參與評論

評論

登錄后參與評論

全部評論(3條)

• 

  誒呦我呸666 2008-07-06 00:00:00

  細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在適量電解質(zhì)存在的條件下，可逐漸聚集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。 不知道你做的哪種細(xì)胞的凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，也不知道你需要什么樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。我們做的是紅細(xì)胞的，結(jié)果是確定在什么濃度下細(xì)胞發(fā)生凝集.當(dāng)時用的是十二孔的模版，我記得一般是在第六或七孔開始產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象。不過我忘了濃度是多少了，如果你有數(shù)據(jù)應(yīng)該可以算出來的。 紅細(xì)胞置于不同等滲溶液中時，由于對各種溶質(zhì)的通透性不同，因此有的溶質(zhì)分子可透入，有的溶質(zhì)分子則不能透入，能透人的溶質(zhì)分 子的速度也不同。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入紅細(xì)胞使細(xì)胞 內(nèi)溶質(zhì)濃度增加時，導(dǎo)致水的攝人。紅細(xì)胞膨脹到一定程度時，細(xì)胞膜破裂，血紅素溢出即紅細(xì)胞發(fā)生溶血.由于溶質(zhì)透人速度不同，溶血時間也不同. 洋蔥鱗葉外表皮可觀察初生紋孔場 撕取長5mm、寬3 mm的洋蔥鱗葉外表皮，制片，光學(xué)顯微鏡下觀察，可以看到洋蔥細(xì)胞的壁厚度是不均勻的，有的地方較厚，有的地方較薄，這較薄的區(qū)域即初生紋孔場. 至于細(xì)胞骨架，給你個網(wǎng)址吧 http://www.bbioo.com/bio101/2006/7684.htm

  贊(13)

  回復(fù)(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論

• 

  大雪紛飛北風(fēng)緊 2008-07-05 00:00:00

  紅細(xì)胞置于不同等滲溶液中時，由于對各種溶質(zhì)的通透性不同，因此有的溶質(zhì)分子可透入，有的溶質(zhì)分子則不能透入，能透人的溶質(zhì)分 子的速度也不同。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入紅細(xì)胞使細(xì)胞 內(nèi)溶質(zhì)濃度增加時，導(dǎo)致水的攝人。紅細(xì)胞膨脹 到一定程度時，細(xì)胞膜破裂，血紅素溢出即紅細(xì) 胞發(fā)生溶血.由于溶質(zhì)透人速度不同，溶血時間 也不同.

  贊(1)

  回復(fù)(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論

• 

  duzhao杰 2008-07-09 00:00:00

  凝集反應(yīng)（agglutination） 一種血清學(xué)反應(yīng)。顆粒性抗原（完整的病原微生物或紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有電介質(zhì)存在的條件下，經(jīng)過一定時間，出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊。參與凝集反應(yīng)的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素?？煞譃橹苯幽磻?yīng)和間接凝集反應(yīng)兩類。 直接凝集反應(yīng) 顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法是一種定性試驗(yàn)方法?？捎靡阎贵w來檢測未知抗原。若鑒定新分離的菌種時，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽性反應(yīng)。該法簡便快速，除鑒定菌種外，尚可用于菌種分型、測定人類紅細(xì)胞的ABO血型等。試管法是一種定量試驗(yàn)的經(jīng)典方法。可用已知抗原來檢測受檢血清中有無某抗體及抗體的含量。用來協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調(diào)查研究。操作時，將待檢血清用生理鹽水連續(xù)成倍稀釋，然后加入等量抗原，Z高稀釋度仍有凝集現(xiàn)象者，為血清的效價，也稱滴度，以表示血清中抗體的相對含量。診斷傷寒、副傷寒病的肥達(dá)氏反應(yīng)（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反應(yīng)（Wright test）均屬定量凝集反應(yīng)。 間按凝集反應(yīng) 將可溶性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用。在有電介質(zhì)存在的適宜條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)。用做載體的微球可用天然的微粒性物質(zhì)，如人（O型）和動物（綿羊、家兔等）的紅細(xì)胞、活性炭顆?；蚬杷徜X顆粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成，如聚苯乙烯膠乳微球等。由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積，當(dāng)顆粒上的抗原與微量抗體結(jié)合后，就足以出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)，敏感性比直接凝集反應(yīng)高得多。 當(dāng)紅細(xì)胞置于不同等滲溶液中時，由于對各種溶質(zhì)的通透性不同，因此有的溶質(zhì)分子可透入，有的溶質(zhì)分子則不能透入，能透人的溶質(zhì)分 子的速度也不同。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入紅細(xì)胞使細(xì)胞 內(nèi)溶質(zhì)濃度增加時，導(dǎo)致水的攝人。紅細(xì)胞膨脹 到一定程度時，細(xì)胞膜破裂，血紅素溢出即紅細(xì) 胞發(fā)生溶血.由于溶質(zhì)透人速度不同，溶血時間 也不同. 洋蔥鱗葉外表皮可觀察初生紋孔場 撕取長5mm、寬3 mm的洋蔥鱗葉外表皮，制片，光學(xué)顯微鏡下觀察，可以看到洋蔥細(xì)胞的壁厚度是不均勻的，有的地方較厚，有的地方較薄，這較薄的區(qū)域即初生紋孔場. 1 引言 細(xì)胞骨架是真核生物細(xì)胞中的重要結(jié)構(gòu)，起細(xì)胞支架的作用，并參與胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞運(yùn)動、分泌吸收、細(xì)胞通訊、有絲分裂等。由于與細(xì)胞各項(xiàng)功能的密切關(guān)系，細(xì)胞骨架的研究已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)中較具吸引力的領(lǐng)域之一。對細(xì)胞骨架的研究須先對其進(jìn)行觀察。本實(shí)驗(yàn)以洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞為材料對細(xì)胞骨架進(jìn)行觀察研究，基本原理是細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)和大部分蛋白質(zhì)可與去垢劑Triton-100形成去垢劑-蛋白/脂質(zhì)復(fù)合物，從而溶于水中被提取，而結(jié)合成纖維狀的細(xì)胞骨架蛋白則保持其在生活細(xì)胞中存在的狀態(tài)。之后用考馬斯亮藍(lán)對蛋白質(zhì)染色，使骨架系統(tǒng)在光學(xué)顯微鏡下可見，從而對其進(jìn)行觀察研究。 2 材料與方法 2.1 材料 新鮮洋蔥鱗莖，撕取內(nèi)表皮，切成約0.5cm×0.5cm大小。 2.2 器材 光學(xué)顯微鏡、精確天平、0.02ml移液槍、50ml燒杯、玻璃滴管、容量瓶、試劑瓶、載玻片、蓋玻片、鑷子。 2.3 試劑： M-緩沖液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKCl、0.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA[乙二醇雙（α-氨基乙基）醚四乙酸]、1mmol/L巰基乙醇。 6mmol/LPH6.8磷酸緩沖液：0.2149g Na2HPO4·12H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸餾水。 1％TritonX-100：0.5ml 100％TritonX-100加入A液49.5ml。 0.2％考馬斯亮藍(lán)R250：0.2g考馬斯亮藍(lán)R250粉加入甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5ml。 3％戊二醛：6ml 25％戊二醛加入B液44ml。 2.4 方法 將材料置于裝有PH6.8磷酸緩沖液的燒杯中，使其下沉。吸去磷酸緩沖液，用1％TritonX-100處理30分鐘。吸去TritonX-100，用M-緩沖液洗三次，每次10分鐘。0.2％考馬斯亮藍(lán)R250染色30分鐘。用蒸餾水洗1-2次，展平置于載玻片上，加蓋玻片，于普通光學(xué)顯微鏡下觀察。選取骨架形態(tài)清晰、典型的細(xì)胞或細(xì)胞群，在適當(dāng)放大倍數(shù)下攝像。 3 結(jié)果與分析 3.1 細(xì)胞骨架觀察結(jié)果 光學(xué)顯微鏡下洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞的輪廓清晰可見（如圖1），細(xì)胞壁及其分界明顯。10×10倍鏡下可粗略觀察到細(xì)胞內(nèi)粗細(xì)不等的藍(lán)色纖維、團(tuán)塊形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。同一細(xì)胞內(nèi)各處骨架的密集度不均勻，細(xì)胞核區(qū)域的纖維相對密集，藍(lán)色濃重，甚至分辨不出網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，另外可見細(xì)胞壁區(qū)域有零星藍(lán)色纖維分布；相鄰細(xì)胞的密集程度基本一致，但有少數(shù)細(xì)胞有較大不同。10×40倍鏡下可清楚觀察到藍(lán)色的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)確實(shí)由線性纖維交織成，纖維間的結(jié)合點(diǎn)稍膨大。細(xì)胞邊緣骨架較稀疏，但可見由與胞壁相同走向的纖維形成的細(xì)胞質(zhì)膜的輪廓，與細(xì)胞內(nèi)部的纖維通過縱向的纖維相連。相鄰細(xì)胞有纖維穿過胞間的細(xì)胞壁。調(diào)節(jié)顯微鏡焦距可觀察到細(xì)胞不同橫切面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的變化，表明細(xì)胞骨架以三維立體結(jié)構(gòu)的形式分布在整個細(xì)胞內(nèi)。 3.2 細(xì)胞骨架的分布 制片可觀察到較清晰的骨架結(jié)構(gòu)，但是不同切片的細(xì)胞骨架在密集度、分布上有差異，可能是處于不同生理狀態(tài)或處理時間不同所致。對于同一切片，邊緣部分的細(xì)胞骨架較稀疏，說明Triton-100對細(xì)胞骨架蛋白有破壞作用，也反映了細(xì)胞骨架蛋白間的結(jié)合是可逆的。 3.3 核骨架 多數(shù)切片上的細(xì)胞可見藍(lán)色較濃重的核區(qū)（圖1a），但在用Triton處理較久的切片上沒有核區(qū)輪廓，表明核骨架在形態(tài)分布上與細(xì)胞質(zhì)骨架并無明顯（至少在光鏡下）差異，但由于胞核有核纖層支撐的核膜，較難被去垢劑破壞，使去垢劑難以進(jìn)入核中起作用，故需處理較長時間才能得到與胞質(zhì)同樣的效果。 圖1洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞骨架顯微鏡照片 a：10×10倍光鏡下洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞骨架（箭頭示細(xì)胞核區(qū)域重染色區(qū)） b：10×40倍光鏡下洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞骨架（上方箭頭示膜骨架，下方箭頭示胞間連絲處骨架纖維） c：10×100倍光鏡下病變細(xì)胞骨架與正常細(xì)胞的對比（注意兩箭頭處染色對比） 3.4 膜骨架 對于去垢劑的提取作用，細(xì)胞質(zhì)膜首當(dāng)其沖，膜脂，膜蛋白必然很快溶解，但在顯微鏡下可見到緊貼細(xì)胞壁的包繞細(xì)胞質(zhì)的一層結(jié)構(gòu)（圖1b），表明細(xì)胞除胞壁維持形態(tài)外，還有膜骨架（或膜內(nèi)側(cè)細(xì)胞骨架）起作用。而且膜骨架并非孤立起作用，可觀察到它與胞質(zhì)內(nèi)部骨架系統(tǒng)通過與壁垂直的纖維相連。 3.5 胞間連絲 植物相鄰細(xì)胞通過胞間連絲相通，交換物質(zhì)。切片上可見細(xì)胞相鄰胞壁有纖維穿過（圖1b），由此也驗(yàn)證了胞間連絲并非單純的細(xì)胞壁上的穿孔，而是有細(xì)胞骨架參與構(gòu)成的[1]。另外，切片邊緣的細(xì)胞藍(lán)色網(wǎng)絡(luò)較稀釋的現(xiàn)象可由胞間連絲解釋：由于洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞單層排列，與鱗莖內(nèi)部的莖肉細(xì)胞聯(lián)系較少，少或沒有胞間連絲；去垢劑要直接通過胞壁畢竟較難，但可以很快通過胞間連絲進(jìn)入細(xì)胞，故邊緣的細(xì)胞其胞間連絲直接暴露于外部溶液中，去垢劑進(jìn)入起作用并流向內(nèi)側(cè)細(xì)胞，造成較快和較強(qiáng)的反應(yīng)。 3.6 病變細(xì)胞的骨架 細(xì)胞骨架對細(xì)胞的生存有重要作用，故細(xì)胞骨架可在一定程度上反映細(xì)胞的生理狀態(tài)。制片中可見個別細(xì)胞纖維網(wǎng)絡(luò)與附近細(xì)胞相比非常稀疏（圖1c），由于細(xì)胞骨架必須形成一定密度的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)才能維持細(xì)胞的正常功能，可推測這些細(xì)胞發(fā)生病變或已經(jīng)死亡。這些細(xì)胞有一個特征，即胞質(zhì)邊緣的藍(lán)色較濃重，但不呈纖維狀，可以猜測由于病變，骨架纖維斷裂，斷裂片段轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞進(jìn)行再利用。 4 小結(jié) 細(xì)胞骨架在細(xì)胞中呈由蛋白纖絲交織成的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并且處于動態(tài)變化中。細(xì)胞骨架在胞質(zhì)、細(xì)胞核、質(zhì)膜、胞壁中都有分布，參與細(xì)胞形態(tài)維持、物質(zhì)運(yùn)輸、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等作用。處于不同生理狀態(tài)的細(xì)胞其細(xì)胞骨架有變化，可根據(jù)細(xì)胞骨架推測細(xì)胞所處生理階段。 該實(shí)驗(yàn)設(shè)計簡明、結(jié)果易得，但是對于細(xì)胞骨架的研究有許多不足：只能大概提供細(xì)胞骨架形態(tài)分布的情況，不同種類細(xì)胞、同種類細(xì)胞在不同生理狀態(tài)下、細(xì)胞不同部位的形態(tài)分布則沒有涉及；籠統(tǒng)地把不溶于去垢劑的物質(zhì)作為細(xì)胞骨架，并且沒有區(qū)分細(xì)胞骨架的不同成分；處理中將細(xì)胞破壞，觀察的是死細(xì)胞的細(xì)胞骨架，且可能已受到去垢劑的影響；不能觀察細(xì)胞骨架的重要特點(diǎn)——動態(tài)不穩(wěn)定；不能觀察細(xì)胞骨架與細(xì)胞器的相互關(guān)系。綜上，該實(shí)驗(yàn)只是對細(xì)胞骨架 的Z初步研究，但也是Z基本的研究。對細(xì)胞骨架的深入研究要利用細(xì)胞培養(yǎng)，電子顯微鏡和熒光顯微鏡等技術(shù)

  贊(13)

  回復(fù)(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論