細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)是用存活率反應(yīng)的嗎

毛曉明0 2017-02-16 04:14:20 464 瀏覽

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小熊喵yy 2017-02-17 00:00:00

細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn) 非整倍體無限細(xì)胞系和癌細(xì)胞株中，仍然存在不同細(xì)胞亞群，它們的功能和生長特點(diǎn)有些差異，其中有些亞群細(xì)胞對培養(yǎng)環(huán)境有較大的適應(yīng)性和具有較強(qiáng)的獨(dú)立生存能力，細(xì)胞集落率高。純化細(xì)胞群來自一個(gè)共同的祖細(xì)胞，細(xì)胞遺傳性狀、生物學(xué)特性相似，利于實(shí)驗(yàn)研究。原代培養(yǎng)細(xì)胞和二倍體有限細(xì)胞系，細(xì)胞集落率很低。細(xì)胞集落化培養(yǎng)之前，應(yīng)先測定細(xì)胞集落形成率，以了解細(xì)胞在極低密度條件下的生長能力。目前認(rèn)為僅有腫瘤干細(xì)胞具有形成集落的能力，集落YZ率常用于藥物敏感試驗(yàn)、腫瘤放射生物學(xué)試驗(yàn)。集落YZ率=（1-（實(shí)驗(yàn)組集落形成率/對照組集落形成率））× （一）原理細(xì)胞集落形成率單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細(xì)胞群體，稱為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50個(gè)以上的細(xì)胞，大小在0.3-1.0mm 之間。集落形成率表示細(xì)胞獨(dú)立生存能力。常用方法有平板集落形成試驗(yàn)、軟瓊脂集落形成試驗(yàn)。（二）實(shí)驗(yàn)用品 1.材料：Hela細(xì)胞。 2.器材：（直徑 60mm ）培養(yǎng)皿、細(xì)胞記數(shù)板、燒杯、吸管、離心機(jī)、離心管、廢液瓶、倒置顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱、超凈工作臺、水浴鍋。 3.試劑：Giemsa染液、0.25%胰蛋白酶消化液、血清細(xì)胞培養(yǎng)液、安爾碘、瓊脂。（三）方法 1.平板克隆形成試驗(yàn) 本法適用于貼壁生長的細(xì)胞，包括培養(yǎng)的正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。 (1)對指數(shù)生長期細(xì)胞，采用常規(guī)消化傳代方法，制成細(xì)胞懸液。 (2)細(xì)胞懸液反復(fù)吹打，使細(xì)胞充分分散，單個(gè)細(xì)胞百分率應(yīng)在95%以上。細(xì)胞記數(shù)，并用培養(yǎng)基調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度，待用。 (3)根據(jù)細(xì)胞增殖能力，將細(xì)胞懸液倍比稀釋。一般按照每皿含50、100、200個(gè)細(xì)胞的濃度分別接種5ml細(xì)胞懸液到培養(yǎng)皿（直徑 60mm ）中，以十字方向輕輕晃動培養(yǎng)皿，使細(xì)胞分散均勻。 (4)培養(yǎng)皿置 37℃ 、5%CO2中培養(yǎng)2~3周，中間根據(jù)培養(yǎng)液pH變化適時(shí)更換新鮮培養(yǎng)液。 (5)當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見克隆時(shí)，終止培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液，PBS液小心浸洗2次，空氣干燥。甲醇固定15分鐘，棄甲醇后空氣干燥。用Giemsa染液染色10分鐘，流水緩慢洗去染液，空氣干燥。 2.軟瓊脂集落形成試驗(yàn) 本法適用于非錨著依賴性生長的細(xì)胞，如造血干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞株、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。利用瓊脂液無粘著性又可凝固的特性，將腫瘤細(xì)胞混入瓊脂液中，瓊脂液凝固使腫瘤細(xì)胞置于一定位置，瓊脂中腫瘤細(xì)胞可能向周圍作全方位的移動，因此可以用來檢測腫瘤細(xì)胞的主動移動能力。腫瘤細(xì)胞在適宜培養(yǎng)基中又可以增殖，從而可以測定腫瘤細(xì)胞克隆形成率。造血系統(tǒng)軟瓊脂集落形成試驗(yàn)方法相同，主要用于有關(guān)細(xì)胞分化的研究，但使用培養(yǎng)基不同。（1）同上（1）~（3）步驟。（2）調(diào)整細(xì)胞懸液密度為1×103個(gè)/ml細(xì)胞。（3）制備底層瓊脂，完全溶化的5%瓊脂和 37℃ 左右預(yù)溫的新鮮完全培養(yǎng)液以1：9比例在 40℃ 均勻混合，加入培養(yǎng)皿（直徑 60mm ）中，每皿含0.5%瓊脂培養(yǎng)基2ml，室溫下瓊脂完全凝固。（4）制備上層瓊脂，取 37℃ 不同密度梯度(按照每皿含50、100、200個(gè))的細(xì)胞懸液1.5ml移入小燒杯中，加入 40℃ 、5%瓊脂等體積混勻，即成0.25%半固體瓊脂培養(yǎng)基。配好的半固體瓊脂培養(yǎng)基立即加入鋪有底層瓊脂的培養(yǎng)皿中，室溫下瓊脂凝固。 37℃ 、5%CO2靜置培養(yǎng)2-3周。（四）實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.定期觀察細(xì)胞培養(yǎng)過程中集落的形成。 2.顯微鏡下計(jì)數(shù)大于50個(gè)細(xì)胞克隆數(shù)，然后按下式計(jì)算集落形成率：集落形成率（%）=（集落數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)）×100 （五）注意事項(xiàng) 1.瓊脂對熱和酸不穩(wěn)定，如果反復(fù)加熱，容易降解，產(chǎn)生毒性，同時(shí)瓊脂硬度下降。故瓊脂高壓滅菌( 10磅 15分鐘)后按一次用量進(jìn)行分裝。 2.細(xì)胞懸液中，細(xì)胞分散度>95%。 3.軟瓊脂培養(yǎng)時(shí)，注意瓊脂與細(xì)胞混合時(shí)溫度不要超過 40℃ ，以免燙傷細(xì)胞。 4.接種細(xì)胞密度不宜過高。 5.細(xì)胞在低密度條件下培養(yǎng)，生存率明顯下降，無限細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞株克隆形成率一般在10%以上。但初代培養(yǎng)細(xì)胞和有限細(xì)胞系僅為0.5~5%，甚至為零。為提高集落形成率，必要時(shí)在培養(yǎng)基中添加胰島素、地塞米松等促細(xì)胞克隆形成物質(zhì)。

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自動進(jìn)樣器是實(shí)驗(yàn)設(shè)備嗎？

自動進(jìn)樣器是實(shí)驗(yàn)設(shè)備嗎？

自動進(jìn)樣器作為現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室中不可或缺的一部分，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。隨著科學(xué)研究的進(jìn)步，自動化設(shè)備逐漸成為提高實(shí)驗(yàn)效率、準(zhǔn)確性和重復(fù)性的重要工具。自動進(jìn)樣器到底是否可以被視作實(shí)驗(yàn)設(shè)備？本文將深入分析其功能、應(yīng)用場景以及對實(shí)驗(yàn)的貢獻(xiàn)，以幫助讀者更好地理解自動進(jìn)樣器在實(shí)驗(yàn)室中的重要作用。

自動進(jìn)樣器的基本定義

自動進(jìn)樣器，顧名思義，是一種用于自動化進(jìn)樣的設(shè)備。其主要功能是將樣品精確地送入分析儀器中進(jìn)行檢測。與傳統(tǒng)的手動進(jìn)樣方式不同，自動進(jìn)樣器能夠在不干擾實(shí)驗(yàn)流程的情況下，自動完成樣品的取樣、傳輸和注入等過程。此種設(shè)備的優(yōu)勢在于提高了樣品處理的速度和準(zhǔn)確性，并減少了人為誤差的發(fā)生。

自動進(jìn)樣器的工作原理

自動進(jìn)樣器通常由樣品存儲區(qū)、進(jìn)樣針、控制系統(tǒng)等主要部分構(gòu)成。樣品通過專門的儲存裝置放置在進(jìn)樣器的樣品池中，設(shè)備內(nèi)部的進(jìn)樣針會根據(jù)預(yù)設(shè)的程序，在指定的時(shí)間和順序內(nèi)從樣品池中抽取樣品并注入分析儀器。這一過程可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行編程調(diào)節(jié)，確保每個(gè)樣品的注入量精確一致。

自動進(jìn)樣器在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

自動進(jìn)樣器在眾多領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)中有著廣泛應(yīng)用。以化學(xué)分析為例，許多化學(xué)實(shí)驗(yàn)要求將不同的化學(xué)樣品精確送入氣相色譜儀或液相色譜儀中進(jìn)行定量分析。此時(shí)，自動進(jìn)樣器不僅提高了實(shí)驗(yàn)的自動化水平，而且確保了樣品的輸入，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。

在環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域，自動進(jìn)樣器同樣扮演著重要角色。例如，在水質(zhì)分析中，自動進(jìn)樣器可定時(shí)定量地抽取水樣，確保每個(gè)水樣的分析結(jié)果具有可比性與一致性。在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，自動進(jìn)樣器用于血液、尿液等生物樣本的處理，可以減少實(shí)驗(yàn)人員的工作量，提高數(shù)據(jù)的處理效率。

自動進(jìn)樣器的優(yōu)勢

自動進(jìn)樣器的優(yōu)勢顯而易見。自動化程度高，減少了人工操作的步驟，使實(shí)驗(yàn)過程更加標(biāo)準(zhǔn)化。自動進(jìn)樣器能夠提高樣品的分析速度，特別是在需要大量樣品分析的實(shí)驗(yàn)中，其優(yōu)勢更加突出。自動進(jìn)樣器能有效避免人為錯(cuò)誤，比如注樣不準(zhǔn)確或取樣時(shí)污染等問題，從而提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

另一個(gè)重要的優(yōu)勢是自動進(jìn)樣器能顯著減少實(shí)驗(yàn)人員的勞動強(qiáng)度，尤其是在高通量的實(shí)驗(yàn)中，自動進(jìn)樣器能夠全程無干預(yù)地完成復(fù)雜的取樣過程，大大解放了實(shí)驗(yàn)人員的雙手，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)室資源配置。

結(jié)論

自動進(jìn)樣器作為現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室中不可或缺的設(shè)備之一，無論在化學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域，都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。它通過高效、精確的自動化功能，不僅提高了實(shí)驗(yàn)的速度與準(zhǔn)確性，還有效減少了人為操作失誤，是各類實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)核心設(shè)備。因此，自動進(jìn)樣器毫無疑問可以被視為實(shí)驗(yàn)設(shè)備，并且它的不斷發(fā)展與優(yōu)化將推動更多領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)步。

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