7)用蒸餾水洗板5次。8)在吸水紙上把板拍干。9)依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。10)室溫(22℃)溫育10分鐘。11)按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。12)10分鐘內(nèi)在450±10nm波長(zhǎng)讀吸光度。9、結(jié)果計(jì)算1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值(mIU/ml)進(jìn)行標(biāo)繪,作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)或計(jì)算機(jī)的功能,也可以采用其它的歸納方法進(jìn)行計(jì)算。4)如果樣本的濃度高于Z高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的濃度或者濃度>200ng/ml,則需要進(jìn)行稀釋,任何稀釋了的樣品在計(jì)算時(shí)都必須將相應(yīng)的稀釋因子考慮進(jìn)去。10、參考值我們強(qiáng)烈建議各個(gè)實(shí)驗(yàn)市都建立自己的正常值和異常值。以下結(jié)果是以一定量正常人群的血液樣本為準(zhǔn)得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:性別平均值(ng/ml)S.D.(ng/ml)5%(ng/ml)95%(ng/ml)男性6.445.500.9420.94女性14.275.882.3925.15靈敏度:Z小檢測(cè)出的泌乳素濃度為0.35ng/ml本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
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激素六項(xiàng)之睪酮(TES)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4睪酮(TES)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA-1559)1、前言DRG公司的睪酮酶免試劑盒可用于人血清和血漿中睪酮的定量檢測(cè)。此試劑盒僅供體外診斷用。睪酮(17β-羥基-4-雄烯-3-烷)是一種19C的類固醇激素,它在C-4和C-5間含一個(gè)不飽和鍵,C-3位置有一個(gè)酮基,C-17的β位上有一個(gè)羥基。此類固醇激素的分子量為288.47。睪酮是分泌到血液中Z主要的雄性激素。在男性中,睪酮主要由睪丸的間質(zhì)細(xì)胞分泌;在女性中,處于循環(huán)中的睪酮50%來(lái)源于外周雄烯二酮的轉(zhuǎn)換,25%來(lái)源于卵巢,25%來(lái)源于腎上腺。睪酮負(fù)責(zé)男性第二性征的形成,檢測(cè)睪酮濃度有助于評(píng)價(jià)性腺機(jī)能減退的狀態(tài)。在女性中,在很多疾病中睪酮的濃度都很高,如:多毛癥,女子男性化,多囊卵巢癥,卵巢癌,腎上腺癌和腎上腺增生。而在男性中,高水平的睪酮通常與下丘腦垂體疾病、睪丸癌、先天性腎上腺增生和前列腺癌有關(guān)。在患下列疾病的病人體內(nèi),通??砂l(fā)現(xiàn)睪酮水平很低:垂體機(jī)能減退癥、克氏綜合征、睪丸女性化綜合征、睪丸切除術(shù)、隱睪病、酶缺陷和一些自身免疫疾病。2、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的睪酮酶免試劑盒是一種基于競(jìng)爭(zhēng)法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合睪酮分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性睪酮的病人樣本與辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的睪酮競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合包被板上的抗體。溫育之后,未結(jié)合的酶聯(lián)物用洗滌液洗去。過(guò)氧酶與包被抗體的結(jié)合量與樣品中睪酮的濃度成反比。加入底物液后,所顯示的顏色強(qiáng)度與病人樣品中睪酮的濃度成反比。3、試劑盒成份1)預(yù)包被反應(yīng)板,12×8孔,包被板上包被了單克隆的鼠抗睪酮抗體。2)標(biāo)準(zhǔn)品系列,共7支,1.0ml/支,濃度:0;0.2;0.5;1;2;6;16ng/ml。轉(zhuǎn)換系數(shù):1ng/ml=3.467nmol/l。3)酶聯(lián)結(jié)物,1支,25ml,內(nèi)含辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的睪酮。4)底物/顯色劑,1支,25ml,內(nèi)含TMB。5)終止液,1支,0.5M的H2SO4,14ml,避免接觸終止液,以免刺激或著燒皮膚。6)濃縮洗滌液(40X),1支,30ml。注意:用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品因視需要而定。4、實(shí)驗(yàn)所需材料(但試劑盒不提供)1)標(biāo)準(zhǔn)移液器2)酶標(biāo)儀3)吸水紙4)蒸餾水5、試劑盒的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存時(shí),其活性在有效期內(nèi)穩(wěn)定,不要使用過(guò)期試劑。所有開(kāi)封了的試劑都必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下,微孔反應(yīng)板也必須貯存于28℃的環(huán)境下。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。6、試劑準(zhǔn)備洗滌液的準(zhǔn)備吸取40×濃度的洗滌液30mL用1170mL的蒸餾水混合定容至1200mL,稀釋好的洗滌液在室溫能保存2周7、樣品在此實(shí)驗(yàn)中將用到血清或血漿(EDTA-,肝素-或檸檬酸血漿),不要使用溶血、黃疸血或脂血樣品。請(qǐng)注意:含有疊氮化鈉的樣本不能使用7.1樣品的采集血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,室溫下離心獲取血清。血漿:將全血收集到含抗凝劑的離心試管中,采集后立即離心。7.2樣品的儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,應(yīng)當(dāng)將樣品用蓋子蓋好,2-8℃環(huán)境下可穩(wěn)定存放5天。如果實(shí)驗(yàn)前想要將樣品存放更長(zhǎng)的時(shí)間,則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣品在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)反復(fù)倒置幾次。7.3樣品的稀釋在S次實(shí)驗(yàn)時(shí),如果血清樣品中睪酮的濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品中睪酮的濃度,則應(yīng)將此樣品用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋10或100倍,并按實(shí)驗(yàn)步驟重新檢測(cè)。在計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)當(dāng)將此稀釋因子考慮進(jìn)去。例如:a)按1:10的比例稀釋:10μl的血清+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品(充分混合)b)按1:100的比例稀釋:10μl已稀釋好的a)+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品(充分混合)8、一般注意事項(xiàng)1)所有試劑和樣本在使用之前必須平衡至室溫。所有試劑必須搖勻但不能起泡沫。2)一旦檢測(cè)開(kāi)始,所有的操作步驟必須進(jìn)行到底不能中斷。3)為了避免交叉放映,每一標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品的取樣都必須使用新的取樣吸頭。4)吸光度值是由孵育的時(shí)間和溫度所決定的。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前,建議準(zhǔn)備好所有的藥劑旋開(kāi)蓋子。5)將所需檢測(cè)的微孔板條固定在板架上等。這些準(zhǔn)備工作將確保每次的加液步驟所需時(shí)間相同,沒(méi)有中斷。按一般的規(guī)律,酶免反應(yīng)的強(qiáng)度與時(shí)間和溫度成線性比例。9、實(shí)驗(yàn)步驟:1)將所需數(shù)量的板條固定到板架上。2)將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和已稀釋好的樣品分別用新的取樣吸頭取25μL加入到相應(yīng)的微孔中。3)在每一微孔中加入200μL酶聯(lián)物。4)充分混勻10秒,在這個(gè)步驟完全混勻很重要。5)室溫孵育60分種。6)快速棄取孔內(nèi)反應(yīng)物,每孔用400μL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。注意:洗板步驟是否正確操作會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和極ng確度。7)在每一微孔中加入200μl底物液。8)室溫孵育15分種。9)加100μl終止液到每個(gè)檢測(cè)孔中終止酶反應(yīng)。10)加終止液后10分鐘之內(nèi),用酶標(biāo)儀在450±10nm處測(cè)定OD值。10、結(jié)果計(jì)算1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值進(jìn)行標(biāo)繪,作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動(dòng)計(jì)算方法:在IFU上,它用四參數(shù)曲線已自動(dòng)計(jì)算出結(jié)果。其它的歸納方法可能會(huì)得出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。在計(jì)算樣品濃度時(shí)就應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進(jìn)去。11、參考值我們強(qiáng)烈建議各個(gè)實(shí)驗(yàn)市都建立自己的正常值和異常值。在一次明顯正常人群的研究中,我們使用DRG公司的睪酮ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)得到如下結(jié)果:人群5%95%男性2.0ng/ml6.9ng/ml女性0.26ng/ml1.22ng/ml本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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激素六項(xiàng)之 雌二醇 (E2) ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4雌二醇(E2)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA2693)1、前言說(shuō)明E2是一種含一個(gè)酚A環(huán)的18C類固醇激素。此類固醇激素的分子量為272.4,它是人體中Z有效的雌激素,主要由女性卵巢的格拉芬卵泡和胎盤產(chǎn)生,少量由腎上腺和男性睪丸產(chǎn)生。E2(雌二醇)被分泌到血液中,在血液中有98%的雌二醇會(huì)結(jié)合到性激素結(jié)合蛋白上,有的還會(huì)結(jié)合到其它血清蛋白上(如血清白蛋白),只有很少一部分以游離形式存在。雌激素的活性會(huì)受到雌二醇受體符合物的影響,此符合物可在靶位并在核酸水平上引發(fā)相應(yīng)的反應(yīng)。這些靶位包括:卵泡、子宮、乳房、陰道、尿道、下丘腦、垂體和敏感稍低的肝臟與皮膚。在月經(jīng)周期正常的未懷孕女性體內(nèi),雌二醇的分泌遵循著一種循環(huán)模式,在排卵前有兩個(gè)明顯的高峰期。高濃度的雌二醇可在垂體水平發(fā)揮正反饋?zhàn)饔?,它?huì)影響垂體促性腺激素的分泌,如卵泡刺激素和黃體生成素,前者是卵泡成熟所必要的,后者是排卵形成所必要的。排卵后,雌二醇水平迅速下降直到黃體細(xì)胞被激活,結(jié)果雌二醇水平出現(xiàn)第二次高峰,并在黃體階段達(dá)到一平衡述評(píng)。在懷孕期間,母體血清雌二醇的水平會(huì)極度的增加,并且會(huì)超過(guò)排卵前的峰值,而且在整個(gè)孕期維持在高水平上。血清雌二醇的檢測(cè)是評(píng)價(jià)各種月經(jīng)功能障礙的一個(gè)有效指標(biāo),例如女性早熟和晚熟,原發(fā)性、續(xù)發(fā)性閉經(jīng)和絕經(jīng)癥。據(jù)報(bào)道,女性化綜合征、男子女性型乳房和睪丸癌患者的血清雌二醇水平會(huì)升高。在不孕患者體內(nèi),血清雌二醇的檢測(cè)有利于監(jiān)測(cè)藥物ZL(如克羅米酚檸檬酸鹽、促黃體生成素釋放激素或外源性促性腺激素)后排卵的感應(yīng)情況。在因?yàn)轶w外受精而引起的卵巢過(guò)度刺激綜合征患者中,每天監(jiān)測(cè)血清雌二醇濃度以便為hCG的管理和卵母細(xì)胞的采集提供**時(shí)間。2、檢測(cè)原理:DRG公司的雌二醇酶免試劑盒是一種基于競(jìng)爭(zhēng)法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合雌二醇分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性雌二醇的病人樣本與辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的雌二醇競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合包被板上的抗體。溫育之后,未結(jié)合的酶聯(lián)物用洗滌液洗去。過(guò)氧酶與包被抗體的結(jié)合量與樣品中雌二醇的濃度成反比。加入底物液后,所顯示的顏色強(qiáng)度與病人樣品中雌二醇的濃度成反比。3、試劑盒成分:1)包被板,12×8(可拆),96孔,微孔中包被了抗雌二醇的兔單克隆抗體。2)標(biāo)準(zhǔn)品:7支1.0ml/支。分別含量為:0;25;100;250;500;1000;2000pg/ml。(1pg/ml=3.67pmol/L)3)酶聯(lián)結(jié)物:1支,25ml,內(nèi)含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的雌二醇。4)底物液:1支,內(nèi)含,14ml,內(nèi)含TMB5)終止液:1支,0.5M的H2SO4,14ml,避免接觸終止液,以免造成刺激皮膚和著燒皮膚。6)洗滌液(40×),1支,30ml注:用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品視需要而定。4、實(shí)驗(yàn)需要器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀(450±10nm)。2)微量移液器和吸嘴25μl、100μl、200μl。3)坐標(biāo)紙。4)去離子水。5、試劑貯存:未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存時(shí),其活性在有效期內(nèi)穩(wěn)定,不要使用過(guò)期試劑。所有開(kāi)封了的試劑都必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下,微孔反應(yīng)板也必須貯存于28℃的環(huán)境下。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。6、試劑準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將所有的試劑和所需數(shù)目的板條都平衡至室溫。洗滌液:在30ml的濃縮洗滌液中加入1170ml去離子水進(jìn)行稀釋,稀釋好的洗滌液室溫下可穩(wěn)定存放2周。7、樣本采集和準(zhǔn)備7.1樣品的采集血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,室溫下離心獲取血清。血漿:將全血收集到含抗凝劑的離心試管中,采集后立即離心。7.2樣品的儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,應(yīng)當(dāng)將樣品用蓋子蓋好,2-8℃環(huán)境下可穩(wěn)定存放5天。如果實(shí)驗(yàn)前想要將樣品存放更長(zhǎng)的時(shí)間,則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣品在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)反復(fù)倒置幾次。7.3樣品的稀釋在S次實(shí)驗(yàn)時(shí),如果血清樣品中睪酮的濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品中睪酮的濃度,則應(yīng)將此樣品用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋10或100倍,并按實(shí)驗(yàn)步驟重新檢測(cè)。在計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)當(dāng)將此稀釋因子考慮進(jìn)去。例如:a)按1:10的比例稀釋:10μl的血清+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品(充分混合)b)按1:100的比例稀釋:10μl已稀釋好的a)+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品(充分混合)8、實(shí)驗(yàn)步驟:所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和質(zhì)控品都做雙份檢測(cè)以保證所有的檢測(cè)條件都相同。1)將所需數(shù)量的板條固定到板架上。2)將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和已稀釋好的樣品分別用新的取樣吸頭取25μL加入到相應(yīng)的微孔中。3)在每一微孔中加入200μL酶聯(lián)物。4)充分混勻10秒,在這個(gè)步驟完全混勻很重要。5)室溫孵育120分種。6)快速棄去孔內(nèi)反應(yīng)物,每孔用400μL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。注意:洗板步驟是否正確操作會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和極ng確度。7)在每一微孔中加入100μl底物液。8)室溫孵育15分種。9)加50μl終止液到每個(gè)檢測(cè)孔中終止酶反應(yīng)。10)加終止液后10分鐘之內(nèi),用酶標(biāo)儀在450±10nm處測(cè)定OD值。9、結(jié)果計(jì)算:1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值進(jìn)行標(biāo)繪,作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動(dòng)計(jì)算方法:在IFU上,它用四參數(shù)曲線已自動(dòng)計(jì)算出結(jié)果。其它的歸納方法可能會(huì)得出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。在計(jì)算樣品濃度時(shí)就應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進(jìn)去。10、參考值我們強(qiáng)烈建議各個(gè)實(shí)驗(yàn)市都建立自己的正常值和異常值。在一明顯正常人群的研究中,我們使用DRG公司的雌二醇ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)得到如下結(jié)果:人群5-95%男性10-36pg/ml女性絕經(jīng)期前絕經(jīng)期后13-191pg/ml11-65pg/ml本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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兔促黃體生成激素(LH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 兔促黃體生成激素(LH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)(96T)本試劑盒僅供研究使用檢測(cè)范圍:2.5mIU/ml-80mIU/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促黃體生成激素(LH)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中兔促黃體生成激素(LH)水平。用純化的兔促黃體生成激素(LH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促黃體生成激素(LH),再與HRP標(biāo)記的促黃體生成激素(LH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體生成激素(LH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中兔促黃體生成激素(LH)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(160mIU/ml)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。80mIU/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40mIU/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20mIU/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10mIU/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5mIU/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-15 10:03
產(chǎn)品樣冊(cè)
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激素六項(xiàng)之卵泡刺激素(FSH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4卵泡刺激素(FSH)ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA-1288)1、應(yīng)用范圍DRG公司的卵泡刺激素酶免試劑盒可用于血清中FSH(卵泡刺激素)的定量檢測(cè)。此檢測(cè)試劑盒僅供體外診斷用。2、前言說(shuō)明FSH和LH兩者密切的控制著性腺組織的生長(zhǎng)和的繁殖活動(dòng),性腺組織通過(guò)負(fù)反饋的構(gòu)效關(guān)系合成和分泌雄性激素和雌性激素。FSH是垂體前葉嗜堿細(xì)胞分泌的一種糖蛋白。下丘腦產(chǎn)生的促性腺激素釋放激素(GnRH)可控制垂體前葉FSH的釋放。和其它糖蛋白一樣,如:LH、TSH和HCG,F(xiàn)SH由兩個(gè)亞單位組成,分別為α和β。這種類型的激素其α亞單位在結(jié)構(gòu)上都非常類似,因此每一激素的生物學(xué)和免疫學(xué)活性主要依賴于其β亞單位的獨(dú)特性。在女性中,F(xiàn)SH直接作用于粒細(xì)胞的受體而刺激卵泡的生長(zhǎng)和成熟;從而增加卵泡類固醇激素的分泌和LH的產(chǎn)生。產(chǎn)生的LH之后結(jié)合到卵泡膜細(xì)胞上并刺激類固醇的分泌。在接近卵泡成熟時(shí),卵巢內(nèi)雌二醇的水平就開(kāi)始增加,于是雌二醇的刺激作用可增加FSH受體的活性和FSH卵泡性結(jié)合。因此,在女性中,F(xiàn)SH、LH和雌二醇密切相連促進(jìn)卵巢的發(fā)育和成熟。在絕經(jīng)后、閹割和卵巢早衰的情況下,F(xiàn)SH的水平會(huì)表現(xiàn)為提高。通過(guò)雌激素的調(diào)節(jié)(雌激素表現(xiàn)的是一種負(fù)反饋機(jī)制),F(xiàn)SH的水平可能會(huì)變得規(guī)范化。FSH和LH、FSH和雌激素之間關(guān)系的不正常與神經(jīng)性食欲缺乏癥和多囊卵巢并相關(guān)聯(lián)。當(dāng)FSH隨機(jī)抽樣的濃度超過(guò)10mIU/mL時(shí)表明患有卵巢衰竭疾病的這一觀點(diǎn),人們對(duì)此存在著明顯的異議。男性中,生精小管的發(fā)育和精子發(fā)生的維持同樣會(huì)受到FSH的調(diào)節(jié)。然而和雌激素不一樣,雄性激素并不會(huì)降低FSH的水平,因此它僅與血清LH之間表現(xiàn)為負(fù)反饋的關(guān)系。因?yàn)閷?duì)FSH還不是完全了解,但人們發(fā)現(xiàn)精子稀少的男性通常FSH水平會(huì)提高。如通過(guò)放免檢測(cè)得到的結(jié)果:睪丸癌一般會(huì)降低血清FSH濃度,而提高LH濃度。因此人們推測(cè):LH濃度的明顯增加可能是通過(guò)與由睪丸癌分泌的hCG樣物質(zhì)的交叉反應(yīng)所造成的。在原發(fā)性睪丸功能障礙和克氏綜合征男性患者中,我們可發(fā)現(xiàn)高濃度的FSH水平。FSH濃度的提高同樣也出現(xiàn)在饑餓、腎功能衰竭、甲狀腺功能亢進(jìn)和肝硬化的情況下。3、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的FSH酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶聯(lián)免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合FSH分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性FSH的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過(guò)氧化物酶的抗FSH抗血清。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過(guò)氧化物酶的總量與樣本中FSH的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后,顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中FSH的濃度成正比。4、試劑盒成分1)微量反應(yīng)板,1塊(96孔),微孔中包被了抗FSH的單克隆抗體。2)酶聯(lián)物,1ml,內(nèi)含抗辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗FSH抗血清。3)底物液,11ml(TMB)4)標(biāo)準(zhǔn)系列,6支(凍干粉),即:0,5,10,20,50,100mIU/ml,轉(zhuǎn)換系數(shù):1ng/ml=0.34mIU/ml。5)終止液:0.5M的H2SO4,,6ml5、實(shí)驗(yàn)需要器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀(450±10nm)。2)移液器3)吸水紙4)標(biāo)準(zhǔn)水箱5)蒸餾水6、試劑貯存:未開(kāi)啟的試劑在28℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過(guò)期試劑,酶聯(lián)物、底物溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和零標(biāo)準(zhǔn)品必須在28℃下貯存。微孔反應(yīng)板必須在28℃下貯存。一旦包裝袋被打開(kāi),必須將它小心地嚴(yán)封起來(lái)。如果包被板的包裝被打開(kāi),其免疫活性在6周內(nèi)穩(wěn)定,但前提是必須將它密封在裝有干燥劑的袋子里。7、樣品的采集1)靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下用離心機(jī)分離血清,避免溶血。2)必須蓋住樣本并在實(shí)驗(yàn)之前于2-8℃下可貯存48小時(shí)。樣品需要更長(zhǎng)的貯存時(shí)間,則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣本在檢測(cè)之前必須上下倒置幾次。注意:用于此試劑盒的樣品不能含有任何添加劑。8、試劑的準(zhǔn)備參考標(biāo)準(zhǔn):在凍干的標(biāo)準(zhǔn)品中加入1.0ml雙蒸水。注意:配制好了的標(biāo)準(zhǔn)品可在2-8℃下穩(wěn)定存放2個(gè)月。想要存放更長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)當(dāng)將其凍存于-20℃的環(huán)境下。9、一般注意事項(xiàng)1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將所有試劑和樣本都平衡至室溫,試劑混合時(shí)避免起泡。2)實(shí)驗(yàn)一旦開(kāi)始,所有的步驟應(yīng)完整地進(jìn)行下去。3)每一樣品的取樣都得使用新的取樣吸頭。4)吸光度與溫育時(shí)間和溫度有關(guān),在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后所有的試劑都應(yīng)準(zhǔn)備好,以保證加液時(shí)間的一致。5)本試劑盒Zda吸光度(OD)在1.200-2.000之間(室溫22℃,顯色10分鐘以內(nèi))。如果ZdaOD值高于您酶標(biāo)儀的上限或低于1.000,則相應(yīng)的減少或延長(zhǎng)顯色反應(yīng)的溫育時(shí)間。一般情況下,酶免反應(yīng)的強(qiáng)度與時(shí)間和溫度成線性,這使得操作者應(yīng)當(dāng)適當(dāng)?shù)恼{(diào)整物理化學(xué)環(huán)境。10、實(shí)驗(yàn)步驟1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。2)將黃體生成素標(biāo)準(zhǔn)系列(0;5;20;50;100;200ng/ml)、質(zhì)控和血清樣本分別25μl加入到相應(yīng)的微孔中,每一樣品都得使用新的取樣吸頭。3)加100μl的抗FSH酶聯(lián)物于各孔中。4)混勻10秒,此步驟中完全混勻很重要。5)室溫溫育(22℃)30分鐘。6)棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。7)用蒸餾水洗板5次。8)在吸水紙上把板拍干。9)依原先加樣順序,每孔加100μl底物液。10)室溫(22℃)溫育10分鐘。11)按加底物液順序,每孔加50μl終止液于各孔中。12)10分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)讀吸光度。11、結(jié)果計(jì)算1)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對(duì)其相應(yīng)的濃度值(mIU/ml)進(jìn)行標(biāo)繪,作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)或計(jì)算機(jī)的功能,也可以采用其它的歸納方法進(jìn)行計(jì)算。4)任何稀釋了的樣品在計(jì)算時(shí)都必須將相應(yīng)的稀釋因子考慮進(jìn)去。12、參考值我們強(qiáng)烈建議各個(gè)實(shí)驗(yàn)市都建立自己的正常值和異常值。以下結(jié)果是以一定量正常人群的血液樣本為準(zhǔn)得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:樣本FSH范圍(mIU/ml)男性2.010女性卵泡期2.010循環(huán)中期7.020黃體期2.0--10絕經(jīng)后女性20100-------------------------------------------------------------------------------靈敏度:Z小檢測(cè)卵泡刺激素濃度,1mIU/ml本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司辦公地址:深圳市蛇口工業(yè)區(qū)太子路18號(hào)海景廣場(chǎng)11C研發(fā)基地:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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大鼠促黃體生成素(LH)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
- 大鼠促黃體生成素(LH)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)[詳細(xì)]
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2016-03-03 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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大鼠促黃體激素(LH)試劑盒使用
- 檢測(cè)范圍:48T1.5ng/L-40ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促黃體激素(LH)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠促黃體激素(LH)水平。用純化的大鼠促黃體激素(LH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促黃體激素(LH),再與HRP標(biāo)記的促黃體激素(LH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體激素(LH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠促黃體激素(LH)濃度。[詳細(xì)]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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兔子促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
- 兔子促黃體激素(LH)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-13 00:00
專利
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小鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
- 小鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-09 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
- 大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-27 23:47
標(biāo)準(zhǔn)
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雞促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
- 雞促黃體激素(LH)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 16:42
實(shí)驗(yàn)操作
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人促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
- 人促黃體激素(LH)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-20 15:20
應(yīng)用文章
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羊促黃體激素(LH)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
- 本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷羊(Sheep)促黃體激素(LH)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被促黃體激素(LH)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促黃體激素(LH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。[詳細(xì)]
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2018-12-15 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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